(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221018408 8.1 (22)申请日 2022.02.23 (71)申请人 广东省农业科 学院蔬菜研究所 地址 510630 广东省广州市天河区金颖路 66号 (72)发明人 孙保娟　吕紫见　李植良　李涛　 宫超　衡周　游倩　 (74)专利代理 机构 深圳市创富知识产权代理有 限公司 4 4367 专利代理师 高冰 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与茄子绿果色Gv1基因紧密连锁的SNP标记 与应用 (57)摘要 本发明属于分子生物学领域， 涉及茄子 绿果 色基因的定位及分子标记开发， 具体涉及与茄子 绿果色Gv1基因 紧密连锁的SNP标记与应用， 本发 明首先将Gv1基因初步定位于茄子8号染色体上 的757063683‑83368320之间的较小关联区域内； 然后在关联区域内得到与茄子绿果色Gv1基因紧 密连锁的SNP分子标记SNP  80595470； 最后基于 PARM技术利用该分子标记的特异引物可以对特 定遗传背景下的分离群体单株的基因型进行精 准区分。 本发 明的分子标记及分子标记扩增引物 可简便、 快速、 高通量地应用于茄子果色选育实 践中， 加速茄子果色性状的改良进程， 同时为克 隆茄子绿果 色Gv1基因及其功能研究奠定了良好 的基础。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图2页 CN 114525360 A 2022.05.24 CN 114525360 A 1.与茄子绿果色Gv1基因紧密连锁的SNP标记SNP  80595470在茄子果色选育中的应用， 其特征在于， 所述SNP标记SNP  80595470位于茄子8号染色体的第80595470位碱基， 所述第 80595470位碱基为T或C 。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述SNP标记SNP  80595470在父本中的碱 基为C， 母本中的碱基为T。 3.用于扩增权利要求1所述的SNP标记SNP  80595470 的引物组合在茄子果色选育中的 应用。 4.根据权利要求1或2所述的应用， 其特 征在于， 所述 果色为绿果色和白果色。 5.根据权利 要求3所述的应用， 其特征在于， 所述引物组合的核苷酸序列分别如SEQ  ID  NO.1、 SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示。 6.一种茄子果色的分子标记辅助选育方法， 其特征在于， 用权利要求1所述的SNP标记 SNP 80595470的PARMS基因分型引物对待检测茄子植株DNA进行PCR扩增， 并利用酶标仪对 PCR产物的荧光信号进 行读取， 如果PCR扩增产 物中仅检测到FAM信号， 则该植株的果色为绿 色； 如果仅检测到HEX信号， 则该植株的果色为白色； 如果同时有FAM和HEX荧光信号， 则该植 株的果色为绿色。 7.根据权利要求6所述的一种茄子果色的分子标记辅助选育方法， 其特征在于， 所述 PARMS基因分型引物的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.1、 SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示。 8.一种茄子绿果色Gv1基因的基因型检测方法， 其特征在于， 用权利 要求1所述的SNP标 记SNP 80595470的PARMS基因分型引物对待检测茄子植株DNA进行PCR扩增， 并利用酶标仪 对PCR产物的荧光信号进行读取， 如果P CR扩增产 物中仅检测到FAM信号， 则该植株的基因型 为Gv1Gv1； 如果仅检测到HEX信号， 则该植株的基因型为gv1gv1； 如果同时有FAM和HEX荧光 信号， 则该植株的基因型为Gv1gv1。 9.根据权利要求8所述的一种茄子绿果色Gv1基因的基因型检测方法， 其特征在于， 所 述PARMS基因分型引物的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.1、 SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所 示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114525360 A 2与茄子绿果色Gv1基因紧密连锁的SNP标记与应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学领域， 涉及茄子绿果色基因的定位及分子标记开发， 具体 涉及与茄子绿果色 Gv1基因紧密连锁的SNP标记与应用。 背景技术 [0002]茄子(Solanum  melongena  L.)属于茄科(Solanaceae)茄属(Solanum  L.)， 在茄科 蔬菜生产中占有重要的地位。 茄子以果实为产品， 是WHO推荐的世界十大健康蔬菜之一。 茄 子果皮颜色(以下统称果色)丰富多样， 有紫黑、 紫红、 绿、 白， 粉红等， 由于不同区域具有不 同的果色选择习惯， 因此果色是茄子育种 过程中的一个重要选育目标。 茄子果色遗传是多 基因控制的复杂性状。 其中， 花青素和叶绿素是决定茄子果色的主要色素。 紫红和紫黑果色 的茄子果实表皮富含花青素， 绿果色茄子表皮富含叶绿素， 白果色茄子则无肉眼可辨的花 青素和叶绿素合 成。 同时， 在关于茄子果色与叶绿素关系的遗传研究中， Tatebe等(1939)发 现茄子果皮叶绿素合成由Gv基因控制(Tatebe  T.On inheritance  of color in Solanum  melongena  L.Japanese  Journal of Genetics,1939,15:261 ‑271； Tatebe  T.Further   studies on inheritance  of color in Solanum melongena  Linn.Japanese  Journal of  Genetics,194 4,20:1‑7)。 [0003]在高等植物中， 叶绿素的合成自谷氨酰 ‑tRNA开始， 经过19步反应， 最终生成叶绿 素a、 叶绿素b， 中间一共有15个酶， 由27个基因编码 。 这个过程中任何一个基因出现问题， 都 可能会导致酶的活力发生改变， 造成过量中间产 物的积累， 导致植物受到氧化损伤， 甚至导 致细胞死亡， 从而引发不同缺绿突变体的产生。 目前， 有关茄子绿果色Gv基因尚未开展基因 定位及相关分子标记开发的研究。 申请人在茄子育种实践中发现一个绿果皮自交系19143 (父本)和白花白果皮自交系19141(母本)杂交， F2分离群体绿果色和白果色单株分离比为 3： 1， 这为茄子绿果色基因定位及紧密连锁分子标记开发提供了较好的亲本材料。 同时， 申 请人将控制自交系19143(父本)绿果色的基因位点命名为Gv1， 相应的 白果色突变体自交系 19141(母本)命名为gv1。 在次基础上， 开展茄子绿果色Gv1基因的分子标记和定位研究， 可 以丰富茄子果色的分子标记类型， 为分子标记辅助选择育种及Gv1基因克隆奠定基础。 [0004]PARMS(Penta ‑primer Amplification  Refractory  Mutation  system)技术， 是一 种基于扩增受阻突变体系的PCR(ARMS ‑PCR， Amplification  Refractory  Mutation  System  Polymerase  Chain Reaction)检测技术， 其原 理是： 在ARMS ‑PCR体系中增加两条末端带有 可区别的荧光标记引物， 经过扩增后变异 位点可以被不同的荧光信号检测出来。 PARMS具有 准确性高、 高通量等优点， 是一种高效的SNP分型方法。 因此， 利用PARMS技术开发与茄子绿 果色Gv1基因紧密连锁的分子标记具有重要的应用价 值。 发明内容 [0005]为了克服上述现有技术的不足， 本发明提出了一种与茄子绿果色Gv1基因紧密连 锁的SNP标记与应用。 该分子标记SNP  80595470及分子标记扩增引物可以简便、 快速、 高通说　明　书 1/7 页 3 CN 114525360 A 3