(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210166813.2 (22)申请日 2022.02.23 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114561484 A (43)申请公布日 2022.05.31 (73)专利权人 上海中科荃银分子 育种技术有限 公司 地址 200233 上海市徐汇区桂平路470号12 幢4层419室 (72)发明人 王攀　方玉　 (74)专利代理 机构 上海远同律师事务所 313 07 专利代理师 胡洁 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01)C12N 15/11(2006.01) 审查员 赵亚丽 (54)发明名称 一种扩增水稻产量相关基因位点的多重PCR 引物组合及其试剂盒 (57)摘要 本发明提供了一种扩增水稻产量相关基因 位点的多重PCR引物组合、 以及采用该多重PCR引 物组合的水稻产量相关基因位点的扩增体系和 试剂盒， 以及采用该扩增体系获取水稻产量相关 基因位点的序列的方法和水稻产量相关基因位 点的检测方法； 采用本发明的多重PCR引物组合 及其扩增体系， 能够从水稻基因组上通过单管操 作一次性捕获多个水稻产量相关基因位点的序 列片段， 直接构建测序文库并匹配 现有的测序平 台； 特别是对于水稻育种工作者来说， 能够快速、 方便且低成本地获取多个水稻产量相关基因信 息， 便于后续能够更快更准确地 设计或验证育种 路线， 极大地 提高了育种的效率。 权利要求书2页 说明书12页 序列表36页 CN 114561484 B 2022.10.28 CN 114561484 B 1.一种用于扩增水稻产量相关基因位 点的多重PCR引物组合， 其特 征在于， 所述多重PCR引物组合包括第1～18引物对； 所述第1～18引物对的上游引物序列分别如SEQ  ID No:1、 SEQ  ID No:3、 SEQ  ID No:5、 SEQ ID No:7、 SEQ ID No:9、 SEQ  ID No:11、 SEQ  ID No:13、 SEQ  ID No:15、 SEQ  ID No:17、 SEQ ID No:19、 SEQ  ID No:21、 SEQ  ID No:23、 SEQ  ID No:25、 SEQ  ID No:27、 SEQ  ID No: 29、 SEQ ID No:31、 SEQ ID No:33、 SEQ ID No:35所示； 所述第1～18引物对的下游引物序列分别如SEQ  ID No:2、 SEQ  ID No:4、 SEQ  ID No:6、 SEQ ID No:8、 SEQ  ID No:10、 SEQ  ID No:12、 SEQ  ID No:14、 SEQ  ID No:16、 SEQ  ID No:18、 SEQ ID No:20、 SEQ  ID No:22、 SEQ  ID No:24、 SEQ  ID No:26、 SEQ  ID No:28、 SEQ  ID No: 30、 SEQ ID No:32、 SEQ ID No:34、 SEQ ID No:36所示； 所述第1～6引物对与所述第7～18引物对位于 两个不同的引物池。 2.如权利要求1所述的多重PCR引物组合， 其特 征在于： 所述多重PCR引物组合还 包括第19 ～38引物对； 所述第19～38引物对的上游引物序列分别如SEQ  ID No:37、 SEQ  ID No:39、 SEQ  ID  No:41、 SEQ  ID No:43、 SEQ  ID No:45、 SEQ  ID No:47、 SEQ  ID No:49、 SEQ  ID No:51、 SEQ  ID  No:53、 SEQ  ID No:55、 SEQ  ID No:57、 SEQ  ID No:59、 SEQ  ID No:61、 SEQ  ID No:63、 SEQ  ID  No:65、 SEQ ID No:67、 SEQ ID No:69、 SEQ ID No:71、 SEQ ID No:73、 SEQ ID No:75所示； 所述第19～38引物对的下游引物序列分别如SEQ  ID No:38、 SEQ  ID No:40、 SEQ  ID  No:42、 SEQ  ID No:44、 SEQ  ID No:46、 SEQ  ID No:48、 SEQ  ID No:50、 SEQ  ID No:52、 SEQ  ID  No:54、 SEQ  ID No:56、 SEQ  ID No:58、 SEQ  ID No:60、 SEQ  ID No:62、 SEQ  ID No:64、 SEQ  ID  No:66、 SEQ ID No:68、 SEQ ID No:70、 SEQ ID No:72、 SEQ ID No:74、 SEQ ID No:76所示； 所述第19 ～26引物对与所述第27～38引物对位于 两个不同的引物池。 