(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210152016.9 (22)申请日 2022.02.18 (71)申请人 江苏省中 医院 地址 210029 江苏省南京市汉中路15 5号 申请人 南京世和基因生物技 术股份有限公 司 (72)发明人 郑燕影　陈劼　张珦　孙怡　应葳　 储乐乐　逄娇慧　白娜　 (74)专利代理 机构 南京新慧恒 诚知识产权代理 有限公司 32424 专利代理师 邓唯 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6874(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种MET融合基因的检测方法、 试剂盒以及 探针库 (57)摘要 本发明开发了基于杂交选择而捕获特定MET 融合基因序列的方法， 采用该方法可以获得成几 千倍富集的MET融合基因DNA片段， 该经富集的 MET融合基因片段样本可以选择性地应用于 各种 基因检测技术， 特别是可以应用下一代测序技术 进行基因突变、 缺失、 扩增、 和融合等方面的检 测， 以取得高效且准确的结果。 权利要求书1页 说明书6页 序列表36页 附图3页 CN 114561467 A 2022.05.31 CN 114561467 A 1.一种MET家族的融合基因突变的探针库， 其特征在于， 其中包括有核苷酸序列如SEQ   IDNO.1～197 所示的任意 一条探针， 或者与其具有相同功能的探针。 2.根据权利要求1所述的MET家族的融合基因突变的探针库， 其特征在于， 探针库中包 括上述的全部 探针。 3.根据权利要求1所述的MET家族的融合基因突变的探针库， 其特征在于， 所述的具有 相同功能的探针， 是指将SEQ  ID NO.1～197任意一条探针经过一个或几个核苷酸的取代 和/或缺失和/或添加且具有相同杂交捕获功能的探针。 4.根据权利要求1所述的MET家族的融合基因突变的探针库， 其特征在于， 所述的具有 相同功能的探针与原探针具有80％以上相同的碱基， 更优选是90％以上相同碱基， 再优选 是95％以上相同碱基。 5.一种MET融合基因的检测方法， 其特 征在于， 包括： 步骤1， 获得待检测样本的DNA； 步骤2， 对待测 样本的DNA与探针进行杂交， 并进行捕获， 进行NGS测序后， 下机数据比对 至参考基因组数据进行分析， 获得M ET融合基因的信息； 其中的探针是指权利要求1所述的探针库。 6.根据权利要求5所述的MET融合基因的检测方法， 其特征在于， 所述的待测样本来源 于细胞、 组织或体液样本； 所述的待测样本的DNA是 经直接提取 得到的， 或者经提取mRNA后合成得到的cDNA。 7.根据权利 要求5所述的MET融合基因的检测方法， 其特征在于， 所述的待测 样本的DNA 经过了片段化处 理， 并具有15 0‑600bp的长度。 8.根据权利要求5所述的MET融合基因的检测方法， 其特征在于， 所述的检测方法是用 于非治疗与诊断用途。 9.试剂盒， 其特 征在于， 其中包 含有权利要求1所述的探针库。 10.根据权利要求9所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的试剂 盒中还包括： DNA提取试剂， 用于对待测样本的DNA进行提取； 还包括： RNA提取试剂， 用于对待测样本的mRNA进行提取； 反转录试剂盒， 用于对提取得 到的mRNA反转录为cDNA。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114561467 A 2一种MET融合基因的检测方 法、 试剂盒以及 探针库 技术领域 [0001]本发明涉及一种MET融合基因的检测方法、 试剂盒以及探针库， 属于基因测 序技术 领域。 背景技术 [0002]MET基因位于人7号染色体的长臂， 编码肝细胞生长因子受体HGF， 具有酪氨酸激酶 活性。 MET与HGF结合后， 发生自身磷酸化并激活下游PI3K/ALK、 RAS ‑MAPK、 β‑连环蛋白信号 通路等多条信号通路。 MET基因与多种癌基因产物和调节蛋白相关， 参与细胞信息传导、 细 胞骨架重排的调控， 是细胞增殖、 分化、 运动、 血管生成和组织再生的重要调节因子。 在健康 的成体细胞中， HGF/MET表达水平较低， 除了在 组织损伤时， 几乎没有活性。 而在癌细胞中， HGF/MET经常过表达， 而这种过表达与肿瘤发生、 转移和较差的整体预后相关。 [0003]MET信号的致癌激活在许多恶性肿瘤中发现， 包括消化系统肿瘤、 造血系统肿瘤， 骨肉瘤、 黑色素瘤、 神经胶质瘤等。 HGF/MET通路异常与肿 瘤的发生和转移相关并诱导耐药 性的产生， 包括MET基因重排、 基因突变、 基因扩增和蛋白过表达。 在脑胶质瘤中MET主要以 融合形式存在。 目前FDA已经批准四款MET抑制剂， 分别为特普替尼、 卡马替尼、 卡博替尼和 克唑替尼。 据文献报道， 检测到PTPRZ1 ‑MET融合的胶质母细胞瘤患者， 对MET抑制剂克唑替 尼的治疗有2个月的响应， 并且肿瘤持续缩小。 [0004]MET融合在胶质瘤 中发生率约2.8 ‑5％， 在复发儿童胶质瘤 中发生率约10％。 据统 计， 脑胶质瘤中MET 融合伴侣基因有多种， 其中PTPRZ1占比约36 ‑60％； 其次是CAPZA2， 占比 约18‑33％； 再者S T7， TPR， P TN占比分别为27％、 9％、 5％； 此外还有报道TRIM24、 TFG、 CLIP2、 DNAH14、 PHTF2、 HLA ‑DRB1、 CFTR、 HLA ‑DRB5、 RRBP1等。 从高级别成人胶质瘤整体来看， PTPRZ1‑MET发生率约10‑16％。 发明内容 [0005]本发明提供了一种基于NGS测序的NRG1融合基因的检测 方法， 本方法能够在低样 本量的情况下， 准确地检测出NRG1融合基因的发生， 不仅能够检测得到已报道的融合形式， 还能检测得到未报道的新的融合。 [0006]一种MET家族的融合基因突变的探针库， 其中包括有核苷酸序列如SEQ  ID NO.1～ 197所示的任意 一条探针， 或者与其具有相同功能的探针。 [0007]优选的： 探针库中包括上述的全部 探针。 [0008]优选的： 所述的具有相同功能的探针， 是指将SEQ  ID NO.1～197任意一条探针经 过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同杂交捕获功能的探针。 [0009]优选的： 所述的具有相同功能的探针与原探针具有80％以上相同的碱基， 更优选 是90％以上相同碱基， 再优选是95％以上相同碱基。 [0010]一种MET融合基因的检测方法， 包括： [0011]步骤1， 获得待检测样本的DNA；说　明　书 1/6 页 3 CN 114561467 A 3