(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210149596.6 (22)申请日 2022.02.18 (66)本国优先权数据 202110797547.9 2021.07.14 CN (71)申请人 呈诺再生医学 科技 （珠海横琴新区） 有限公司 地址 519000 广东省珠海市横琴新区粤澳 合作中医药科技产业园飞蓬路30号3 栋201、 301室 (72)发明人 尹乐　顾雨春　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 代理人 朱萍 (51)Int.Cl. C07K 7/08(2006.01)C12N 15/11(2006.01) C07K 19/00(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) G01N 33/574(2006.01) (54)发明名称 用于前列腺癌治疗的联合制剂及其医药用 途 (57)摘要 本发明公开了用于前列腺癌治疗的联合制 剂及其医药用途， 所述联合制剂为肿瘤抗原结合 肽‑工程化免疫细胞、 PD ‑L1抑制剂和共培养CIK 细胞三者联合形成的制剂， 本发 明首次将上述三 者联合应用于前列腺癌的治疗中， 三者联合应用 可显著增强对肿瘤细胞的抑制作用， 对前列腺癌 的治疗效果较好， 具有良好的生物治 疗前景。 权利要求书3页 说明书15页 序列表5页 附图18页 CN 114315976 A 2022.04.12 CN 114315976 A 1.肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞、 PD ‑L1抑制剂和共培养CIK细胞联合在制备用于 治疗癌症的联合制剂中的应用； 优选地， 所述癌症为前列腺癌。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞中 肿瘤抗原结合肽的构成为WTN多肽区 ‑铰链区‑跨膜结构域 ‑共刺激结构域 ‑初级信号传导结 构域或WTN多肽区 ‑铰链区‑跨膜结构域 ‑初级信号传导结构域； 优选地， 所述肿瘤抗原结合肽的构成为WTN多肽区 ‑铰链区‑跨膜结构域 ‑共刺激结构 域‑初级信号传导结构域； 优选地， 所述 WTN多肽区包括多个WTN多肽的重复和多个WTN多肽的重复之间的l inker； 更优选地， 所述 WTN多肽为 一种与PSMA特异性结合的多肽； 最优选地， 所述 WTN多肽选自以下组中的任意 一种： (1)如SEQ ID NO:1所示的多肽； (2)在如SEQ  ID NO:1所示的多肽的第1位、 第2位、 第3位、 第4位、 第5位、 第6位、 第7位、 第8位、 第9位、 第10位、 第11位和第12位中的一个或多个位置发生取代、 缺失或添加后形成 的产物； (3)在如SEQ  ID NO:1所示的多肽主链 或侧链末端的氨基、 羧基、 巯基、 酚羟基、 咪唑基、 胍基、 吲哚基、 甲硫基中的一个或多个位 点进行化学修饰后形成的产物； 最优选地， 所述 WTN多肽为如SEQ  ID NO:1所示的多肽； 最优选地， 所述 WTN多肽的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽的铰链区为CD8α 铰链 区； 优选地， 所述CD 8α 铰链区的氨基酸序列如SEQ  ID NO:3所示； 更优选地， 所述CD 8α 铰链区的核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示； 优选地， 所述 跨膜结构域 为2B4跨膜结构域； 更优选地， 所述2B4 跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:5所示； 最优选地， 所述2B4 跨膜结构域的核苷酸序列如SEQ  ID NO:6所示； 优选地， 所述共刺激结构域 为2B4共刺激结构域； 更优选地， 所述2B4共刺激结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:7所示； 最优选地， 所述2B4共刺激结构域的核苷酸序列如SEQ  ID NO:8所示； 优选地， 所述初级信号传导结构域 为NKG2D初级信号传导结构域； 更优选地， 所述 