(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210158289.4 (22)申请日 2022.02.21 (71)申请人 广州白云山 光华制药股份有限公司 地址 510285 广东省广州市海珠区南石路 一号 (72)发明人 蒋研风羊　晁志　郑如文　谢雪那　 刘宏　梁永姗　杜海泳　 (74)专利代理 机构 广州广典知识产权代理事务 所(普通合伙) 44365 专利代理师 顾书玲　万志香 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 鉴定西康柴胡的SCAR分子标记、 特异性引物 对和方法 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定西康柴胡的SCAR分 子标记、 特异性引物对和方法， 所述SCAR分子标 记具有如SEQ  ID No.1所示的核苷酸序列； 所述 引物对的正向引 物的序列如SEQ  ID No.2所示， 反向引物的序列如SEQ  ID No.3所示。 本发明的 SCAR分子标记、 以及特异性引物对， 可以特异性 地、 准确地鉴定西康柴胡， 为西康柴胡的开发利 用与保护提供研究基础， 亦可为其它中药材遗传 特性和鉴别提供 借鉴。 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图2页 CN 114457183 A 2022.05.10 CN 114457183 A 1.一种鉴定西康柴胡的SCAR分子标记， 其特征在于， 所述SCAR分子标记具有如SEQ  ID  No.1所示的核苷酸序列。 2.权利要求1所述的SCAR分子标记在鉴定西康柴胡中的应用。 3.一种SCA R分子标记特异性引物对， 其特征在于， 所述引物对的正向引物的序列如SEQ   ID No.2所示， 反向引物的序列如SEQ  ID No.3所示。 4.权利要求3所述的SCAR分子标记特异性引物对在鉴定西康柴胡中的应用。 5.一种鉴定西康柴胡的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括权利要求3所述的SCAR分 子标记特异性引物对。 6.权利要求5所述的试剂盒在鉴定西康柴胡中的应用。 7.一种鉴定西康柴胡的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)、 以待鉴定柴胡样品 的DNA为模板， 权利 要求3所述的SCAR分子标记特异性引物对为 引物， 进行PCR扩增； (2)、 对PCR扩增产物进行电泳检测， 鉴定待鉴定柴胡样品是否为西康柴胡。 8.根据权利 要求7所述的鉴定西康柴胡的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述PCR扩增的 反应体系为： 模板1.5 μL～2.5 μL、 正向引物0.3 μL～ 0.5 μL、 反向引物 0.3 μL～0.5 μL； Taq  Mix  5 μL～7 μL； 去离 子水加至15 μL。 9.根据权利 要求7所述的鉴定西康柴胡的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述PCR扩增的 反应程序为： 94℃预变性， 保持4min； 94℃变性， 保持30s， 63.4℃退火， 保持30s， 72℃延伸， 保持1min， 共35个循环； 72℃保持8mi n。 10.根据权利 要求7所述的鉴定西康柴胡的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 若PCR扩增产 物出现300bp特异性条 带， 则待鉴定柴胡样品为西康柴胡。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457183 A 2鉴定西康柴胡的SCAR分子标记、 特异性引物对和方 法 技术领域 [0001]本发明属于药材检测技术领域， 更具体地， 本发明涉及一种鉴定西康柴胡的SCAR 分子标记、 特异性引物对及鉴定方法。 背景技术 [0002]柴胡是一种多基原的中药， 根据文献记载， 多种柴胡属植物都可作药用， 柴胡属植 物种类繁多， 全世界已报道的柴胡属植物约有18 0种， 物种间相似的形态使 得柴胡鉴定十 分 困难， 特别是近缘物种的鉴定一 直困扰着植物分类学家。 [0003]近年来， DNA分子标记技术逐渐成熟， DNA分子标记相对于传统的遗传标记具有遗 传多态性高、 变异丰富； 稳定性高， 不受取材部位、 发育阶段和环境因素影响； 检测手段便 捷、 准确率高等多项优势。 目前常用的DNA分子标记主要有RFLP、 RAPD、 AFLP、 SCAR、 SSR、 ISSR、 SRAP等。 [0004]RFLP是最早开发的不依赖PC R的一项分子标记技术， 虽然具有多态性稳定、 重复性 好、 可靠性高的优势， 但是也存在着一些局限性， 例如操作程序繁琐、 周期长、 成本高； 而且 一般基层不具有放射性同位素的条件， 所以此法不易普及推广。 RAPD、 ISSR、 AFLP均为基于 PCR的传统DNA分子标记 技术， 不需要明确序列信息， 对DNA的要求低， 但 也存在一定缺陷， 由 于使用的引物随机且较短， 其稳定性与重复性差， 可靠性不高。 SSR标记多用于品种遗传多 态性鉴别， 但是SSR仍离不开对实验条件的依赖， 难以做到高通量检测， 并且单个标记位点 对应的等位基因数目多， 导致不同来源的SSR数据整合变得十 分困难。 SRAP为针对基因表达 序列的多态性而开发， 被称为靶向基因标记， 为显性标记， 多应用于比较基因组学、 遗传多 样性分析、 基因定位研究。 [0005]SCAR(Sequence  character ized amplified  regions， 序列特征扩增区域)标记技 术， 是在RAPD技术基础上发展起来的， 是共显性遗传， 其是用特异引物对基因组DNA进行扩 增， 获得可以反映标记 性状的特异DNA片段的技术， 通常在不同的个体之间表现为存在或缺 失， 在图谱中通常为单一条带的有或无， 简单、 结果可靠、 成本低， 具有可重复性好、 对反应 条件不敏感、 检测便捷的优点， 可用于作物杂交育种 、 品种鉴定和混伪品的鉴别当中。 [0006]西康柴胡(Bupleurum  sikangense)是在西藏地区发现的特有新种， 在西藏的当 佐、 芒康地区常见， 其与紫花鸭跖柴胡(B.commelynoideum)亲缘关系较近， 仅通过形态特征 难以将两者鉴别。 西康柴胡相比其他种类的柴胡的物种鉴定， 其研究很少， 参考文 献和鉴定 经验几乎没有。 为了保证柴胡资源准确的鉴定以及后续对西康柴胡的开发利用， 有必要对 西康柴胡 进行可靠的物种鉴定 。 [0007]因此， 提供一种基于SCAR分子标记的、 适 合于鉴定西康柴胡的方法非常有意 义。 发明内容 [0008]基于此， 本发明的目的之一在于提供一种鉴定西康柴胡的SCAR分子标记， 该SCAR 分子标记可以特异地、 准确地 鉴定西康柴胡。说　明　书 1/9 页 3 CN 114457183 A 3