(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210171035.6 (22)申请日 2022.02.23 (71)申请人 合肥仟金草生物科技有限公司 地址 230000 安徽省合肥市高新区香 樟大 道168号科技实业园D组团厂房D-17D- 22单体1D17-4D17 (72)发明人 孙松　龙子江　吴存林　乔学芹　 (74)专利代理 机构 合肥律众知识产权代理有限 公司 34147 专利代理师 赵娟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G06K 9/62(2022.01)G16B 40/00(2019.01) (54)发明名称 用于鉴别九华黄精的叶绿体基因组及其在 九华黄精鉴别中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种九华黄精叶绿体基因组 及其在九华黄精鉴别中的应用， 九华黄精叶绿体 基因组包括九华黄精叶绿体基因组中的4个具有 特定功能并具有高度特异性的基因， 分别为 rpoB、 ycf4、 ndhF、 trnI ‑GAU， 其核苷酸序列依 次 为SEQ ID NO.1～4所示。 本发明在对黄精属叶绿 体全基因组分析基础上， 通过组合叶绿体基因组 4个高变区序列基因， 实现九华黄精快速且准确 的鉴别， 对于与九华黄精亲缘关系较近的黄精属 各物种， 也可以使用本发明提供的叶绿体基因组 进行快速且准确的鉴别。 权利要求书1页 说明书4页 序列表4页 附图4页 CN 114480714 A 2022.05.13 CN 114480714 A 1.用于鉴别九华黄精的叶绿体基因组， 其特征在于， 包括九华黄精叶绿体基因组中的4 个具有特定功能并具有高度特异性的基因， 分别为rpoB、 ycf4、 ndhF、 trnI ‑GAU， 其核苷 酸序 列依次为SEQ  ID NO.1～4所示。 2.权利要求1所述的用于鉴别九华黄精的叶绿体 基因组在鉴别九华黄精中的应用。 3.一种九华黄精鉴别方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤1， 采集 新鲜待测九华黄精样本叶片， 提取样品总DNA； 步骤2， 以SEQ  ID NO.1～4高变区的基因组序列， 采用SEQ  ID NO.5～12对应的引物进 行PCR扩增， 并进 行电泳检测， 若扩增长度与设计目的片段一致且仅有一条带， 则PCR扩增成 功； 步骤3， 将PCR产物基于 MGISEQ20 00平台进行双向测序； 步骤4， 将得到的SEQ  ID NO.1～4高变区基因序列， 按rpoB、 ycf4、 ndhF、 trnI ‑GAU顺序 拼接， 并与权利要求1所述的叶绿体 基因组进行对齐、 校对； 步骤5， 利用校对后的序列构建NJ/ML/Bayes树， 若与权利要求1所述的叶绿体基因组序 列聚为一支且支持率大于80， 则确定其 为九华黄精。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480714 A 2用于鉴别九华 黄精的叶绿 体基因组及其在九华 黄精鉴别中的 应用 技术领域 [0001]本发明涉及黄精鉴别技术领域， 具体是一种用于鉴别九华黄精的叶绿体基因组及 其在九华黄精鉴别中的应用。 背景技术 [0002]多花黄精(Polygonatum  cyrtonema  Hua)曾隶属于广义百合科(Liliaceae)， 黄精 属(Polygonatum)。 在最新的APG  IV系统中， 通过分子系统发育研究， 将其归于天门冬科 (Asparagaceae)中。 多花黄精种内的亲缘关系及物种界定至今仍存在争议， 并且历 史上对 黄精属的系统分类问题也比较 混乱。 由于种内变异大， 各地多花黄精质量参差不齐， 严重影 响产业化进程。 [0003]多花黄精中具有地方特色的九华黄精因质量上乘， 入选中国国家地理标志产品， 入列“十大皖药 ”。 随着生物技术的发展， 现代研究发现黄精属植物的根状茎含有多糖、 甾体 皂碱、 蒽醌类、 各种生物碱、 木脂素等多种成分， 因此， 九华黄精的药用价值也越来越得到人 们的关注。 为此， 需要为九华黄精的物种界定提供 更多证据。 [0004]叶绿体是绿色植物中的核心细胞器， 在光合作用以及碳固定功能中起着至关重要 的作用。 高等植物中的叶绿体基因组由一个LSC区、 一个SSC区和两个IRA区构成环状双链， 大小在120 ‑180kb(千碱基对)之间， 可进行独立的复制和转录。 对于某一物种， 叶绿体基因 组结构保守， 遗传性变异小， 但对比不同物种间的叶绿体基因组信息， 又存在序列重排、 收 缩、 扩张等现场。 [0005]九华黄精的叶绿体全基因组序列长度约158Kb， 基于现有技术对其进行大样本测 序、 组装， 成本较高且存在一定的难度， 不利于商业化推广。 目前， 现有基于叶绿体基因 atpB‑rbcL， matK， rbcL  and rps16无法对九华黄精以及与其亲缘关系较近的黄精属进行有 效鉴定。 为此， 开发一种长度适中且能够有效鉴别九华黄精的DNA条 形码非常必要。 发明内容 [0006]本发明旨在 提供一种九华黄精叶绿体基因组及其在九华黄精鉴别中的应用， 实现 九华黄精快速且准确的鉴别。 [0007]本发明保护一种用于鉴别九华黄精的叶绿体基因组及其在鉴别九华黄精中的应 用， 包括九华黄精叶绿体基因组中的4个具有特定功能并具有高度特异性的基因， 分别为 rpoB、 ycf4、 ndhF、 t rnI‑GAU， 其核苷酸序列依次为SEQ  ID NO.1～4所示。 [0008]本发明还保护一种九华黄精鉴别方法， 包括以下步骤： [0009]步骤1， 采集 新鲜待测九华黄精样本叶片， 提取样品总DNA； [0010]步骤2， 以SEQ  ID NO.1～4高变区的基因组序列， 采用SEQ  ID NO.5～12对应的引 物进行PCR扩增， 并进行电泳检测， 若扩增长度与设计目的片段一致且仅有一条带， 则P CR扩 增成功；说　明　书 1/4 页 3 CN 114480714 A 3