(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210146394.6 (22)申请日 2022.02.17 (71)申请人 苏州市公安局 地址 215131 江苏省苏州市相城区人民路 3998号 申请人 无锡中德美联生物技 术有限公司 (72)发明人 周如华　王鑫　石云杰　张健　 陈维忠　崔扬　史明皓　梅兴林　 李娟　邵泽香　郭佳佳　朱晨煦　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 专利代理师 余俊杰 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明公开了用于微量降解DNA 检测的八色 荧光复合扩增试剂盒及应用， 所述试剂盒包括扩 增16个STR基因座和1个性别位点的特异性扩增 引物； 其中， 16个基因座为D7S820、 D13S317、 CSF1PO、 TH01、 D2S1338、 D16S539、 TPOX、 D5S818、 D19S433、 D 21S11、 D8S1179、 vWA、 DYS391、 D18S51、 D3S1358、 FGA， 性别位点为Amel。 与现有技术相 比， 本发明具有以下优点： (1)本发明所述试剂盒 为八色荧光复合扩增试剂盒， 可在同等的片段长 度范围内容纳更多的基因座位点； (2)本发明所 述试剂盒基因座扩增片段均小于220bp， 对于降 解微量的检材有较好的检测效果； (3)本发明所 述试剂盒中引物具有特异性强， 灵敏度高， 分型 结果准确的优点， 完全能够满足实际案件检验、 DNA数据库建 设以及亲子鉴定的需要。 权利要求书1页 说明书6页 序列表6页 附图2页 CN 114703291 A 2022.07.05 CN 114703291 A 1.用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括扩 增16个STR基因座和1个性别位点的特异性扩增引物； 其中， 16个基因座为D7S820、 D13S317、 CSF1PO、 TH01、 D2S1338、 D16S539、 TPOX、 D5S818、 D19S433、 D21S11、 D8S1179、 vWA、 DYS391、 D18S51、 D3S13 58、 FGA， 性别位 点为Amel。 2.根据权利要求1所述的用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述特异性扩增引物的序列如下： D7S82 0、 SEQ ID NO:1～2； D13S317、 SEQ  ID NO:3～4； CSF1PO、 SEQ  ID NO:5～6； TH01、 SEQ  ID NO:7～8； D2S1338、 SEQ  ID NO:9～10； D16S539、 SEQ   ID NO:11～12； TPOX、 SEQ  ID NO:13～14； D5S818、 SEQ  ID NO:15～16； Amel、 SEQ  ID NO:17 ～18； D19S433、 SEQ  ID NO:19～20； D21S11、 SEQ  ID NO:21～22； D8S1179、 SEQ  ID NO:23～ 24； vWA、 SEQ  ID NO:25～26； DYS391、 SEQ  ID NO:27～28； D18S51、 SEQ  ID NO:29～30； D3S1358、 SEQ ID NO:31～32； FGA、 SEQ  ID NO:33～34。 3.根据权利要求1所述的用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述特异性扩增引物在扩增体系中的终浓度为： D7S820、 0.06μM； D13S317、 0.15μM； CSF1PO、 0.24 μM； TH01、 0.1 μM； D2S1338、 0.2 μM； D16S539、 0.06 μM； TPOX、 0.12 μM； D5S818、 0.21 μM； Amel、 0.08 μM； D19S433、 0.18 μM； D21S11、 0.24 μM； D8S1179、 0.12 μM； v WA、 0.24 μM； DYS391、 0.2 μM； D18 S51、 0.2 μM； D3S13 58、 0.2 μM； FGA、 0.24 μM 。 4.根据权利要求1所述的用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述特异性扩增引物分为七组： D7S820、 D 13S317、 CSF1PO为第 一组， TH01、 D2S1338为第 二组， D16S539、 TP OX、 D5S818为第三组， Amel、 D19S433、 D2 1S11为第四组， D8S1179、 vWA为第 五组， DYS391、 D18S51为第六组， D3S1358、 FGA为第七组； 每对引物中至少一条采用荧光染料 标记其5’端。 