(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210163279.X (22)申请日 2022.02.22 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114438249 A (43)申请公布日 2022.05.06 (73)专利权人 江西省农业科 学院园艺研究所 地址 330299 江西省南昌市南昌县莲塘横 岗省农科院园艺所 (72)发明人 王雨亭　胡钟东　万水林　杨惠栋　 汤雨晴　徐超　刘心澄　 (74)专利代理 机构 北京众达德权知识产权代理 有限公司 1 1570 专利代理师 张晓冬 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01) 审查员 马晓霞 (54)发明名称 一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的引物组、 试 剂盒及鉴别方法 (57)摘要 本发明一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的引 物组、 试剂盒及鉴别方法， 涉及分子标记技术领 域。 本发明基于全基因组重测序结果， 开发了8条 多态性良好的InDel标记引物， 这8 对引物使用其 中任意1对便 可将2个主栽品种在早期进行区别， 检出率为92.31 ‑100％， 检测准确率为100％， 为 井冈蜜柚品种早期精准鉴别提供了依据， 为生产 上澄清品种名称发挥了积极作用。 权利要求书1页 说明书4页 序列表3页 附图1页 CN 114438249 B 2022.10.21 CN 114438249 B 1.一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的引物组， 其特征在于， 所述引物组包括PA1；  所述 PA1包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的PA1 ‑F和核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示的PA1 ‑ R。 2.根据权利要求1所述引物组， 其特征在于， 所述井冈蜜柚栽培种包括金兰柚和金沙 柚。 3.一种包 含权利要求1或2所述引物组的鉴定井冈蜜柚栽培种类型的试剂盒。 4.根据权利要求3所述试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还 包括PCR反应试剂。 5.一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 以井冈蜜柚栽培 种的基因组DNA 为模板DNA， 利用权利要求 1或2所述引物进 行PCR扩增， 当扩增产 物只有一条 带时是纯合， 该品种为父本沙田柚或母本金兰柚； 有两条或两条以上带时为杂合， 该品种为 子代金沙柚。 6.根据权利要求5所述方法， 其特 征在于， 所述基因 组DNA提取自蜜柚树体幼嫩叶片。 7.根据权利要求5所述方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的体系以15μl计， 包括： 7μl的 Mix液， 0.3 μl的10mmol/L的正向引物， 0.3 μl的10mmol/L的反向引物， 1.5 μl的模板DNA和余 量的ddH2O。 8.根据权利要求5或7所述方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的程序， 包括94℃预变性 5min； 94℃变性3 0s， 55℃退火3 0s， 72℃延伸3 0s， 反应进行3 5个循环； 72℃再延伸5mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114438249 B 2一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的引物组、 试剂盒及鉴别方 法 技术领域 [0001]本发明属于分子标记技术领域， 具体涉及一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的引物 组、 试剂盒及鉴别方法。 背景技术 [0002]井冈蜜柚是指以 “井冈山”为品牌， 在江西省吉安市生产栽培的甜柚品种的统称， 为我国地理标志性农产品， 是吉安重点支持发展的六大富民产业之一， 也是江西省果业三 大金字招牌之一。 到目前为止， 井冈蜜柚种植面积已达40余万亩， 有3个主栽品种， 分别为金 沙柚、 金兰柚和桃溪蜜柚， 据统计， 截至2020年年底， 前两个品种种 植面积达井冈蜜柚总 面 积的71.27％， 是主导品种， 桃溪蜜柚种植面积占13.39％。 桃溪蜜柚是沙田柚在江西的变 种， 其成熟期早且果实特征显著， 易与其他两个井冈蜜柚品种鉴别。 但是， 因为金沙柚是金 兰柚和沙田柚的杂交后代， 这两个井冈蜜柚品种亲缘关系很近， 仅凭形态特征很难区别。 在 井冈蜜柚快速发展的过程中， 金兰柚和金沙柚2个主栽品种被混淆， 导致生产上苗木混乱， 品种名称错用， 严重影响了该产业的健康可持续发展。 发明内容 [0003]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的引 物组、 试剂 盒及鉴别方法， 可将2个主栽品种有效区别， 为井冈蜜柚品种早期精准鉴别提供了依据， 为 生产上澄清品种名称发挥了积极作用。 [0004]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0005]本发明提供了一种鉴别井冈蜜柚栽培种类型的引物， 所述引物组包括  PA1、 PA2、 PA3、 PA4、 PA5、 PA6、 PA7和PA8中任意1对或多对的组合； 各引物的序列如表1所示： [0006]表1引物组的序列 [0007] 说　明　书 1/4 页 3 CN 114438249 B 3