(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210145000.5 (22)申请日 2022.02.17 (71)申请人 海南省农业科 学院热带园艺研究所 地址 571100 海南省海口市流 芳路9号 (72)发明人 赵慧琪　任军方　赵慧琳　黄赛　 李栋梁　张浪　蔡嘉慧　 (74)专利代理 机构 重庆一叶知秋专利代理事务 所(普通合伙) 50277 专利代理师 刘洪雨 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) (54)发明名称 一种海南省火焰兰SSR分子标记引物组及其 应用 (57)摘要 本发明属于分子生物学技术领域， 具体公开 了一种海南省火焰兰SSR分子标记引物组， 所述 SSR分子标记包括(TTG)6 ‑26、 (TTG)6 ‑27、 (TAA) 19‑45、 (AAT)16 ‑47、 (AAC)14 ‑68、 (CTC)10 ‑81、 (TTG)10‑96、 (TTA)11 ‑106、 (TAT)10 ‑114、 (AAT) 13‑117、 (CTT)10 ‑119、 (CTT)6 ‑141、 (CAT)6 ‑159、 (GAA)6‑184、 (ATA)6‑198、 (TTA)6 ‑218和(ATA)6 ‑ 242中的一个或两个以上； 还包括用于扩增SSR分 子标记物的引物。 本发明还公开了上述海南省火 焰兰SSR分子标记引物组的应用。 本发明对海南 省火焰兰 开展三代转录组测序， 挖掘SSR(si mple  sequence  repeat)信息， 开发一批多态性高的 SSR分子标记引物， 为开展海南省火焰兰种群遗 传多样性评价， 揭示其种质资源遗传变异及种群 居群结构， 对海南省火焰兰种质资源的保护与创 新利用提供重要的科 学依据。 权利要求书2页 说明书7页 附图8页 CN 114540530 A 2022.05.27 CN 114540530 A 1.一种海南省火焰兰SSR分子标记引物组， 其特征在于， 所述SSR分子标记包括(TTG)6 ‑ 26、 (TTG)6 ‑27、 (TAA)19 ‑45、 (AAT)16 ‑47、 (AAC)14 ‑68、 (CTC)10 ‑81、 (TTG)10 ‑96、 (TTA)11 ‑ 106、 (TAT)10 ‑114、 (AAT)13 ‑117、 (CTT)10 ‑119、 (CTT)6 ‑141、 (CAT)6 ‑159、 (GAA)6 ‑184、 (ATA)6‑198、 (TTA)6‑218和(ATA)6 ‑242中的一个或两个以上； (1)扩增(T TG)6‑26的正向引物(T TG)6‑26F为： 5' ‑CCCTCAAAGTTCACGAGCTCAG ‑3'； 扩增(TTG)6‑26的反向引物(T TG)6‑26R为： 5' ‑GCCAAGGCAGAGTACGT TTAC‑3'； (2)扩增(T TG)6‑27的正向引物(T TG)6‑27F为： 5'‑CATGTAGC CGACCCCACTTAG‑3'； 扩增(TTG)6‑27的反向引物(T TG)6‑27R为： 5' ‑GCAGTCCCTCCAAAGTCGATAG ‑3'； (3)扩增(TA A)19‑45的正向引物(TA A)19‑45F为： 5' ‑CTTCCCAAGAGCAGT TAATTGAG‑3'； 扩增(TAA)19‑45的反向引物(TA A)19‑45R为： 5' ‑CATATATACT TGCCACCTTAC‑3'； (4)扩增(A AT)16‑4的正向引物(A AT)16‑47F为： 5'‑GAAGGATGGTTTCACGCAAGATC‑3'； 扩增(AAT)16‑4的反向引物(A AT)16‑47R为： 5' ‑GGTTTGCATAAGGGAGGTGTCG‑3'； (5)扩增(A AC)14‑68的正向引物(A AC)14‑68F为： 5' ‑GCAGTATATG GTGAGTACTA ATC‑3'； 扩增(AAC)14‑68的反向引物(A AC)14‑68R为： 5' ‑GTTACACTAG GCTAGTTACATTTC‑3'； (6)扩增(CTC)10 ‑81的正向引物(CTC)10 ‑81F为： 5' ‑CACCCACTACTTCTTCCTTCG‑3'； 扩增(CTC)10 ‑81的反向引物(CTC)10 ‑81R为： 5'‑GATAAGCTCCCCTTCGGTTAAG‑3'； (7)扩增(T TG)10‑96的正向引物(T TG)10‑96F为： 5' ‑CCACACTCT TCAAATGAATAC‑3'； 扩增(TTG)10‑96的反向引物(T