5.根据权利要求4所述的用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述荧光染料为6 ‑FAM、 HEX、 T13、 SUM、 LYN、 PUR、 H13中的任一种， 且各组引物采用的荧光 染料均不同， 内标选用橙色荧 光SIZ。 6.根据权利要求5所述的用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述荧光染料为： 第一组6 ‑FAM、 第二组HEX、 第三组T13、 第四组SUM、 第五组LYN、 第 六组 PUR、 第七组H13 。 7.根据权利要求1所述的用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述试剂盒包括反应混合液、 等位基因分型标准物Allelic  Ladder、 DNA标准品、 sdH2O 和荧光分子量内标； 其中反应混合液的组成为： MgCl2 7.5mM,Tris ‑HCl 125mM， KCl  125mM， dNTPs 7.5mM， BSA  2g/L， 热启动Taq酶1U/uL。 8.根据权利要求1所述的用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述引物的PCR产物扩增子片段长度均小于2 20bp。 9.权利要求1 ‑8任一所述用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒在法医鉴 定、 亲权鉴定或DNA 家谱构建中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述试剂 盒应用的样本包括陈旧样本、 降 解样本。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114703291 A 2用于微量降解DNA检测的八色荧光复合 扩增试剂盒及应用 技术领域 [0001]本发明属于法医遗传学检测技术领域， 涉及一种八色荧光标记复合扩增检测系 统， 具体为用于微 量降解DNA检测的八 色荧光复合扩增试剂盒及应用。 背景技术 [0002]短串联重复序列基因座(short  tandem repeat， STR)作为继限制性片段长度多态 性之后的第二代遗传标记， 自二十世纪八九十年代以来， 被广泛应用于法医物证学方面相 关的研究及鉴定， 是目前应用最广泛的遗传标记之一。 STR标记与其他遗传标记物相比， STR 基因座片段小、 容易扩增， 更适用于微量和降解检材， 且多个STR基因座可以同时进行复合 扩增， 具有快速、 高效、 准确、 灵敏、 信息量大等优点， 被广泛应用于法医物证中的个体识别 和亲子鉴定 。 [0003]目前法医检测领域中应用于STR检测的主流试剂盒大多采用五色或者六色荧光复 合扩增技术， 扩增片段最大可达600bp， 检测的STR位点可达到20 ‑30个。 此类试剂盒在扩增 正常样本时可获得较多的STR位点信息， 但扩增降解与微量的样本， 效果并不理想， 整体均 衡性呈现前高后低， 而且300bp之后的扩增片段有极大的丢峰可能性， 难以满足检测的需 要。 发明内容 [0004]解决的技术问题： 为了克服现有技术的缺陷， 能够在微量降解DNA样本中获得更多 的基因座位点信息， 本发明提供了用于微量降解DNA检测的八色荧光复合扩增试剂盒及应 用。 [0005]技术方案： 用于微量降解D NA检测的八色荧光复合扩增试剂盒， 所述试剂盒包括扩 增16个STR基因座和1个性别位点的特异性扩增引物； 其中， 16个基因座为D7S820、 D13S317、 CSF1PO、 TH01、 D2S1338、 D16S539、 TPOX、 D5S818、 D19S433、 D21S11、 D8S1179、 vWA、 DYS391、 D18S51、 D3S13 58、 FGA， 性别位 点为Amel。 [0006]优选的， 所述特异 性扩增引物的序列如下： D7S820、 S EQ ID NO:1～2； D13S 317、 SEQ  ID NO:3～4； CSF1PO、 SEQ  ID NO:5～6； TH01、 SEQ  ID NO:7～8； D2S1338、 SEQ  ID NO:9～10； D16S539、 SEQ  ID NO:11～12； TPOX、 SEQ  ID NO:13～14； D5S818、 SEQ  ID NO:15～16； Amel、 SEQ ID NO:17～18； D19S433、 SEQ  ID NO:19～2 0； D21S11、 SEQ  ID NO:21