NKG2D初级信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:9所示； 最优选地， 所述 NKG2D初级信号传导结构域的核苷酸序列如SEQ  ID NO:10所示； 最优选地， 所述肿瘤抗原结合肽的组成为WTN多肽区 ‑CD8α 铰链区 ‑2B4跨膜结构域 ‑2B4 共刺激结构域 ‑NKG2D初级信号传导结构域； 最优选地， 所述肿瘤抗原结合肽的氨基酸序列如SEQ  ID NO:11所示； 最优选地， 所述肿瘤抗原结合肽的核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞包 括肿瘤抗原结合肽 ‑工程化NK细胞、 肿瘤抗原结合肽 ‑工程化T细胞、 肿 瘤抗原结合肽 ‑工程 化B细胞、 肿瘤抗原结合肽 ‑工程化巨噬细胞；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114315976 A 2优选地， 所述肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞为肿瘤抗原结合肽 ‑工程化NK细胞。 5.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述PD ‑L1抑制剂包括atezolizumab、 avelumab、 durvalumab； 优选地， 所述P D‑L1抑制剂为atezo lizumab。 6.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述共培养CIK细胞为与前列腺癌细胞共 培养的DC‑CIK细胞； 优选地， 所述共培 养CIK细胞中包 含CD8+T细胞； 更优选地， 所述共培 养CIK细胞的制备 方法包括如下步骤： (1)DC细胞的培 养； (2)CIK细胞的培 养； (3)将步骤(1)培养得到的DC细 胞和步骤(2)培养得到的CIK细 胞在培养基中混合， 加入 前列腺癌细胞共培 养， 收集悬浮的DC ‑CIK混合物即为共培 养CIK细胞； 最优选地， 所述 步骤(1)包括如下步骤： (a)第0天， 在DC细胞生长 培养基中培 养PBMC细胞； (b)第3天， 更 换DC细胞生长 培养基； (c)第6天， 在DC细胞生长 培养基中添加DC细胞成熟因子； (d)第8天， 收集细胞， 得到DC细胞； 最优选地， 步骤(a)中所述DC细胞生长 培养基中添加的物质包括FBS、 DC细胞培 养因子； 最优选地， 步骤(a)中所述DC细 胞生长培养基中添加的物质包括5％FBS、 2U/mL  DC细胞 培养因子； 最优选地， 步骤(c)中所述DC细胞成熟因子最终浓度为2U/mL； 最优选地， 所述 步骤(2)包括如下步骤： (a)第0天， 在CIK细胞活化培 养基中培 养PBL细胞； (b)第3、 4、 6天， 用CIK细胞增殖培 养基补充细胞培 养物； (c)第8天， 收集细胞， 得到 CIK细胞； 最优选地， 步骤(a)中所述CIK细胞活化培养基中添加的物质包括KBM551、 FBS、 抗CD3抗 体、 IFN‑γ、 IL‑1α 、 IL‑2； 最优选地， 步骤( a)中所述CIK细胞活化培养基中添加的物质包括KBM551、 3％FBS、 50ng/mL抗CD3抗体、 10 00U/mLIFN‑γ、 100U/mLIL‑1α 、 500U/mL IL‑2； 最优选地， 步骤(a)中所述PBL细胞的细胞密度为1.5 ×106/mL； 最优选地， 步骤(b)中所述CIK细胞增殖培 养基中添加的物质包括KBM 551、 FBS、 I L‑2； 最优选地， 步骤(b)中所述CIK细胞增殖培养基中添加的物质包括KBM551、 3％FBS和 500U/mL IL‑2； 最优选地， 所述 步骤(3)中培 养基为CIK细胞增殖培 养基； 最优选地， 所述DC细胞的细胞密度为 4×107/mL； 最优选地， 所述CIK细胞的细胞密度为1 ×108/mL； 最优选地， 所述前列腺癌细胞的细胞密度为1 ×107/mL； 最优选地， 所述共培 养的条件为5％CO2、 37℃、 24h； 最优选地， 所述前列腺癌细胞包括C4 ‑2、 LNCaP、 PC‑3、 DU145；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114315976 A 3