(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210158309.8 (22)申请日 2022.02.21 (71)申请人 广东省农业科 学院蔬菜研究所 地址 510000 广东省广州市天河区金颖路 66号 (72)发明人 吴海滨　赵钢军　罗剑宁　李俊星　 龚浩　郑晓明　刘小茜　 (74)专利代理 机构 广州广典知识产权代理事务 所(普通合伙) 44365 专利代理师 万志香　曾银凤 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 鉴定丝瓜种皮颜色的SNP分子标记、 KASP引 物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定丝瓜种皮颜色的SNP 分子标记、 KASP引物及其应用， 所述SNP分子 标记 位于丝瓜第13号染色体第3 7371324碱基， 该处碱 基为T或G。 本发明的SNP分子标记具有通用性和 准确性， 根据SNP分子 标记和KASP引物， 可以直接 用于丝瓜种皮颜色和相对应的基因型的鉴定， 因 此， 可以将 丝瓜种皮作为杂交种纯度鉴定的标记 性状， 节约丝瓜纯度鉴定的成本， 为丝瓜分子育 种提供有效的技 术支持， 具有重要的应用价 值。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图1页 CN 114457184 A 2022.05.10 CN 114457184 A 1.一种鉴定丝瓜种皮颜色的SNP分子标记， 其特征在于， 所述SNP分子标记位于丝瓜第 13号染色体第37371324bp碱基， 该处碱基为T或G。 2.根据权利 要求1所述的鉴定丝瓜种皮颜色的SNP 分子标记， 其特征在于， 所述SNP 分子 标记的TT基因型对应的丝瓜种皮为白色， 所述SNP分子标记的TG或GG基因型对应的丝瓜种 皮为黑色。 3.一种鉴定丝瓜种皮颜色的KASP引物， 其特征在于， 所述KASP引物包括： 序列如SEQ  ID  No:1和SEQ ID No:2所示的正向引物、 以及序列如SEQ  ID No:3所示的反向引物。 4.根据权利 要求3所述的鉴定丝瓜种皮颜色的KASP引物， 其特征在于， 所述正向引物5' 端连接有荧 光分子FAM或H EX。 5.根据权利要求4所述的鉴定丝瓜种皮颜色的KASP引物， 其特征在于， 所述序列如SEQ   ID No:1所示的正向引物的5'端连接有荧光分子FAM， 所述序列如SEQ  ID No:2所示的正向 引物的5'端连接有荧 光分子HEX。 6.一种鉴定丝瓜种皮颜色的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求3～5任一 项所述的鉴定 丝瓜种皮颜色的KAS P引物。 7.权利要求1或2所述的SNP 分子标记、 权利 要求3～5任一项所述的KASP引物、 以及权利 要求6所述的试剂盒在丝瓜种皮颜色鉴定中的应用。 8.权利要求1或2所述的SNP 分子标记、 权利 要求3～5任一项所述的KASP引物、 以及权利 要求6所述的试剂盒在丝瓜分子标记辅助育种中的应用。 9.一种鉴定 丝瓜种皮颜色的方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： (1)、 以待测丝瓜样品的DNA为模板， 以鉴定丝瓜种皮颜色的KASP引物为引物， 进行PCR 扩增， 得到PCR扩增产物； (2)、 分析PCR扩增产物第13号染色体第37371324bp碱基为T或G。 10.根据权利要求9所述的鉴定丝瓜种皮颜色的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增为 Touchdown  PCR， 所述T ouchdown  PCR扩增程序为： 94℃15min； 94℃2 0s， 65℃‑57℃60s， 10个 循环， 每个循环退火延伸温度降0.8 8℃； 94℃20s， 57℃6 0s， 30个循环。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457184 A 2鉴定丝瓜种皮颜色的SNP分子标记、 KASP引物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学及作物育种技术领域， 更具体地说， 本发明涉及一种鉴定 丝瓜种皮颜色的SNP分子标记、 KASP引物、 以及SNP分子标记和KASP引物在丝瓜分子育种中 的应用。 背景技术 [0002]丝瓜是一种重要的药食兼用的多功能蔬菜。 丝瓜种皮富含维生素、 氨基酸、 微量元 素和抗氧化物质， 具有清热消暑、 止血消炎的功效。 近年来， 随着人们对 营养健康的重视， 丝 瓜的播种面积逐年增大， 特别对于华南地区而言， 丝瓜已成为广东、 广西、 海南、 及港澳地区 重要的日常消费蔬菜。 [0003]由于丝瓜杂交种子生产多采用人工授粉的方式进行， 导致种子收获及加工过程存 在生物学混杂和机械混杂等问题， 而对于杂交种的纯度鉴定， 不论是田间鉴定还是室内分 子标记检测， 都是工作量大、 成本较高， 如果利用白色种皮等作为杂种纯度鉴定的目测标记 性状， 则可节约纯度鉴定的部分成本 。 [0004]竞争性等位基因特异PC R(KASP)技术是针对等位基因SNP 位点设计的两端引物， 利 用实时荧光PCR技术， 对底物进行扩增， 相应的荧光探针可以与对应引物结合位点相结合， 根据检测出的荧 光颜色确定扩增产物的基因型， 是一种无需电泳新型 快速简便方法。 [0005]因此， 开发与丝瓜种皮颜色紧密连锁的SNP分子标记， 对丝瓜分子育种具有重要的 意义。 发明内容 [0006]基于此， 本发明的目的之一是提供一种鉴定丝瓜种皮颜色的SNP分子标记， 所述 SNP分子标记能够用来预测、 鉴定和筛 选丝瓜种皮颜色性状。 [0007]实现上述发明目的 的具体技 术方案包括如下： [0008]一种鉴定丝瓜种皮颜 色的SNP分子标记， 所述SNP分子标记位于丝瓜第13号染色体 第37371324bp碱基， 该处碱基为T或G。 [0009]在其中一些实施例中， 所述S NP分子标记的TT基因型对应的丝瓜种皮为白色， 所述 SNP分子标记的TG或G G基因型对应的丝瓜种皮为 黑色。 [0010]本发明的另一目的是提供一种鉴定丝瓜种皮颜色的KASP引物， 所述KASP引物 可以 扩增所述SNP分子标记。 [0011]实现上述发明目的 的具体技 术方案包括如下： [0012]一种鉴定丝瓜种皮颜色的KASP引物， 所述KASP引物包括： 序列如SEQ  ID No:1和 SEQ ID No:2所示的正向引物、 以及序列如SEQ  ID No:3所示的反向引物。 [0013]在其中一些实施例中， 所述 正向引物5'端连接有荧 光分子FAM或H EX。 [0014]在其中一些实施例中， 所述序列如SEQ  ID No:1所示的正向引物的5'端连接有荧 光分子FAM， 所述序列如SEQ  ID No:2所示的正向引物的5'端连接有荧 光分子HEX。说　明　书 1/5 页 3 CN 114457184 A 3