(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210173862.9 (22)申请日 2022.02.24 (71)申请人 中国人民解 放军海军军医大学第一 附属医院 地址 200433 上海市杨 浦区长海路168号 (72)发明人 李攀　侯攀　孙明雷　于高修　 马超群　唐文栋　柳俊梅　那剑　 (74)专利代理 机构 上海申浩 律师事务所 31280 专利代理师 赵建敏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 替格瑞洛相关呼吸困难基因型检测试剂或 试剂盒 (57)摘要 本发明涉及医学生物检测技术领域， 本发 明 提供了CYP3A5基因突变位点rs776 746的新用途， 具体是在制备检测替格瑞洛相关呼吸困难基因 型的诊断试剂或诊断试剂盒中的应用。 本发明进 一步提供了一种利用针对CYP3A5基因突变位点 rs776746的定量PCR检测来进行替格瑞洛相关呼 吸困难基因型诊断的生物制剂和检测试剂盒。 本 发明的试剂盒和检测方法简便， 可靠， 周期短， 特 异性高， 易于临床推广。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图3页 CN 114752666 A 2022.07.15 CN 114752666 A 1.检测CYP3A5基因突变位点rs776746的试剂在制 备检测替格瑞洛相关呼吸困难基因 型的诊断试剂或诊断试剂盒中的应用。 2.根据权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的诊断试剂为检测生物样品中CYP3A5 基因突变位 点rs776746基因型的试剂。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的诊断试剂 盒包含了检测生物样品中 CYP3A5基因突变位 点rs776746基因型的试剂。 4.根据权利要求2或3所述的应用， 其特征在于， 所述的检测生物样品中CYP3A5基因突 变位点rs776746基因型的试剂， 选自： 对CYP3A5基因具有检测特异性的PCR引物， 该引物的 序列如SEQ  ID NO.1～2所示。 5.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 所述的生物样品获自对象的外周血。 6.一种检测替格瑞洛相关呼吸困难基因型的生物制剂， 其特征在于， 包括用于检测 CYP3A5基因的引物对、 预混定量P CR反应液、 阳性质控品、 阴性质控品， 所述引物对的序列如 SEQ ID NO.1～2所示。 7.一种检测替格瑞洛相关呼吸困难基因型的试剂盒， 该试剂盒包含了检测生物样品中 CYP3A5基因突变位 点rs776746基因型的试剂。 8.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的诊断试剂盒是由引物系统、 扩增 系统及阳性和阴性质控品组成， 所述的引物系统包括如SEQ  ID NO.1～2所示的PCR引物。 9.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述阳性质控品的获取方法为， 根据 NCBI数据库公布的rs776746位点的序列信息， 进行质粒构建合成， 获得基因分型为CC或TT 的纯合DNA序列， 即为CC型阳性质控品和TT型阳性质控品； 所述阴性质控品为DEP C处理的去 离子水。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114752666 A 2替格瑞洛相关呼吸困难基因型检测试剂或试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及医学生物检测技术领域， 涉及检测CYP3A5基因突变位点rs776746作为 分子标志物在替格瑞洛相关呼吸困难基因型诊断中的应用， 尤其涉及CYP 3A5基因突变位点 rs776746在制备替格瑞洛相关呼吸困难基因型诊断试剂或试剂盒中的应用。 背景技术 [0002]替格瑞洛是一种新型的P2Y12二磷酸腺苷(adenosine  diphosphate， ADP)受体拮 抗剂， 其本身 是活性药物， 不需肝药酶代谢， 可直接、 快速发挥抑制血小板聚集的作用[1]。 欧 美最新指南均推荐对ACS患者优先使用替格瑞 洛抗血小板治疗[2,3]。 PLATO研究显 示， 虽然替 格瑞洛组患者心血管死亡、 心肌梗死及脑卒中的复合发生率低于氯吡格雷组， 但非冠状动 脉旁路移植术(coronary  artery bypass grafting， CAB G)相关的出血事件和呼吸困难发 生率较高[4]。 呼吸困难 是替格瑞洛的常见并发症之一， 其发生率超过10％， 不少患者因此而 不得不换药治疗， 替格瑞洛相关的呼吸困难很大程度上影响了患者的依从性。 但替格瑞洛 相关呼吸困难的发生原因并不明确， Luis等[5]的研究也不支持其与腺苷水平相关。 而且临 床上替格瑞洛相关呼吸困难常较难判断， 这些因素都影响了替格瑞洛的临床应用。 [0003]SNP(single  nucleoti de polymorphism， 单核苷酸多态性)主要指基因上由单个 核苷酸的变异引起的DNA序列多态性， 包括单个碱基的转换， 插入和缺失等变异形式。 人体 表型差异， 药物反应及疾病发生发展过程都可能与SNP的多态性有关。 不同的SNP使个体对 药物治疗， 环 境暴露等产生不同反应， SNP可能是引起个体对药物产生不同程度反应的遗传 基础。 因此， SNP在药物筛选及药效评价方面具有独特的价值， 能够推动我国个体化医疗的 发展。 [0004]细胞色素P450酶是一种肝脏中的代谢酶， 对多种药物代谢具有重要作用， 研究发 现细胞色素P450酶系中很多成员在人群中呈现遗传多态性， 使 药物在人体内的清除效率在 个体间存在差异， 产生不同的血药浓度， 清除率低引起体内药物蓄积可能是引起某些药物 不良反应的关键原因。 Luis等[5]的研究同样发现替格瑞洛血药浓度及其活性代谢物AR ‑ C124910XX的血药浓度均与替格瑞洛相关呼吸困难的发生存在显著相关性， 替格瑞洛的体 内代谢过程可能是替格瑞洛相关呼吸困难发生与否的关键影响因素。 CYP3A5和CYP3A41*G 是细胞色素P450酶系成员之一， 且在替格瑞洛代谢为AR ‑C124910的过程中发挥重要作用， 在人群中亦存在遗传多态性。 rs776746和rs2242480分别被报道是CYP3A5和CYP3A41*G上与 药物反应相关的一种SNP， 存在C C、 CT及TT三种基因型。 [0005]目前针对基因多态性 的检测有多种方法。 Sanger测序法是传统的检测SNP的一种 方法， Sanger测序法检测时从核苷 酸某一固定的点开始， 随机在某 一个特定的碱基处终止， 并且在每个碱基后面进行荧光标记， 产生以A、 T、 C、 G结束的四组不同长度的一系 列核苷酸， 然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测， 从而获得可见DNA碱基序列， 这种方法准确度 高， 但是该方法需要较强的设备支持， 一般实验室难以具备此条件； 与此对应的， 荧光定量 PCR法所依据的原理不同GC含量的DNA片段， 其Tm值不同， 从而根据熔解曲线判断包含SNP位说　明　书 1/7 页 3 CN 114752666 A 3