3.如权利要求2所述的多重PCR引物组合， 其特 征在于： 所述多重PCR引物组合还 包括第39 ～55引物对； 所述第39～55引物对的上游引物序列分别如SEQ  ID No:77、 SEQ  ID No:79、 SEQ  ID  No:81、 SEQ  ID No:83、 SEQ  ID No:85、 SEQ  ID No:87、 SEQ  ID No:89、 SEQ  ID No:91、 SEQ  ID  No:93、 SEQ  ID No:95、 SEQ  ID No:97、 SEQ  ID No:99、 SEQ  ID No:101、 SEQ  ID No:103、 SEQ   ID No:105、 SEQ ID No:107、 SEQ  ID No:109所示； 所述第39～55引物对的下游引物序列分别如SEQ  ID No:78、 SEQ  ID No:80、 SEQ  ID  No:82、 SEQ  ID No:84、 SEQ  ID No:86、 SEQ  ID No:88、 SEQ  ID No:90、 SEQ  ID No:92、 SEQ  ID  No:94、 SEQ  ID No:96、 SEQ  ID No:98、 SEQ  ID No:100、 SEQ  ID No:102、 SEQ  ID No:104、 SEQ   ID No:106、 SEQ ID No:108、 SEQ  ID No:110所示； 所述第39 ～48引物对与所述第49 ～55引物对位于 两个不同的引物池。 4.如权利要求3所述的多重PCR引物组合， 其特 征在于： 所述多重PCR引物组合还 包括第56～64引物对； 所述第56～64引物对的上游引物序列分别如SEQ  ID No:111、 SEQ  ID No:113、 SEQ  ID  No:115、 SEQ  ID No:117、 SEQ  ID No:119所示、 SEQ  ID No:121、 SEQ  ID No:123、 SEQ  ID No: 125、 SEQ ID No:127所示； 所述第56～64引物对的下游引物序列分别如SEQ  ID No:112、 SEQ  ID No:114、 SEQ  ID 权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114561484 B 2No:116、 SEQ  ID No:118、 SEQ  ID No:120所示、 SEQ  ID No:122、 SEQ  ID No:124、 SEQ  ID No: 126、 SEQ ID No:128所示； 所述第56～60引物对与所述第61～64引物对位于 两个不同的引物池。 5.如权利要求 4所述的多重PCR引物组合， 其特 征在于： 所述多重PCR引物组合包括第一引物池和第二引物池； 所述第1～6引物对、 第19～26引 物对、 第39～48引 物对和第56～60引物对位于所述第 一引物池； 所述第 7～18引物对、 第27～38引物对、 第49～55引物对和第61～64引物对位于 所述第二引物池。 6.一种水稻产量相关基因位 点的扩增体系， 其特 征在于： 所述扩增体系包括用于扩增的缓冲体系和如权利要求1至5中任意一项所述的多重PCR 引物组合。 7.一种试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒所采用的引物为如权利要求1至5中任意一项 所述的多重PCR引物组合。 8.一种获取水稻产量相关基因位点的序列的方法， 其特征在于， 所述方法包括以下依 次进行的步骤： 步骤1)提取 水稻基因 组DNA； 步骤2)采用如权利要求6所述的扩增体系对所述步骤1)所获得的水稻基因组DNA进行 PCR扩增， 并对获得的扩增产物进行纯化， 得到水稻产量相关基因位点的序列片段的混合 物。 9.一种水稻产量相关基因位 点的检测方法， 其特 征在于： 所述检测方法包括采用如权利要求8所述的方法获得水稻产量相关基因位点的序列片 段的混合物， 并以该混合物作为样本构建测序文库， 并进行测序分析。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114561484 B 3