(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210176014.3 (22)申请日 2022.02.24 (71)申请人 杭州惠煜医疗科技有限公司 地址 322100 浙江省杭州市萧 山区宁围街 道传化科创大厦2幢4-107室 （自主分 割） (72)发明人 江海松　胡建容　 (74)专利代理 机构 上海伯瑞杰知识产权代理有 限公司 312 27 代理人 周一新 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于检测肌萎缩性侧索硬化症的基因标志 物、 检测方法和应用 (57)摘要 本发明公开了用于检测肌萎缩性侧索硬化 症的基因标志物、 检测方法和应用， 属于高通量 测序技术领域。 该检测方法包括： 提取检测对象 的基因组DNA， 将基因组DNA依次进行片段化、 纯 化和Pre–PCR扩增反应， 得到目标区域DNA文库； 通过芯片 对目标区域DNA文库的目标基因编码区 和临近剪切区的DNA进行捕获和富集， 得到目标 区域文库； 用高通量测序平台对目标区域文库进 行基因检测， 得到的测序数据与基因组DNA的参 考序列进行对比， 发现存在的基因突变并进行数 据分析， 得到与肌萎缩性侧索硬化症 致病相关的 基因突变信息。 本发明具有灵敏度高、 针对性强、 覆盖全面、 通量大、 准确性高等优点， 在临床诊断 和药物开发方面有巨大的应用空间。 权利要求书2页 说明书5页 附图1页 CN 114317726 A 2022.04.12 CN 114317726 A 1.用于检测肌萎缩性侧索硬化症的基因标志物， 其特征在于， 包含一个或两个以上如 下基因的组合： SOD1、 ALS2、 SQSTM1、 SETX、 FUS、 SPG11、 VAPB、 ANG、 TARDBP、 FIG4、 OPTN、 VCP、 UBQLN2、 SIGMAR1、 CHMP2B、 P FN1、 ERBB 4、 HNRNPA1、 DCTN1、 PRPH、 NEFH、 SPAST、 NIPA1、 PNPLA6、 SMN1、 CHRNA4、 DAO、 HFE、 APOE、 DIAPH3、 DPP6、 MAPT、 PARK7、 BCL6、 EWSR1、 TAF15、 OGG1、 CRYM、 GRN、 ITPR2、 VEGFA、 PON1、 ALAD、 PNPLA6、 SLC52A3、 SLC52A2、 SOX5、 SRCAP、 HNRNPA2B1、 APEX1、 LUM、 ARHGEF28、 NETO1、 BCL11B、 OMA1、 CDH13、 PCP4、 CDH22、 PON2、 CHGB、 PON3、 CNTN6、 RAMP3、 CRIM1、 SS18L1、 DOC2B、 DPYSL3、 TRPM2、 ELP3、 UBQLN1、 EPHA4、 UNC13A、 FEZF2、 SUSD1、 FGGY、 ZFP64、 GRB14、 Z NF512B、 KIFAP3、 SPG20、 GBE1、 HEXA、 TRPM7、 L1CAM、 PLP1、 ATL1、 CYP7B1、 SPG7、 KIAA0196、 KIF5A、 RTN2、 HS PD1、 ZFYV26、 BSCL2、 C19orf12、 DNMT1、 ATXN2。 2.根据权利要求1所述用于检测肌萎缩性侧索硬化症的基因标志物， 其特征在于， 所述 基因标志 物包括CDH13 。 3.权利要求1或2所述用于检测肌萎缩性侧索硬化症的基因标志物在制备诊断肌萎缩 性侧索硬化症的药物或检测试剂中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 所述检测试剂采用试剂盒的形式。 5.一种与肌萎缩性侧索硬化症致病相关的基因突变的检测方法， 其特征在于， 包括以 下步骤： S1、 提取检测对象的基因 组DNA； S2、 将基因 组DNA依次进行片段化、 纯化和Pre –PCR扩增反应， 得到目标区域DNA文库； S3、 通过芯片对目标 区域DNA文库的目标基因编码区和临近剪切区的DNA进行捕获和富 集， 得到目标区域文库； S4、 用高通 量测序平台对目标区域文库进行基因检测， 得到测序数据； S5、 所得测序数据与所述基因组DNA的参考序列进行对比， 发现存在的基因突变并进行 数据分析， 得到与肌 萎缩性侧索硬化症致病相关的基因突变信息； 所述基因组DNA选自如下基因形成的组： SOD1、 ALS2、 SQSTM1、 SETX、 FUS、 SPG11、 VAPB、 ANG、 TARDBP、 FIG4、 OPTN、 VCP、 UBQLN2、 SIGMAR1、 CHMP2B、 PFN1、 ERBB4、 HNRNPA1、 DCTN1、 PRPH、 NEFH、 SPAST、 NIPA1、 PNPLA6、 SMN1、 CHRNA4、 DAO、 HFE、 APOE、 DIAPH3、 DPP6、 MAPT、 PARK7、 BCL6、 EWSR1、 TAF15、 OGG1、 CRYM、 GRN、 ITPR2、 VEGFA、 PON1、 ALAD、 PNPLA6、 SLC52A3、 SLC52A2、 SOX5、 SRCAP、 HNRNPA2B1、 APEX1、 LUM、 ARHGEF28、 NETO1、 BCL11B、 OMA1、 CDH13、 PCP4、 CDH22、 PON2、 CHGB、 PON3、 CNTN6、 RAMP3、 CRIM1、 SS18L1、 DOC2B、 DPYSL3、 TRPM2、 ELP3、 UBQLN1、 EPHA4、 UNC13A、 FEZF2、 SUSD1、 FGGY、 ZFP64、 GRB14、 ZNF512B、 KIFAP3、 SPG20、 GBE1、 HEXA、 TRPM7、 L1CAM、 PLP1、 ATL1、 CYP 7B1、 SPG7、 KIAA0196、 KIF5A、 RTN2、 HSPD1、 ZFYV26、 BSCL2、 C19orf12、 DNMT1、 ATXN2。 6.根据权利要求5所述与肌萎缩性侧索硬化症致病相关的基因突变的检测方法， 其特 征在于， 所述基因 组DNA来源于人类的血 液、 唾液或离体组织。 7.根据权利要求5所述与肌萎缩性侧索硬化症致病相关的基因突变的检测方法， 其特 征在于， 所述基因突变为 点突变或20bp以内的缺失插 入突变。 8.根据权利要求7所述与肌萎缩性侧索硬化症致病相关的基因突变的检测方法， 其特 征在于， 所述基因突变位于 CDH13。 9.根据权利要求5所述与肌萎缩性侧索硬化症致病相关的基因突变的检测方法， 其特权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114317726 A 2征在于， 采用试剂盒的形式进行 所述与肌 萎缩性侧索硬化症致病相关的基因突变 检测。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114317726 A 3