(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210149600.9 (22)申请日 2022.02.18 (66)本国优先权数据 202110797547.9 2021.07.14 CN (71)申请人 呈诺再生医学 科技 （珠海横琴新区） 有限公司 地址 519000 广东省珠海市横琴新区粤澳 合作中医药科技产业园飞蓬路30号3 栋201、 301室 (72)发明人 尹乐　顾雨春　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 代理人 朱萍 (51)Int.Cl. C07K 7/08(2006.01)C12N 15/11(2006.01) C07K 19/00(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) G01N 33/574(2006.01) (54)发明名称 共培养CIK细胞和TABP-EIC-WT N细胞联合在 治疗前列腺癌中的用途 (57)摘要 本发明公开了共培养CIK细胞和TABP ‑EIC‑ WTN细胞联合在治疗前列腺癌中的用途， 所述 TABP‑EIC‑WTN细胞为由一个或多个本发明经筛 选得到的WT N多肽通过linker串联作为抗原识别 区得到的肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞， 经 实验验证发现， 所述共培养CIK细胞和TABP ‑EIC‑ WTN细胞两者联合对前列腺癌具有较好的治疗效 果， 本发现为前列腺癌的治疗提供了一种新的有 效治疗方法。 权利要求书3页 说明书15页 序列表5页 附图18页 CN 114315977 A 2022.04.12 CN 114315977 A 1.一种用于治疗癌症的药物 组合物， 其特征在于， 所述药物组合物包含共培养CIK细胞 和肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞； 优选地， 所述癌症为前列腺癌。 2.根据权利要求1所述的药物组合物， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫 细胞中肿瘤抗原结合肽的构成为WTN多肽区 ‑铰链区‑跨膜结构域 ‑共刺激结构域 ‑初级信号 传导结构域； 优选地， 所述 WTN多肽区包括多个WTN多肽的重复和多个WTN多肽的重复之间的l inker； 更优选地， 所述 WTN多肽为 一种与PSMA特异性结合的多肽； 最优选地， 所述 WTN多肽选自以下组中的任意 一种： (1)如SEQ ID NO:1所示的多肽； (2)与如SEQ  ID NO:1所示的多肽相比， 具有一个或几个氨基酸的置换、 缺失或添加的 物质； (3)与如SEQ  ID NO:1所示的多肽的氨基酸序列具有至少80％、 至少85％、 至少90％、 至 少91％、 至少92％、 至少93％、 至少94％、 至少95％、 至少96％、 至少97％、 至少98％、 至少 99％的相同性的多肽； 最优选地， 所述 WTN多肽为如SEQ  ID NO:1所示的多肽； 最优选地， 所述 WTN多肽的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 3.根据权利要求2所述的药物组合物， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽的铰链区为 CD8α 铰链区； 优选地， 所述CD 8α 铰链区的氨基酸序列如SEQ  ID NO:3所示； 更优选地， 所述CD 8α 铰链区的核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示； 优选地， 所述 跨膜结构域 为2B4跨膜结构域； 更优选地， 所述2B4 跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:5所示； 最优选地， 所述2B4 跨膜结构域的核苷酸序列如SEQ  ID NO:6所示； 优选地， 所述共刺激结构域 为2B4共刺激结构域； 更优选地， 所述2B4共刺激结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:7所示； 最优选地， 所述2B4共刺激结构域的核苷酸序列如SEQ  ID NO:8所示； 优选地， 所述初级信号传导结构域 为NKG2D初级信号传导结构域； 更优选地， 所述 NKG2D初级信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:9所示； 最优选地， 所述 NKG2D初级信号传导结构域的核苷酸序列如SEQ  ID NO:10所示； 最优选地， 所述肿瘤抗原结合肽的组成为WTN多肽区 ‑CD8α 铰链区 ‑2B4跨膜结构域 ‑2B4 共刺激结构域 ‑NKG2D初级信号传导结构域； 最优选地， 所述肿瘤抗原结合肽的氨基酸序列如SEQ  ID NO:11所示； 最优选地， 所述肿瘤抗原结合肽的核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示。 