(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210168370.0 (22)申请日 2022.02.23 (71)申请人 东南大学 地址 210096 江苏省南京市玄武区新 街口 街道四牌楼 2号 (72)发明人 刘冉　高志奎　孙明军　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 童杨益 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 1/00(2006.01)A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 Hsa_circ_0006867作为食管癌分子靶标在 制备药物和试剂盒中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种Hsa_circ_0006867环状 RNA在制备、 筛选或治疗食管鳞状细胞癌药物中 的应用， 其特征在于所述环状RNA在食管鳞状细 胞癌癌组织表达水平显著低于癌旁组织。 本发明 通过制备hsa_cir c_0006867过表 达质粒载体， 过 表达慢病毒验证其食管鳞状细胞癌细胞中的功 能， 首次发现了 过表达hsa_cir c_0006867可显著 抑制食管鳞状细胞癌细胞增殖、 侵袭及迁移等肿 瘤细胞生物学表型。 因此， hsa_circ_0006867在 食管鳞状细胞癌发挥抑癌作用， 其可作为治疗靶 点在制备、 筛选或治疗食管鳞状细胞癌或抑制食 管鳞状细胞癌转移药物中的应用， 为食管鳞状细 胞癌的干预或治 疗提供一种新的治 疗方法。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图5页 CN 114457158 A 2022.05.10 CN 114457158 A 1.环状RNA  hsa_circ_0006867作为食管鳞状细胞癌的分子靶标， 在制备筛选预 防、 缓 解和/或治疗食管鳞状细胞癌药物中的应用， hsa_circ_0006867核苷酸序列为SEQ  ID NO.1 所示。 2.根据权利要求1所述环状RNA分子靶标的特异性引物， 其特征在于， 分子靶标的特异 性引物包 括hsa_cir c_000686 7‑F和hsa_cir c_000686 7‑R， 所述hsa_cir c_000686 7‑F的核苷 酸序列为SEQ  ID NO.2； hsa_circ_0 006867‑R的核苷酸序列为SEQ  ID NO.3。 3.根据权利要求1所述药物制备中应用、 其特征在于以hsa_circ_0006867为中心靶点 在抗食管鳞状细胞癌药物研发 中的应用， 所述抗癌药物包括增强Hsa_circ_0006867表达的 基因药物和/或化学 药物。 4.一种用于治疗食管鳞状细胞癌药物， 其特征在于， 所述药物以hsa_circ_0006867为 中心靶点， 所述hsa_circ_0 006867核苷酸序列为SEQ  ID NO.1所示。 5.一种用于治疗食管鳞状细胞癌药物， 其特征在于， 抗食管鳞状细胞癌药物包括促进 hsa_circ_0006867表达的基因药物和/或化学药物， 所述hsa_circ_0006867的核苷酸序列 为SEQ ID NO.1所示。 6.一种hsa_circ_0006867作为食管鳞状细胞癌分子靶标的促进剂， 所述hsa_circ_ 0006867的核苷酸序列为SEQ  ID NO.1所示。 7.根据权利要求6所述的促进剂， 其特征在于， 所述促进剂应用于包括促进食管鳞状细 胞癌在内的肿瘤 细胞增殖、 侵 袭及迁移的药物。 8.根据权利要求6所述的促进剂， 其特征在于所述促进剂载体为pLent ‑EF1 a‑ circRNA‑CMV‑RFP‑P2A‑Puro(9.2Kb)， hsa_circ_0006867序列连接位置于Asisl和MIuI， 启 动子为EF1  a， 荧光蛋白为RFP。 9.