(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210141590.4 (22)申请日 2022.02.16 (71)申请人 浙大城市学院 地址 310015 浙江省杭州市拱 墅区湖州街 51号 申请人 杭州安旭生物科技股份有限公司 (72)发明人 张翀　李杨玲　曾玲晖　刘也涵　 凌世生　董文坤　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 应孔月 (51)Int.Cl. C12N 15/54(2006.01) C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A61K 31/7088(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物 的circPOLK及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于肿瘤治疗靶点和诊 断生物标志物的circPOLK及其应用， 属于肿瘤诊 断技术领域， 其核苷酸序列如图1所示， 为POLK   mRNA第1‑3外显子反向剪接 形成的新的环状RNA 。 相比于正常患者， 肿瘤患者血液外泌体中 circPOLK呈现高表 达， circPOLK的表 达与肺癌 细 胞的迁移、 侵袭和转移的能力呈现正相关， 肺癌 细胞能经外泌体分泌circPOLK促进血管内皮细 胞的迁移和侵袭能力。 由于肿瘤患者发生远处转 移的最常见部位是肺和肝， 因此circPOLK可能作 为肺癌和肝癌的治疗靶点和诊断生物标志物应 用到肿瘤治疗、 肿瘤诊断中， 并为治疗相关的药 物及诊断产品提供了新思路和新方向。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图11页 CN 114517204 A 2022.05.20 CN 114517204 A 1.一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK， 其特征在于， 所述circPOLK 的核苷酸序列如图1所示。 2.一种用于诊断肿瘤发生的试剂盒， 其特征在于， 包括与权利 要求1所述circPOLK特异 性互补配对的分子 探针或用于扩增权利要求1所述circPOLK的引物对。 3.权利要求1所述circPOLK在制备 预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。 4.根据权利要求3所述应用， 其特 征在于， 所述肿瘤包括 肝癌和肺癌。 5.根据权利要求 4所述应用， 其特 征在于， 所述肿瘤包括原发瘤和转移瘤。 6.一种用于预防和/或治疗肿瘤的药物， 其特征在于， 所述药物以权利要求1所述 circPOLK为活性成分。 7.根据权利要求6所述药物， 其特 征在于， 所述肿瘤包括结肝癌和肺癌。 8.根据权利要求7 所述药物， 其特 征在于， 所述肿瘤包括原发瘤和转移瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114517204 A 2一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志物的circPOLK及其 应用 技术领域 [0001]本申请涉及肿瘤诊断技术领域， 尤其涉及 一种用于肿瘤治疗靶点和诊断生物标志 物的circPOLK及其应用。 背景技术 [0002]DNA聚合酶kappa(POLK)是参与跨损伤DNA 合成(TLS)的特殊的DNA聚合酶， 属于Y家 族DNA聚合酶的一种。 POLK基因位于5号染色体长臂l区3带3亚带(5q13.3)， 全长87.5kb， 编 码具有870个氨基酸的蛋白Polk。 POLK通过系列的调控机制使DNA在损 伤的情况下复制， 以 维持基因组的完整性， 同时通过单键及双键断裂修复影响体内氧化应激作用。 缺乏POLK基 因功能拷贝的人细胞系基因组完整性受损， 氧化损伤过程受到影响， 故其在DNA的修复过程 和氧化损伤过程中发挥重要作用。 POLK基因是跨损伤DNA合成相关通路的一个 关键基因， 当 该基因失调后， 会发生DNA断裂、 染色体异常等一系列使基因组不稳定的事件， 并且与肿瘤 进展有关。 有研究发现POLK基因的遗传变异与非小细胞肺癌患者铂类药物的化疗疗效、 不 良反应以及预后相关。 尽管如此， 目前对POLK的探索并不能完全揭示该基因参与肿瘤发生 发展过程的多样性， 总的来说， 以往对POLK基因的研究主要集中在探讨DNA损伤 修复和氧化 应激功能上， 而对POLK基因产生的非编码RNA的研究鲜有报道。 [0003]只有不到2％的人类基因组序列是蛋白质编码基因， 而人类转录组大多数序列是 非编码RNA， 即没有编码蛋白质的能力。 circRNA是一类由mRNA前体反向剪接形成 的不具有 5’帽子和3’poly(A)尾的单链闭合的新型非编码RNA分子。 随着RNAseq技术和生物信息学分 析技术的不断更新和完善， 大量的circRNA被发现广泛表达于真核生物中， 例如在真核细胞 中就有近10％的基因转录可以剪接产生circRNA并发挥 生物学功能。 circRNA在真核细胞中 发挥着广泛的生物学功能， 例如作用于miRNA “海绵”、 蛋白质“海绵”、 调节mRNA的稳定性、 调 节亲本基因转录， 此外， 有研究表明部分circRNA具有翻译功能蛋白的能力。 多项研究表明， circRNA在肿瘤的发生发展和侵 袭或转移中起着至关重要的作用。 [0004]肺癌(lung  cancer)和肝癌(liver  cancer)是目前我国死亡率最高的两种恶性肿 瘤， 同时也是肿瘤转移 最常见的两大转移 性癌种。 吸烟仍然 是诱发肺癌的主要原因， 近年来 二手烟和三手烟也逐渐成为肺癌的诱发因素。 乙型肝炎病毒(HBV)和丙 型肝炎病毒(HCV)是 诱发肝癌的主要危险因素， 同时过量饮酒和黄曲霉毒素也是导致肝癌风险增加的重要原 因。 但肺癌和肝癌的具体病理机制尚不清楚。 肺癌和肝癌的诊断主要依靠影像学诊断、 血清 肿瘤标志物检查和组织活检。 由于早期肺癌和 肝癌缺乏特异性症状， 大多数患者在没有定 期筛查的情况下直到晚期才确诊， 预后一般较差且不可逆。 手术是早期肺癌和肝癌患者的 推荐治疗方法。 对于晚期患者， 放疗和化疗是主要的治疗手段然而， 放疗和化疗往往会产生 严重的副作用， 使患者无法耐受。 近年来， 分子靶向治疗和免疫治疗 日益流行， 但只适用于 某些特定类型的癌症患者， 迫切需要探索更具体、 更有效的癌症诊断和治疗方法。 由于靶向 治疗在肺癌中的应用更为 突出和成熟， 因此我们最终选择肺癌进行深入探究。说　明　书 1/9 页 3 CN 114517204 A 3