TG)10‑96R为： 5' ‑GAGGACTCGAACAAGTACGC‑3'； (8)扩增(T TA)11‑106的正向引物(T TA)11‑106F为： 5'‑GCCAACCATTACCTGTAGTG ‑3'； 扩增(TTA)11‑106的反向引物(T TA)11‑106R为： 5'‑GAAGTTGAGAGGTTAGATATG ‑3'； (9)扩增(TAT)10 ‑114的正向引物(TAT)10 ‑114F为： 5' ‑GACATCCGCTTGCTCTTGACGTC‑3'； 扩增(TAT)10 ‑114的反向引物(TAT)10 ‑114R为： 5' ‑CGCGTGGTGTAGGGCTTAAATCG‑3'； (10)扩增(A AT)13‑117的正向引物(A AT)13‑117F为： 5'‑GCCTCTATCCTGCAATCGAAG‑3'； 扩增(AAT)13‑117的反向引物(A AT)13‑117R为： 5' ‑GAGTGTGTACTGA ATTCTCGCG‑3'； (11)扩增(CTT)10 ‑119的正向引物(CTT)10 ‑119F为： 5' ‑GGCTCACCGGTAAAGACTTCTTC ‑ 3'； 扩增(CTT)10‑119的反向引物(CT T)10‑119R为： 5' ‑CATGGCTCACTA ACCGTCAGAT TG‑3'； (12)扩增(CT T)6‑141的正向引物(CT T)6‑141F为： 5' ‑GACACTGCT TCCCCATCACAC ‑3'； 扩增(CTT)6‑141的反向引物(CT T)6‑141R为： 5'‑CGATGCTGACAG GATAAGACG‑3'； (13)扩增(CAT)6 ‑159的正向引物(CAT)6 ‑159F为： 5' ‑CATCGGGCCCATCTGAATTGTG‑3'； 扩增(CAT)6 ‑159的反向引物(CAT)6 ‑159R为： 5' ‑GATCTGTTGACCTTGTATGAC ‑3'； (14)扩增(GA A)6‑184的正向引物(GA A)6‑184F为： 5' ‑GCTCCATCTCCCAAGCTAGTAC ‑3'； 扩增(GAA)6‑184的反向引物(GA A)6‑184R为： 5' ‑GAGCTTCTTCTTCTTCTCCGG‑3'； (15)扩增(ATA)6 ‑198的正向引物(ATA)6 ‑198F为： 5' ‑CATAGATGT TGAAATTTGGGTG‑3'； 扩增(ATA)6 ‑198的反向引物(ATA)6 ‑198R为： 5' ‑CAGCTTAAGTGGTAGTTGGTTTTC‑3'； (16)扩增(T TA)6‑218的正向引物(T TA)6‑218F为： 5' ‑CGACGGTTCAACTATCAATCTTCC‑3'； 扩增(TTA)6‑218的反向引物(T TA)6‑218R为： 5' ‑GGCAAACTGAAGGACAAACATG‑3'； (17)扩增(ATA)6 ‑242的正向引物(ATA)6 ‑242F为： 5' ‑CATGGAGAATTATTAGAGCTC ‑3'； 扩增(ATA)6 ‑242的反向引物(ATA)6 ‑242R为： 5' ‑CTAGGCGTTGAAAGTGGAAAAG‑3'。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114540530 A 22.根据权利要求1所述的海南省火焰兰SSR分子标记引物组的构建方法， 其特征在于， 包括以下步骤： S1、 选取海南省火焰兰进行转录组测序和组装， 获得un igene； S2、 设计S SR分子标记引物： 对Unigenes进行SSR分子标记搜索， 参数设为二核苷酸重复次数至少六 次， 三核苷酸重 复次数至少五次， 四核苷酸至六核苷酸重复次数至少四 次； 引物的设定标准为： 长度16 ‑22bp， GC含量40 ‑60％， 退火温度40 ‑60℃， PCR产物的长度 为100‑300bp； S3、 SSR标记引物验证和多态性筛 选， 得到包括17对多态性较佳的S SR分子标记引物组。 3.根据权利要求2所述的海南省火焰兰SSR分子标记引物组的应用， 其特征在于， 用于 检测不同火焰兰(Renanthera  coccinea)品种遗传多样性。 4.根据权利要求3所述的海南省火焰兰SSR分子标记引物组的应用， 其特征在于， 用于 对不同火焰兰(Renanthera  coccinea)品种鉴定 。 5.根据权利要求1 ‑9所述的海南省火焰兰S SR分子标记引物组的试剂盒。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114540530 A 3