(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210135757.6 (22)申请日 2022.02.15 (71)申请人 拱北海关技 术中心 地址 519000 广东省珠海市香洲区银桦路 501号 (72)发明人 李伟刚　周傲白雪 　董铖　蒋晓霞　 汪海波　王敏　罗达圣　陈天蓝　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 林坤华 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于检测上呼吸道易感病毒的试剂盒及检 测方法 (57)摘要 本发明属于核酸检测技术领域， 公开了一种 用于检测上呼吸道易感病毒的试剂盒及检测方 法。 该试剂盒包括数字微流控芯片及位于所述数 字微流控芯片上的反应孔、 进样口； 所述进样口 与所述反应孔相通； 所述反应孔中添加有用于检 测FluA、 FluB、 SARS、 MERS、 COVID ‑19中至少一种 病毒的引物和探针。 采用该试剂盒进行上呼吸道 易感病毒的检测， 具有操作简便、 样品使用量少、 可对多样品进行同步快速检测的特点， 且体现出 良好的检测下限、 灵敏度和特异性， 为临床早期 鉴别呼吸道病原体提供了新的检测手段。 权利要求书1页 说明书7页 序列表3页 附图2页 CN 114657284 A 2022.06.24 CN 114657284 A 1.一种用于检测上呼吸道易感病 毒的引物， 其特征在于， 包括以下引物对a ‑f中的至少 一种： 引物对a， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1‑2所示， 用于检测FluA病毒的M1基因； 引物对b， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 3‑4所示， 用于检测FluB病毒的HA基因； 引物对c， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5‑6所示， 用于检测SARS病毒的ORF1基因； 引物对d， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 7‑8所示， 用于检测M ERS病毒的ORF1基因； 引物对e， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 9‑10所示， 用于检测COVID ‑19病毒的N基因； 引物对f， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 11‑12所示， 用于检测COVID ‑19病毒的ORF1基因。 2.一种用于检测上呼吸道易感病 毒的探针， 其特征在于， 包括以下探针1 ‑6中的至少一 种； 所述探针1 ‑6的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO： 13‑18所示； 探针1， 用于检测 FluA病毒的M1基因； 探针2， 用于检测 FluB病毒的HA基因； 探针3， 用于 检测SARS病毒的ORF1基因； 探针4， 用于检测MERS病毒的ORF1基因； 探针5， 用于检测COVID ‑ 19病毒的N基因； 探针6， 用于检测COVID ‑19病毒的ORF1基因。 3.根据权利 要求2所述的探针， 其特征在于， 所述探针1 ‑6的5’端均标记有荧光基团， 所 述探针1‑6的3’端均标记有淬灭基团。 4.一种用于检测上呼吸道易感病毒的试剂盒， 其特征在于， 包括数字微流控芯片及位 于所述数字微流控芯片上的反应孔、 进样口； 所述进样口与所述反应孔相通； 所述反应孔中 添加有权利要求1所述的引物和权利要求2 ‑3中任一项所述的探针。 5.根据权利要求 4所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述反应孔的数量 不少于1个。 6.权利要求 4‑5中任一项所述的试剂盒的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将聚乙二醇、 水、 权利要求1所述的引物和权利要求2 ‑3中任一项所述的探针混合， 制得预存液； (2)将预存液加入至数字微流控芯片上的反应孔中， 经干燥、 封装， 完成引物和探针的 预存。 7.