(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210140776.8 (22)申请日 2022.02.16 (71)申请人 中国水产科 学研究院黑龙江水产研 究所 地址 150000 黑龙江省哈尔滨市道里区松 发街43号 申请人 内蒙古引绰济辽供 水有限责任公司 (72)发明人 佟广香　刘冰　宋建臣　刘福祥　 韩世成　马凯　匡友谊　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市文 洋专利代理事务 所(普通合伙) 23210 专利代理师 范欣 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01)C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引 物对及性别鉴定方法 (57)摘要 用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引 物对及性别鉴定方法， 涉及一种鉴定鱼类性别的 微卫星标记引物对及性别鉴定方法。 本发明微卫 星标记引物对中上游引物F的序列为5 ’‑ CACCCACACACGTACCAGTC ‑3’， 该引物对中下游引 物R的序列为5 ’ ‑TGTGGAGTTCATGTGGGATG ‑3’。 性 别鉴定方法： 一、 提取待鉴定细鳞鲑的DNA； 二、 PCR反应； 三、 琼脂糖凝胶电泳检测。 本发明方法 通过PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳条带判断 雌、 雄， 仅需提取DNA样本， 可以采集鳍条或鳞片 提取DNA， 对鱼体伤害小， 无需杀鱼， 能够用于早 期性别鉴定 。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 114480671 A 2022.05.13 CN 114480671 A 1.用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引物对， 其特征在于该引物对中上游引物F 的序列为5 ’‑CACCCACACACGTACCAGTC ‑3’， 该引物对中下游引物R的序列为5 ’‑ TGTGGAGTTCATGTGGGATG‑3’。 2.细鳞鲑遗传性别的鉴定方法， 其特 征在于该鉴定方法步骤如下： 一、 提取待鉴定细鳞 鲑的DNA； 二、 PCR反应； PCR反应体系中扩增引物为权利 要求1所述微卫星标记引物对； 上游引物F 的序列为5’ ‑CACCCACACACGTACCAGTC ‑3’， 下游引物 R的序列为5’ ‑TGTGGAGTTCATGTGGGATG ‑ 3’； 三、 琼脂糖凝胶电泳检测， 扩增结果 为0条带的是雌鱼， 扩增结果 为1条带的是雄鱼。 3.根据权利要求2所述的细鳞鲑遗传性别的鉴定方法， 其特征在于步骤二PCR反应体系 中还加入细鳞 鲑18s核糖 体RNA参照引物对； 细鳞鲑18s核糖体RNA参照引物对中的上游引物18SF为5 ’ ‑GGTCCGAAGCGTTTACTTTG ‑3’， 下游引物18 SR为5’ ‑ACCTCTAGCG GCACAATACG‑3’； 步骤三、 琼脂糖凝胶检测， 扩增结果 为1条带的是雌鱼， 扩增结果 为2条带的是雄鱼。 4.根据权利要求3所述的细鳞鲑遗传性别的鉴定方法， 其特征在于步骤二PCR反应体系 为20 μl， 由10 μl  2×PCR Dream Taq master mix、 1μl DNA、 10 μM微卫星标记引物对上游引 物F和下游引物R各1μl、 1μM的细鳞鲑18s核糖体RNA参照引物对上下游引物各1μl及余量的 无酶无菌水组成。 5.根据权利要求4所述的细鳞鲑遗传性别的鉴定方法， 其特征在于步骤二PCR反应条 件： 95℃预变性3min； 95℃变性30s、 64℃退火30s、 72℃延伸30s， 30个循环； 最后72℃延伸 5min。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480671 A 2用于鉴定细鳞 鲑遗传性别的微卫星标记引物对及性别鉴定 方法 技术领域 [0001]本发明涉及一种鉴定鱼类性别的微 卫星标记引物对及性别鉴定方法。 背景技术 [0002]细鳞鲑Brachymystax  lenok(Pallas)， 属鲑形目(Salmoniformes)、 鲑科 (Salmonidae)， 细鳞鱼属(B rachymystax)是我国珍稀、 名贵的冷水性鱼类， 1998年被列入中 国濒危动物红皮书， 濒危 等级为濒危， 2021年野外种群 被列为国家二级保护动物。 [0003]细鳞鲑3～5龄性成熟， 性成熟时无第二性征， 繁殖季节难以通过外形鉴定性别。 细 鳞鲑属于珍稀名贵冷水性鱼类， 野生资源匮乏， 以往鉴定性别需要取性腺， 做石蜡切片， 过 程繁琐， 需要杀鱼， 而且不能鉴定性腺未发育的小鱼。 鉴于以往鉴定性别方法需要杀鱼， 但 在野生调查过程中， 不能将所有的鱼均取性腺， 鉴定性别， 尤其是细鳞鲑为国家 二级保护动 物， 因此不能全面了解野生鱼性比情况。 养殖过程中虽然细鳞鲑雌、 雄生长差异较小， 但细 鳞鲑的卵粒大， 与大西洋鲑相似， 并且鱼卵营养丰富， 可以用来做鱼子酱， 商品价值远远超 过雄鱼， 且性成熟的细鳞鲑雄鱼精液多， 人工繁殖时1尾雄鱼的精液能与3～5尾细鳞鲑雌鱼 配组， 因此商品鱼养殖及后备亲鱼培育时需要优化雌、 雄比例， 避免饲养过多的雄鱼， 造成 不必要的浪费。 发明内容 [0004]为更有效的在早期鉴别细鳞鲑遗传性别， 本发明提供了一种用于鉴定细鳞鲑遗传 性别的微 卫星标记引物对及性别鉴定方法。 [0005]本发明用于鉴定细鳞鲑遗传性别的微卫星标记引物对， 其中该引物对中上游引物 F的序列为5 ’‑CACCCACACACGTACCAGTC ‑3’， 该引物对中下游引物R的序列为5 ’‑ TGTGGAGTTCATGTGGGATG‑3’。 [0006]细鳞鲑遗传性别的鉴定方法： [0007]一、 提取待鉴定细鳞 鲑的DNA； [0008]二、 PCR反应； PCR反应体系中扩增引物为上述微卫星标记引物对； 上游引物F的序 列为5’ ‑CACCCACACACGTAC CAGTC‑3’， 下游引物R的序列为5 ’ ‑TGTGGAGTTCATGTGGGATG‑3’； [0009]三、 琼脂糖凝胶电泳检测， 扩增结果为0条带的是雌鱼， 扩增结果为1条带的是雄 鱼。 [0010]其中， 雄鱼所扩增的条 带为278bp。 [0011]本发明能够简单、 快速的鉴定细鳞鲑遗传性别， 仅需琼脂糖电泳， 无需测 序， 省时、 省力。 [0012]本发明方法通过PCR扩增 产物的琼脂糖凝胶电泳条带判断雌、 雄， 仅需采集鳍条或 鳞片样本提取DNA， 对鱼体伤害 小， 无需杀鱼， 能够用于早期性别鉴定 。说　明　书 1/3 页 3 CN 114480671 A 3