一种筛选食管鳞状细胞癌治疗的特效药物及最优联合治疗药物的方法， 其特征在 于， 所述方法包括以hsa_circ_0006867为靶点筛选食 管鳞状细胞癌治疗的特效药物及最优 联合治疗药物组合。 10.一种筛选食管鳞状细 胞癌试剂盒， 其特征在于， 试剂盒包括hsa_circ_0006867的特 异性引物， hsa_circ_0006867的特异性引物包 括hsa_cir c_000686 7‑F SEQ ID NO.2和hsa_ circ_0006867‑R， SEQ ID NO.3。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457158 A 2Hsa_circ_0 006867作为食管癌分子靶标在制备 药物和试剂盒 中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种环状RNA  Hsa_circ_0006867在制备、 筛选 或治疗食管鳞状细胞癌 药物中的应用,属于生物医药技 术领域。 背景技术 [0002]食管癌是一种具有高发病率、 高死亡率及高复发率等特征的消化道肿瘤。 据2020 年全球癌症统计数据显示， 食管癌发病率位居全球第七， 死亡率位居第六位， 是世界范围内 威胁人类健康的高发恶性肿瘤之一。 食 管癌病理类型主要包括鳞状细胞癌和腺癌， 在南 非、 东非、 东亚等食 管癌高发区， 90％的病理类型为食管鳞状细胞癌。 我国是世界上食 管癌发病 率和死亡率最高的国家， 由于我国人口基数大， 病程进展迅速等因素， 我国每年食管癌新 发 病例和死亡病例分别占居全球的53.7％和 55.7％左右， 给我国带来了严重的疾病负担。 随 医学技术的快速发展在食管癌治疗方面虽取得一定改善， 如开胸手术到微创食管癌手术， 再到免疫抑制治疗等， 但患者5年生存率仍低于15％。 目前， 对于食管鳞状细胞癌的术后高 复发及高转移也仍缺少有效的控制手段。 因此， 阐明食管鳞状细胞癌发生 发展的分子机制， 寻找调控食管鳞状细胞癌发生、 侵袭转移及凋亡的新靶点以及针对性的抗肿瘤药物的研 发， 在此基础上制定靶向干预策略有望为食管鳞状细胞癌治疗 带来新的选择， 对相关药物、 试剂具有重要意 义。 [0003]环状RNA(circular  RNA， circRNA)是一类具有共价闭合结构的非线性非编 码RNA， 既无5’端帽子也无3 ’端polyA尾巴结构， 其稳定性超过其他线性RNA分子， 且不易被RNA核酸 外切酶和RNA酶降解， 从而使其具有高度的保守性、 稳定性及组织特异性。 近年来， circ  RNA 与癌症的关系已成为癌症研究领域的重点问题， 数百个circ  RNA已被证明在包括食 管鳞状 细胞癌在内的各种人类癌症中异常表达， 主要在miRNA分子海绵， 调控宿主基因表达， 调控 可变剪接等方面 发挥作用， 进而参与调控肿瘤细胞增殖、 上皮 间充质转化、 肿瘤细胞侵袭和 转移。 随“mRNA时代 ”的到来，“环形RNA疗法 ”在治疗癌症、 自身免疫病、 再生医学、 遗传性疾 病等方面已进入研究者视线， 如利用工程化手段制造出具有高效编码蛋白质潜力的环状 RNA(oRNA)， 可在真核细胞中高效且稳定地表达蛋白质， 这意味着oRNA能够让患者以更小剂 量获得所需的治疗效果， 可能更适用于那些需要高蛋白水平且超出线性mRNA表达水平治疗 的疾病。 但目前， 关于circRNA在食管细胞癌变过程中表达及调控作用的研究尚不清晰， 尚 无明确食 管鳞状细胞癌circRNA分子靶标， 因此， 进一步系统挖掘食 管鳞状细胞癌中发挥作 用的circ  RNA， 对于进一步了解食管鳞状细胞癌发生发展机制， 探索新的食管鳞状细胞癌 治疗分子靶标， 推动 “环形RNA疗法 ”进入IND(Investigational  New Drug)阶段， 为全世界 肿瘤患者带来 新的治疗药物具有重要意 义。 发明内容 [0004]本发明目的是提供一种RNA  Hsa_circ_0006867在制备、 筛选或治疗食管鳞状细胞说　明　书 1/6 页 3 CN 114457158 A 3