(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210161876.9 (22)申请日 2022.02.22 (71)申请人 北京华诺奥美 基因医学检验实验室 有限公司 地址 100000 北京市大兴区中关村科技园 区大兴生物医药产业基地永旺西路26 号院13号楼1层101室 （集群注 册） (72)发明人 杨莹莹　刘圆　魏星　 (74)专利代理 机构 成都顶峰专利事务所(普通 合伙) 51224 专利代理师 钱学宇 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种检测人巨细胞病毒核酸的引物探针组 合物、 试剂盒及其使用方法 (57)摘要 本发明提供一种检测人巨细胞病毒核酸的 引物探针组合物、 试剂盒及其使用方法， 属于生 物检测领域。 这种检测人巨细胞病毒核酸的引物 探针组合物包括实时荧光PCR引物和探针， 实时 荧光PCR引物包 括SEQ ID No.1～2所示的的核苷 酸序列； 探针包括SEQ  ID No.3所示的的核苷酸 序列。 试剂盒包括上述引物探针组合物。 该试剂 盒通过将采集的样本经常规方法提取核酸后， 在 taqDNA聚合酶的作用下， 使用Taqman探针， 利用 实时荧光信号实现人巨细胞病毒核酸检测。 本试 剂盒没有复杂的核酸提取过程， 荧光定量PCR过 程采用一步法进行， 灵敏度高、 检测时间短、 假阴 性低、 快捷简便 。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图1页 CN 115323073 A 2022.11.11 CN 115323073 A 1.一种检测人巨细胞病毒核酸的引物探针组合物， 其特征在于， 所述引物探针组合物 包括实时荧 光PCR引物和探针； 所述实时荧 光PCR引物包括SEQ  ID No.1～2所示的的核苷酸序列； 所述探针包括SEQ  ID No.3所示的 的核苷酸序列。 2.根据权利要求1所述的检测人巨细胞病 毒核酸的引物探针组合物， 其特征在于， 所述 探针为Taqman探针， 所述Taqman探针的5 ’端标记有荧光报告基团， 3 ’端标记有荧光淬灭基 团。 3.根据权利要求2所述的检测人巨细胞病 毒核酸的引物探针组合物， 其特征在于， 所述 荧光报告基团包括FAM、 Cy5、 ROX、 VIC和NED中的至少一种； 优选地， 所述 荧光报告基团为FAM 。 4.根据权利要求3所述的检测人巨细胞病 毒核酸的引物探针组合物， 其特征在于， 所述 荧光淬灭基团包括MGB ‑NFQ、 QSY和BHQ1中的至少一种； 优选地， 所述 荧光淬灭基团为MGB ‑NFQ。 5.一种检测人巨细胞病毒核酸的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求1～4 任一项所述的引物探针组合物。 6.根据权利要求5所述的检测人巨细胞病 毒核酸的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还 包括针对人类HB B基因保守序列特异性的内参引物和内参探针； 优选地， 所述内参引物包括SEQ  ID No.4～5所示的 的核苷酸序列； 优选地， 所述内参探针包括SEQ  ID No.6所示的 的核苷酸序列。 7.根据权利要求5所述的检测人巨细胞病 毒核酸的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还 包括PCR反应液和/或染料； 优选地， 所述PCR反应液包括Taq酶、 UNG酶、 Mg2+缓冲液、 dNTPs； 优选地， 所述染料包括ROX矫 正染料。 8.一种根据权利要求5～7所述的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法， 其特征在于， 其包括： 提取待测样本的基因组， 使用所述试剂盒对所述待测样本的基因组进行扩增， 检测荧 光信号， 再进行分析。 9.根据权利要求8所述的使用方法， 其特 征在于， 对所述 荧光信号进行分析包括： 当FAM荧光通道中扩增曲线呈S型， 且Ct≤36时， 判断所述待测样本为人巨细胞病毒阳 性； 当FAM荧光通道中Ct>36或无扩增， VIC荧光通道中扩增曲线呈S型， 且Ct≤36时， 判断样 品为人巨细胞病毒阴性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115323073 A 2一种检测人巨细胞病毒核酸 的引物探针组合物、 试剂盒及其 使用方法 技术领域 [0001]本发明属于生物监测技术领域， 具体涉及 一种检测人巨细胞病毒核酸的引物探针 组合物、 试剂盒及其使用方法。 背景技术 [0002]人巨细胞病毒(Human  Cytomegalovirus， HCMV)又称人类疱疹病毒5型， 属于疱疹 病毒科β 亚科， 属于疱疹病毒科β 亚科， 是巨细胞包涵体病的病原体。 人巨细胞病毒圆形、 直 径100～200nm， 基因组为线性 dsDNA。 人类是HCMV唯一的天然宿主， 是一个广泛传播的人类 致病原， 可通过唾液、 尿或者泌乳自然传播。 还可通过性接触， 输血和器官移植传播。 [0003]HCMV在人群中的感染率很高， 我国成人的HCMV抗体阳性率达90％。 原发性感染多 发生在2岁以下， 通常以隐性 感染为主， 仅仅少数人有临床症状。 但在一定条件下， 病毒 可以 侵袭多个器官和系统产生严重疾病。 感染常见于孕妇、 胎儿和新生儿， 在孕期感染原发性 HCMV的胎儿及新生儿中， 80％可导致智力低下、 畸形和死亡； 婴幼儿感染后会导致肝脾肿 大、 智力低下、 脉络膜视网神经炎等严重疾病。 免疫缺陷患者、 器官移植后接受免疫抑制治 疗、 恶性肿瘤治疗后常导 致严重的HCMV感染， 常发生全身性疾病， 病死率高。 [0004]因此， 建立快速、 准确的检测人巨细胞病毒感染的方法具有重要意 义。 [0005]目前， 病毒 分离培养是临床实验 室HCMV感染检测的标准， 但其检测周期长达30 天， 因此不适合临床实验室使用。 目前国内有HCMV检测方面的产品较多， 多是基于免疫方法检 测人巨细胞病毒IgG/IgM的产品， 基于PCR技术检测人巨细胞病毒的试剂盒较少， 自动化程 度不高， 假阴性较高。 发明内容 [0006]本发明针对现有临床人巨细胞病毒检测的困难， 提供一种检测人巨细胞病毒核酸 的引物探针组合物、 试剂盒及其使用方法。 用这种试剂盒对人巨细胞病毒核酸进 行检测时， 灵敏度高、 检测时间短、 假阴性低、 快捷简便 。 [0007]本发明通过以下技 术方案实现： [0008]第一方面， 本发明提供一种检测人巨细胞病毒核酸的引 物探针组合物， 这种引 物 探针组合物包括实时荧 光PCR引物和探针； [0009]上述实时荧 光PCR引物包括SEQ  ID No.1～2所示的的核苷酸序列； [0010]上述探针包括SEQ  ID No.3所示的 的核苷酸序列； [0011]具体地， 该引物探针组合物的序列如下：说　明　书 1/9 页 3 CN 115323073 A 3