(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210147270.X (22)申请日 2022.02.17 (71)申请人 上海应用技 术大学 地址 200235 上海市徐汇区漕宝路120号 (72)发明人 于海燕　杨茹梦　李想　尹璐　 钱昌元　左翠花　 (74)专利代理 机构 上海申汇 专利代理有限公司 31001 专利代理师 翁若莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种转基因大豆MON89788品系的实时荧光 PCR检测引物探 针、 试剂盒及方法 (57)摘要 本发明公开了一种转基因大豆MON89788品 系的实时荧光PCR检测引物探针、 试剂盒及方法。 本发明的实时荧光PCR检测引物包括正向引物和 反向引物， 正向引物的核苷酸序列如SEQ  IDNo.1 所示， 反向引 物的核苷酸序列如SEQ  ID No.2所 示 ； 本发明的实时荧光PCR检测探针为 ： MON89788 ‑P1， 其核苷酸序列如SEQ  ID No.3所 示。 本发明针对大豆MON89788品系的特点设计了 效果优异的引物探针、 优化了检测方法， 检测 效 率非常高， 本发明的实时荧光PCR检测方法经验 证具有较高的特异性、 灵敏性以及可重复性， 能 够满足口岸对于转基因大豆检得快、 检得准的要 求。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 114959089 A 2022.08.30 CN 114959089 A 1.一种转基因大豆MON89788品系的实时荧光PCR检测引物探针， 其特征在于， 包括正向 引物MON8978 8‑F1、 反向引物MON8978 8‑R1和探针MON8978 8‑P1； 所述正向引物MON89788 ‑F1的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示， 所述反向引物 MON89788 ‑R1的核苷酸序列如SEQ  ID No.2所示； 所述探针MON89788 ‑P1的核苷酸序列如SEQ   ID No.3所示。 2.一种转基因大豆MON89788品系的实时荧光PCR检测试剂盒， 其特征在于， 包括HR   qPCR Master Mix预混液、 DNA提取试剂以及权利要求1所述的转基因大豆MON89788品系的 实时荧光PCR检测引物探针。 3.一种转基因大豆MON89788品系的实时荧光PCR检测方法， 其特征在于， 包括如下步 骤： 步骤1： DNA模板制备： 提取待检测大豆样品的DNA； 步骤2： DNA浓度及纯度测定： 采样紫外分光 光度计测定所提取的DNA浓度及纯度； 步骤3： 待测样品实时荧光PCR反应： 以提取的大豆样品 的DNA为模板， 利用权利 要求1所 述的转基因大豆MON89788品系的实时荧光PCR检测引物探针配置反应体系， 并进行实时荧 光PCR扩增； 步骤4： 对照实时荧光PCR反应： 在待测样品进行实时荧光PCR反应的同时， 应设置空白 对照、 阴性对照和阳性对照， 以水作为空白对照： 以非转基因大豆材料中提取的DNA作为阴 性对照： 以转基因大豆 MON89788作为阳性对照； 步骤5： 实时荧光PCR扩增分析： 若待测 样品发生特异性扩增， 则表明待测 样品中包含转 基因大豆MON89788 品系的成分； 若待测样 品不发生特异性扩增， 则表 明待测样 品不包含转 基因大豆 MON89788品系的成分。 4.根据权利要求3所述的转基因大豆MON89788品系的实时荧光PCR检测方法， 其特征在 于， 所述步骤3中的反应体系包括： 2 ×HR qPCR Master Mix Ⅰ  12.5 μL、 10 μmol/L正向引物1 μL、 10 μmo l/L反向引物1 μL， 10 μmo l/L探针0.5 μL、 DNA模板2 μL， 双蒸水8 μL， 总体系为25 μL。 5.根据权利要求3所述的转基因大豆MON89788品系的实时荧光PCR检测方法， 其特征在 于， 所述步骤3中实时荧光PCR反应的程序为： 50℃预变性2min， 95℃预变性10min； 95℃变性 15s， 59℃退火延伸1mi n， 所述变性和退火延伸过程共进行45个 循环。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959089 A 2一种转基因大豆MON8978 8品系的实时荧光PCR检测引物探针、 试剂盒及方 法 技术领域 [0001]本发明涉及一种转基因大豆MON89788品系的实 时荧光PCR检测引物探  针、 试剂盒 及方法， 属于生物检测技 术领域。 背景技术 [0002]大豆不仅含有丰富的植物蛋白和食用油脂， 还含有异黄酮、 卵磷脂等有益营  养物 质， 是重要的食用、 饲用和油料作物。 转基因大豆MON89788品系是美国  孟山都公司研发的 具有草甘膦除草剂耐受性的转基因大豆品系。 [0003]为了满足口岸检得快、 检得准的要求， 需开发针对转基因大豆MON89 788 品系的高 效率检测方法。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题是： 如何实现对转基因大豆MON89788品系的  高效率 检测。 [0005]为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种转基因大豆MON89788品系的  实时荧 光PCR检测引物探针， 包括正向引物MON89788 ‑F1、 反向引物  MON89788 ‑R1和探针MON89788 ‑ P1； [0006]所述正向引物MON89788 ‑F1的核苷酸序列如SEQ  IDNo.1所示， 所述反向  引物 MON89788 ‑R1的核苷酸序列如SEQ  ID No.2所示； 所述探针MON89788 ‑P1 的核苷酸序列如 SEQ ID No.3所示； 所述探针MON89788 ‑P1的5’端标记有荧  光基团， 3 ’端标记有与荧光基团 对应的淬灭基团。 [0007]优选地， 所述荧光基团为FAM、 TET、 JOE、 HEX、 CY3、 TAMRA、 ROX、  Texas Red、 VIC、 HEX 或ROX； 所述淬灭基团为BHQ ‑0、 BHQ‑1、 BHQ‑2、 Dabcyl、  Eclipse或TAMRA。 [0008]更优选地， 所述 荧光基团为FAM， 所述淬灭基团为BHQ ‑1。 [0009]本发明还提供了一种转基因大豆MON89788品系的实 时荧光PCR检测试剂  盒， 包括 HR qPCR Master Mix预混液、 DNA提取试剂以及上述的转基因大豆  MON89788品系的实时荧 光PCR检测引物探针。 [0010]本发明还提供了一种转基因大豆MON89788品系的实 时荧光PCR检测方  法， 包括如 下步骤： [0011]步骤1： DNA模板制备： 提取待检测大豆样品的DNA； [0012]步骤2： DNA浓度及纯度测定： 采样紫外分光 光度计测定所提取的DNA浓  度及纯度； [0013]步骤3： 待测样品实 时荧光PCR反应： 以提取的大豆样品的D NA为模板，  利用上述的 转基因大豆MON89788品系的实时荧光PCR检测引物探针配置反应  体系， 并进行实时荧光 PCR扩增； [0014]步骤4： 对照实 时荧光PC R反应： 在待测样品进行实时荧光PC R反应的同  时， 应设置说　明　书 1/5 页 3 CN 114959089 A 3