根据权利要求6所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述封装的步骤为： 将盖板 放置于干燥后的数字微 流控芯片上， 再使用胶水进行固定， 完成封装操作。 8.一种非疾病诊断目的 的上呼吸道易感病毒的检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 以权利要求4 ‑5中任一项所述的试剂盒为检测工具， 将包含有待测样品的微流控芯片 反应体系加入到数字微流控芯片的进样口中， 再将数字微流控芯片置于核酸检测仪中进 行 扩增， 并采用实时荧 光定量PCR仪进行荧 光检测。 9.根据权利要求8所述的检测方法， 其特征在于， 所述微流控芯片反应体系为： 2 ×One  Step Q Probe Mix 12.5 μL， One  Step Q Probe Enzyme Mix 1.25 μL， 待测样品5 μL， 补充水 至25 μL。 10.根据权利要求8所述的检测方法， 其特 征在于， 所述扩增的条件为： 热启动： 95℃5mi n； 循环： 95℃10s、 6 0℃30s， 50次循环。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114657284 A 2用于检测上呼吸道易感病毒 的试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于核酸检测技术领域， 尤其涉及 一种用于检测上呼吸道易感病毒的试剂 盒及检测方法。 背景技术 [0002]呼吸道感染是指致病的微生物人体呼吸道并在呼吸道内繁殖增生， 从而产生一系 列的感染症状。 呼吸道可分为上呼吸道和下呼吸道， 上呼吸道就是我们的鼻咽喉部位， 它可 能会表现为鼻炎、 鼻窦炎、 或者咽炎、 喉炎等等。 下呼吸道主要包括我们的主气道和各级分 支器管， 会出现这种器官的炎症。 [0003]引发呼吸道感染的病原体种类很多， 包括细菌、 真菌、 支原体、 衣原体、 病毒等。 长 期以来呼吸道感染都被认为是 由细菌引起的， 但据 统计， 其中90％的上呼吸道感染疾病都 是由于病毒感染而引起， 仅有10％的上呼吸道感染是因为细菌感染引起的。 引起上呼吸道 感染的病毒种类较多， 有鼻病毒、 冠状病毒、 呼吸道合胞病毒、 流感病毒、 副流感病毒、 腺病 毒等， 其中有一些具有易传染性， 可以空气或飞沫为介质进行传播， 尤其是FluA ‑H5N1、 FluA‑H1N1、 FluB、 SARS、 MERS、 COVID ‑19等病毒的大规模流行， 给人类的生命健康和社会经 济带来巨大伤害。 这些上呼吸道感染的病毒引起的感染症状和季节性流行病毒特点相似， 仅靠临床症状或常规检测方法进 行病原体分析难以确定病原的种类， 无法获得准确的治疗 和预防。 为避免造成群聚传染， 这些传染性极强的病毒需采取早诊断， 早隔离的措施， 因此 快速鉴别呼吸道病原体的检测显得 尤为重要。 [0004]呼吸道病毒的检测方法通常有病毒分离培养法， 涂片检测法， 免疫学检测法， 核酸 分子诊断法等。 其中病毒分离培养 法属于金标准， 特异 性好， 但是耗时长， 灵敏度差， 多用于 科研， 不适用于常规检测。 涂片检测法的成本低且快速， 但是灵敏度低。 免疫学检测法虽有 较高的特异 性和操作简便等优势， 但 其灵敏度低， 易漏检。 核酸分子诊断法在保证了高灵敏 度和特异性的基础上， 缩短了检测时间， 因而已经成为呼吸道病毒感染的最重要的检查测 方法。 [0005]然而， 传统的病毒核酸检测的实验操作步骤复杂、 耗时较长， 且较难对多种病原体 进行多重平行检验， 给实际检测带来了一定的限制。 因此， 本发明希望开发一种步骤更简 便、 可对多种病原体实现同步检测的核酸检测方法和产品， 以提高检测效率和降低检测成 本。 发明内容 [0006]本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。 为此， 本发明提出一 种用于检测上呼吸道 易感病毒的试剂盒及检测方法。 采用该试剂盒进 行上呼吸道易感病毒 的检测， 具有操作简便、 样品使用量少、 可对多样品进行同步快速检测的特点， 且体现出良 好的检测下限、 灵敏度和特异性， 为临床早期鉴别呼吸道病原体提供了新的检测手段。 [0007]本发明提供了一种用于检测上呼吸道易感病毒的引物， 包括以下引物对a ‑f中的说　明　书 1/7 页 3 CN 114657284 A 3