(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210150406.2 (22)申请日 2022.02.18 (71)申请人 大连海洋大学 地址 116023 辽宁省大连市沙河口区黑石 礁街52号 (72)发明人 刘奇　刘鹰　闫红伟　田涛　 刘滨玮　张涛　孙群汶　 (74)专利代理 机构 北京中创博腾知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11636 专利代理师 孙福岭 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种许氏平鮋放 流回捕贡献率评估的方法 (57)摘要 本发明涉及一种许氏平鮋放流回捕贡献率 评估的方法， 属于渔业资源领域。 本发明所述方 法包括如下步骤： (1)在许氏平鮋增殖放流前， 待 雌性亲本产卵后获取其鳍条， 提取基因组DNA； (2)采用优选的引物对步骤(1)提取的基因组DNA 进行PCR反应； (3)放流； (4)回捕； (5)对步骤(4) 回捕的个体进行鉴定、 识别、 放流回捕贡献率评 估。 本发明优选了9对高多态性且稳定的微卫星 位点组合， 在保证识别准确率的前提下， 节省了 成本。 权利要求书1页 说明书4页 序列表3页 附图3页 CN 114959054 A 2022.08.30 CN 114959054 A 1.一种鉴别许氏平鮋的引物， 其特 征在于： 所述引物的序列如下： XU‑1正向 序列为 ： 5 ' ‑GGAGCAGTGGTGAAGTAG ‑3 '， 反向 序列为 ： 5 ' ‑ CATAATGATAGA AAGGGTAG‑3'； XU‑2正向序列为： 5' ‑TTCGCTATTATCAGGT GG‑3'， 反向序列为： 5' ‑GGAGACGGAGTAAAT GCT‑ 3'； XU‑3正向序列为： 5' ‑TAGGGACAAAGGACAGGG ‑3'， 反向序列为： 5' ‑GCAGCAAGACCGAACTCT ‑ 3'； XU‑4正向序列为： 5' ‑AGCTCTGGACGTGATAGG‑3'， 反向序列为： 5' ‑CTGTCACTCAGGGAAAGG ‑ 3'； XU‑5正向序列为： 5 ' ‑CCCATCACTGAATAAAGAAGCA ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ AGGTCTCTGTG GACTGAAGGAG‑3'； XU‑6正向序列为： 5' ‑GCTCAAATTAGCCATCCG ‑3'， 反向序列为： 5' ‑AGGTTATT GCTGGTTTCG‑ 3'； XU‑7正向序列为 ： 5 ' ‑TCAGGCTGTCCACAACAAT ‑3 '， 反向序列为 ： 5 ' ‑ CTGGCAGGATGCTTCTTT‑3'； XU‑8正向序列为： 5' ‑GCATGAGGGAGT GAATGT‑3'， 反向序列为： 5' ‑TGTTGGCTTATCAGT GTC‑ 3'； XU‑9正向序列为： 5' ‑CTAGAAGCAGCACAACAT ‑3'， 反向序列为： 5' ‑GTGACAAACGGGAGAAAC ‑ 3'。 2.一种包 含权利要求1所述引物的试剂盒。 3.根据权利要 求2所述的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包 括PCR缓冲液、 MgCl2、 dNTP、 Tap DNA聚合酶。 4.一种许氏平鮋放 流回捕贡献率评估的方法， 其特 征在于： 所述方法包括如下步骤： (1)在许氏平鮋增殖放 流前， 待雌性亲本产卵后获取其鳍条， 提取基因 组DNA； (2)采用权利要求1所述引物对步骤(1)提取的基因 组DNA进行PCR反应； (3)放流； (4)回捕； (5)对步骤(4)回捕的个 体进行鉴定、 识别、 放 流回捕贡献率评估。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于： 所述步骤(2)中引物的正向引物的5'端采 用TAMRA、 H EX或FAM荧 光标记。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于： 所述步骤(5)中鉴定的方法为： 获取步骤 (4)回捕个体的鳍条， 提取基因组DNA并采用权利要求1所述引物对其进行PCR反应， 毛细管 电泳多重测序。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959054 A 2一种许氏平鮋放流回捕贡献率评估的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及一种许氏平鮋放 流回捕贡献率评估的方法， 属于渔业资源领域。 背景技术 [0002]许氏平鲉是广泛分布于我国渤海、 黄海和东海近海海域的一种底层岩礁性鱼类。 许氏平鲉肉质细嫩、 脂肪含量较少， 且抗病力较强、 无远距离洄游习性， 是我国北方重要的 渔业经济种类， 也是我国北 方重要的增殖放 流品种。 [0003]增殖放流是指通过人工进行干预的方式， 将人工培育 的各类渔业生物的卵子、 幼 体或成体投放到天然 水域， 以恢复或增加种群的数量， 改善和优化水域的群落结构 。 2021年 我国许氏平鲉增殖放流数量就超过1671余万尾， 这对恢复近海渔业和增加海洋 经济产值有 着积极作用。 [0004]一直以来， 在增殖放流过程中， 因无法准确区分放流个体和野生个体， 增殖放流效 果难以合理分析， 造成目前我国增殖放 流绩效评估不足。 发明内容 [0005]本发明通过选用分子生物学标记， 使个体识别更精确， 能有效评估许氏平鮋放流 回捕贡献率， 解决了上述的问题。 [0006]本发明提供了一种鉴别许氏平鮋的引物， 所述引物的序列如下： [0007]XU‑1正向序列为： 5 ' ‑GGAGCAGTGGTGAAGTAG ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ CATAATGATAGA AAGGGTAG‑3'； [0008]XU‑2正向序列为： 5 ' ‑TTCGCTATTATCAGGTGG ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ GGAGACGGAGTAAATGCT‑3'； [0009]XU‑3正向序列为： 5 ' ‑TAGGGACAAAGGACAGGG ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ GCAGCAAGACCGAACTCT‑3'； [0010]XU‑4正向序列为： 5 ' ‑AGCTCTGGACGTGATAGG ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ CTGTCACTCAG GGAAAGG‑3'； [0011]XU‑5正向序列为： 5' ‑CCCATCACTGAATAAAGAAGCA ‑3'， 反向序列为： 5' ‑ AGGTCTCTGTG GACTGAAGGAG‑3'； [0012]XU‑6正向序列为： 5 ' ‑GCTCAAATTAGCCATCCG ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ AGGTTATTGCTGGTTTCG‑3'； [0013]XU‑7正向序列为： 5 ' ‑TCAGGCTGTCCACAACAAT ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ CTGGCAGGATGCTTCTTT‑3'； [0014]XU‑8正向序列为： 5 ' ‑GCATGAGGGAGTGAATGT ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ TGTTGGCTTATCAGTGTC ‑3'； [0015]XU‑9正向序列为： 5 ' ‑CTAGAAGCAGCACAACAT ‑3 '， 反向序列为： 5 ' ‑ GTGACAAACGGGAGAAAC‑3'。说　明　书 1/4 页 3 CN 114959054 A 3