(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221016185 3.8 (22)申请日 2022.02.22 (71)申请人 武汉艾米森生命科技有限公司 地址 430000 湖北省武汉市武汉东湖新 技 术开发区高新大道818号武汉高科医 疗器械园B地块一期B10栋1层04号 (72)发明人 周俊　万康康　熊杨辉　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 张灵莉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) (54)发明名称 食管癌的生物标志 物、 核酸产品和试剂盒 (57)摘要 本发明涉及一种食管癌的生物标志物、 核酸 产品和试剂盒。 该食管癌的生物标志物为HOXD1 基因和GSX1基因中的至少一种， 通过检测该生物 标志物的甲基化水平诊断食管癌。 上述食管癌的 生物标志物在应用过程中具有较高的灵敏度， 可 以提高食管癌的检出率， 提高检测准确性， 有助 于实现人群分流， 提升内镜检查的依从性， 有利 于提升食管癌特别是早期食管癌的早诊率。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 CN 114854855 A 2022.08.05 CN 114854855 A 1.一种食管癌的生物标志物， 其特征在于， 所述生物标志物为HOXD1基因和GSX1基因中 的至少一种， 通过检测所述 生物标志 物的甲基化水平诊断食管癌。 2.权利要求1所述的生物标志 物在制备用于诊断食管癌的试剂或试剂盒中的应用。 3.一种核酸产品， 其特征在于， 包括用于检测HOXD1基因和/或GSX1基因的甲基化水平 的检测引物对。 4.根据权利要求3所述的核酸产品， 其特征在于， 所述核酸产品包括用于检测Chr2： 176189800～176189943区域和/或Chr13： 2779359 0～27793770区域的甲基化水平的检测引 物对。 5.根据权利要求4所述的核酸产品， 其特征在于， 所述检测引物对包括HOXD1甲基化引 物对和HOXD1未甲基化引物对， 所述HOXD1甲基化引物对用于扩增甲基化的Chr2:176189800 ～176189943区域， 所述HOXD1未甲基化引物对用于扩增未甲基化的Chr2： 176189800～ 176189943区域； 和/或， 所述检测引物对包括GSX1甲基化引物对和GSX1未甲基化引物对， 所述GSX1甲基 化引物对用于扩增甲基化后的Chr13： 27793590～2779 3770区域， 所述GSX1未甲基化引物对 用于扩增未甲基化的C hr13： 27793590～27793770区域。 6.根据权利要求5所述的核酸产品， 其特征在于， 所述HOXD1甲基化引物对的核苷酸序 列如SEQ ID NO： 1～SEQ  ID NO： 2所示； 和/或， 所述HOXD 1未甲基化引物对的核苷酸序列如 SEQ ID NO： 3～SEQ  ID NO： 4所示； 和/或， 所述GSX1甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5～SEQ  ID NO： 6所示； 和/ 或， 所述GSX1未甲基化引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 7～SEQ  ID NO： 8所示。 7.根据权利要求3～6任一项所述的核酸产品， 其特 征在于， 还 包括内参引物对。 8.根据权利要求7所述的核酸产品， 其特征在于， 所述内参引物对的核苷酸序列如SEQ   ID NO： 9～SEQ ID NO： 10所示。 9.一种诊断食管癌的试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求3～8任一项所述的核酸产品。 10.根据权利要求9所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包括核酸提取试剂、 甲基 化转化试剂、 质控品、 PCR反应试剂和 测序试剂中的至少一种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854855 A 2食管癌的生物标志物、 核酸产品和试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 特别是涉及一种食管癌的生物标志物、 核酸产品和试 剂盒。 背景技术 [0002]根据GLOBOCAN  2020的最新统计数据， 食管癌是全球 发病率第十的恶性肿瘤， 其死 亡率位居第六。 尽管在一些研究中观 察到食管癌患者的生存率增加， 但有其他癌症相比， 食 管鳞癌/食 管癌的预后相对较差， 大多 数研究显示食 管癌患者的5年生存率在15％～25％之 间。 在一项包括1033名接受手术的ESCC患者的人群研究中， IA、 IB、 IIA、 IIB、 IIIA、 IIIB、 IIIC和IV期患者的5年生存率分别为84.9％、 70.9％、 56.2％、 43.3％、 37.9％、 23.3％、 12.9％和3.4％(Wang J,Wu  N,Zheng QF,Yan S,Lv C,Li SL,et al.Evaluation  of the  7th edition of the TNM classification  in patients  with resected  esophageal   squamous  cell carcinoma.  World J Gastroenterol.(2014)20:18397 –403.doi: 10.3748/wjg.v20.i48.1839)。 另外， 首次诊断时有远处器官转移的食管癌患者的生存率特 别差， 一项回顾性研究表明， 这些患者的中位生存期仅为6个月， 1年或2年生存率分别为 21.1％或  11.8％(Chen  MQ,Xu BH,Zhang  YY.Analysis  of prognostic  factors for  esophageal squamous  cell carcinoma  with distant organ metastasis  at initial  diagnosis.J  Chin Med  Assoc.(2014)77:562 –6.doi:10.1016/j.jcma.2014.05.014)， 这 些证据均表明， 食管癌的早诊早治可提升食管癌 患者的生存率。 [0003]目前， 内镜及病理活检是诊断早期食管癌的金标准。 内镜下可直观地观察食管黏 膜改变， 评估癌肿状态， 拍摄或录制病变影像资料， 并可通过染色、 放大等方法评估病灶性 质、 部位、 边界和范围， 一步到位地完成筛查和早期诊断。 然而， 内镜检测依赖于医院硬件设 备和医生经验， 并且 具有侵入性、 患者依从性低等缺点， 另外内镜的筛查量远远低于中 国食 管癌高发区人群的筛查需求。 另外， 虽然有利用肿瘤标志物诊断食管癌的试剂盒， 但这些试 剂盒的灵敏度还有 待提高。 发明内容 [0004]基于此， 有必要提供一种食管癌的生物标志物， 通过检测该生物标志物的甲基化 水平来诊断食管癌， 可以改善传统生物标志 物对食管癌检测灵敏度低的问题。 [0005]此外， 还提供一种上述生物标志物在制备用于诊断食管癌的试剂或试剂盒中的应 用、 诊断食管癌的核酸产品和试剂盒。 [0006]一种食管癌的生物标志物， 所述生物标志物为HOXD1基因和GSX1基因中的至少一 种， 通过检测所述 生物标志 物的甲基化水平诊断食管癌。 [0007]经本发明研究发现， 以HOXD1基因和GSX1基因中的至少一种作为生物标志物， 通过 检测HOXD1基因和GSX1基因中的至少一种的甲基化水平来诊断或辅助诊断食管癌， 具有较 高的灵敏度， 可以有效地 提高食管癌的检出率， 进 而提高检测准确度。说　明　书 1/10 页 3 CN 114854855 A 3