(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221016847 7.5 (22)申请日 2022.02.23 (71)申请人 深圳市赛格 诺生物科技有限公司 地址 518000 广东省深圳市宝安区沙 井街 道后亭茅洲山工业园工业大厦全至科 技创新园科创大厦6层A (72)发明人 黎绍基　林镜中　朱碧莹　刘钰涵　 (74)专利代理 机构 深圳市世联合知识产权代理 有限公司 4 4385 专利代理师 姜妍 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种寡聚核苷酸混合物、 荧光RT-PCR检测试 剂及应用 (57)摘要 本发明公开了一种寡聚核苷 酸混合物、 荧光 RT‑PCR检测试剂及应用。 该寡聚核苷酸混合物含 有以下寡聚核苷酸组合A、 B、 C中的一个或多个： 寡聚核苷 酸组合A， 由三条寡聚核苷酸组成， 序列 分别为SEQ  ID No.1、 2、 3； 寡聚核苷酸组合B， 由 三条寡聚核苷酸组成， 序列分别为SEQ  ID No.4、 5、 6； 寡聚核苷酸组合C， 由四条寡聚核苷酸组成， 序列分别为SEQ  ID No.7、 8、 9、 10。 本发明所述的 寡聚核苷酸 混合物是基于最新的HPIV1 ‑3核酸序 列信息设计以及基于特定的筛选原则筛选所得， 具有良好的包容性、 特异性和反应性能， 能保证 检测的准确性。 权利要求书1页 说明书7页 附图7页 CN 114480741 A 2022.05.13 CN 114480741 A 1.一种寡聚核苷酸混合物， 其特征在于， 含有以下寡聚核苷酸组合A、 B、 C中的一个或多 个： 寡聚核苷酸组合A， 由三条寡聚核苷酸组成， 序列分别为SEQ  ID No.1、 2、 3， 其中序列为 SEQ ID No.3的寡聚核苷酸的5 ’端和3’端分别用荧 光报告基团和MGB基团修饰； 寡聚核苷酸组合B， 由三条寡聚核苷酸组成， 序列分别为SEQ  ID No.4、 5、 6， 其中序列为 SEQ ID No.6的寡聚核苷酸的5 ’端和3’端分别用荧 光报告基团和MGB基团修饰； 寡聚核苷酸组合C， 由四条寡聚核苷酸组成， 序列分别为SEQ  ID No.7、 8、 9、 10， 其中序 列为SEQ ID No.10的寡聚核苷酸的5 ’端和3’端分别用荧 光报告基团和荧 光淬灭基团修饰。 2.根据权利要求1所述的寡聚核苷酸混合物， 其特征在于， 所述荧光报告基团从FAM、 JOE、 HEX、 VIC、 NED、 TET、 ROX、 Cy5中选择。 3.根据权利要求1所述的寡聚核苷酸混合物， 其特征在于， 所述寡聚核苷酸组合C的荧 光淬灭基团选用BHQ1、 BHQ2、 BHQ3、 TAMRA和E clipse中任一种。 4.一种荧光RT ‑PCR试剂， 含有Tris ‑HCl缓冲液、 氯化钾、 氯化镁、 dNTPs、 DNA聚合酶、 逆 转录酶和用于检测人RNase  P的引物探针组合， 其特征在于， 还含有权利要求 1至3任一所述 的寡聚核苷酸混合物。 5.根据权利 要求4所述的荧光RT ‑PCR试剂， 其特征在于， 所述荧光RT ‑PCR试剂还含有尿 嘧啶DNA糖 基化酶和dU TP。 6.根据权利要求4或5所述的荧光RT ‑PCR试剂， 其特征在于， 所述荧光RT ‑PCR试剂添加 冻干赋形剂后通过冷冻干燥工艺制备成冻干型 试剂。 7.