4.根据权利要求1所述的药物组合物， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫 细胞包括肿瘤抗原结合肽 ‑工程化NK细胞、 肿瘤抗原结合肽 ‑工程化T细胞、 肿瘤抗原结合 肽‑工程化B细胞、 肿瘤抗原结合肽 ‑工程化巨噬细胞； 优选地， 所述肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞为肿瘤抗原结合肽 ‑工程化NK细胞。 5.根据权利要求1所述的药物组合物， 其特征在于， 共培养CIK细胞为与前列腺癌细胞权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114315977 A 2共培养的DC‑CIK细胞； 优选地， 所述共培 养CIK细胞中包 含CD8+T细胞。 6.共培养CIK细胞和肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞联合在制备用于治疗癌症的药 物中的应用； 优选地， 所述癌症为前列腺癌。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞为 权利要求1 ‑4任一项中所述的肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞， 所述共培养CIK细胞为权 利要求5中所述的共培 养CIK细胞。 8.一种共培 养CIK细胞的制备 方法， 其特 征在于， 所述方法包括如下步骤： (1)DC细胞的培 养； (2)CIK细胞的培 养； (3)将步骤(1)培养得到的DC细 胞和步骤(2)培养得到的CIK细 胞在培养基中混合， 加入 前列腺癌细胞共培 养， 收集悬浮的DC ‑CIK混合物即为共培 养CIK细胞。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特 征在于， 所述 步骤(1)包括如下步骤： (a)第0天， 在DC细胞生长 培养基中培 养PBMC细胞； (b)第3天， 更 换DC细胞生长 培养基； (c)第6天， 在DC细胞生长 培养基中添加DC细胞成熟因子； (d)第8天， 收集细胞， 得到DC细胞； 优选地， 步骤(a)中所述DC细胞生长 培养基中添加的物质包括FBS、 DC细胞培 养因子； 更优选地， 步骤(a)中所述DC细 胞生长培养基中添加的物质包括5％FBS、 2U/mL  DC细胞 培养因子； 优选地， 步骤(c)中所述DC细胞成熟因子最终浓度为2U/mL； 优选地， 所述 步骤(2)包括如下步骤： (a)第0天， 在CIK细胞活化培 养基中培 养PBL细胞； (b)第3、 4、 6天， 用CIK细胞增殖培 养基补充细胞培 养物； (c)第8天， 收集细胞， 得到 CIK细胞； 更优选地， 步骤(a)中所述CIK细胞活化培养基中添加的物质包括KBM551、 FBS、 抗CD3抗 体、 IFN‑γ、 IL‑1α 、 IL‑2； 最优选地， 步骤( a)中所述CIK细胞活化培养基中添加的物质包括KBM551、 3％FBS、 50ng/mL抗CD3抗体、 10 00U/mL IFN‑γ、 100U/mL IL‑1α 、 500U/mL IL‑2； 更优选地， 步骤(a)中所述PBL细胞的细胞密度为1.5 ×106/mL； 更优选地， 步骤(b)中所述CIK细胞增殖培 养基中添加的物质包括KBM 551、 FBS、 I L‑2； 最优选地， 步骤(b)中所述CIK细胞增殖培养基中添加的物质包括KBM551、 3％FBS和 500U/mL IL‑2； 优选地， 所述 步骤(3)中培 养基为CIK细胞增殖培 养基； 更优选地， 所述DC细胞的细胞密度为 4×107/mL； 更优选地， 所述CIK细胞的细胞密度为1 ×108/mL； 更优选地， 所述前列腺癌细胞的细胞密度为1 ×107/mL； 更优选地， 所述共培 养的条件为5％CO2、 37℃、 24h；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114315977 A 3