权利要求4、 5或6所述的荧光RT ‑PCR试剂的应用， 其特征在于， 应用于检测样本中是 否存在人副流感病毒1、 2、 3型中的一种或多种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480741 A 2一种寡聚核 苷酸混合物、 荧光RT ‑PCR检测试剂及应用 技术领域 [0001]本发明涉及病原微生物检测技术， 具体涉及一种寡聚核苷酸混合物、 荧光RT ‑PCR 检测试剂及应用。 背景技术 [0002]人副流感病毒(Human  parainfluenza  viruses， HPIVs)是引起上呼吸道感染(如 普通感冒和喉咙痛)最常见的病原体之一(其它还有鼻病毒、 冠状病毒、 腺病毒等)， 也能造 成反复的下呼吸道疾病(如肺炎、 支气管炎和细支气管炎)， 人群普遍易感， 特别 是儿童、 老 人和有免疫缺陷人群。 据统计， 大约1/3的婴幼儿急性呼吸道感染都是由HPIVs引起的。 HPIVs能通过接触传染性污染物或吸入污染物的飞沫而传播， 由人的眼睛、 口腔或鼻腔等部 位进入人体， 引起感染。 [0003]HPIVs属于副粘病毒科(Paramyxoviridae  family)副粘病毒亚科 (Paramyxovirinae  subfamily)， 根据遗传性与抗原性分为四种血清型， 即1 ‑4型(HPIV1 ‑ 4)， 其中HPIV1和HPIV3属于呼吸道病毒属(Respirovirus  genus)， 而PIV2和PIV4属于腮腺 炎病毒属(Rubulavirus  genus)。 [0004]HPIV粒子有包膜， 直径150 ‑300nm， 基因组由不分节段的单股负链RNA组成， 长约 15000个核苷酸， 编码6种结构蛋白(3 ’ ‑N‑P‑C‑M‑F‑HN‑L‑5’)。 包膜内为核衣壳， 由病毒RNA、 N蛋白、 P蛋白和L蛋白组成。 包膜上有两种刺突， 分别是HN蛋白和F蛋白， 各血清型的抗原特 征主要由HN蛋白区分。 [0005]各血清型有不同的临床和流行病学特点。 HP IV1和HPIV2能造 成上、 下呼吸道感染， 引起假膜性喉炎、 气管炎或支气管炎等疾病， 其中HPIV1是儿童喉气管支气管炎的主要原 因， HPIV2次之； HPIV3是引起婴儿支气管炎和肺炎的主要病原体 之一(仅次于呼吸道 合胞病 毒)， 也可导致假膜性喉炎， 在1岁以下儿童中症状最严重； HPIV4一般引起轻微的上呼吸道 疾病， 重症报道较少。 HPIV1 ‑3引起呼吸道疾病的报道都比较 常见， 其中HPIV1一般为隔年发 生一次较大的交替流行， 各地都可发病。 据报道， 5岁及以上 儿童有90％以上有抗HPIV3的抗 体， 约75％有抗HPIV1和HPIV2的抗体。 所以在医疗卫生领域， 对HPIV1 ‑3的诊断和监测最为 重要。 [0006]HPIVs的体外检测通常是通过对样本中的HP IVs进行分离培养、 免疫检测和核酸检 测等方法实现。 分离培养虽为 “金标准”， 但操作复杂、 耗时长、 灵敏度不稳定； 免疫检测则特 异性差、 敏感性低。 以荧光RT ‑PCR技术为代表的核酸检测法因其准确、 灵敏、 快速等特点， 已 被越来越多地应用于辅助诊断呼吸道病毒感染相关疾病， 是目前HPIVs主要确诊方法。 但 是， 随着新发表的HPIVs核酸序列不断增加， 经过序列比对分析可见， 现有HPIVs荧光RT ‑PCR 检测试剂的引物探针序列存在不同程度的错配， 具有较大的漏检风险。 发明内容 [0007]本发明的目的是： 提供一种寡聚核苷酸混合物和荧光RT ‑PCR检测试剂， 可用于更说　明　书 1/7 页 3 CN 114480741 A 3