(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210171355.1 (22)申请日 2022.02.24 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 邵灵梅　李丹青　许曈　王小斌　 张润龙　楼建华　夏宜平　 (74)专利代理 机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 33224 专利代理师 沈金龙 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于筛选两季开花 鸢尾品种的鸢尾SSR 分子标记组及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于筛选两季开花鸢尾 品种的鸢尾SSR分子标记组及其应用， 涉及分子 标记技术领域。 一种用于筛选两季开花鸢尾品种 的鸢尾SSR分子标记组包括以下8个， 其核苷酸序 列依次如SEQ  ID NO.17‑24所示。 本发明开发的 SSR分子标记可以简单、 快速、 稳定、 毒性小地鉴 别出两季开花鸢尾品种； 通过本发 明的方法能够 发掘与两季开花显著关联的SSR标记， 为鸢尾两 季开花辅助育种和遗传改良提供重要理论依据； 本发明提供的SSR分子标记引物组能够很好的区 分不同鸢尾品种， 并用于鉴别鸢尾两季开花鸢尾 品种。 权利要求书2页 说明书9页 序列表5页 附图7页 CN 114438250 A 2022.05.06 CN 114438250 A 1.一种用于筛选两季开花鸢尾品种的鸢尾SSR分子标记组， 其特征在于， 所述SSR分子 标记组包括以下8个， 核苷酸序列具体如下： (1)P2S19： 序列如SEQ  ID NO.17所示； (2)P2S45： 序列如SEQ  ID NO.18所示； (3)P2S48： 序列如SEQ  ID NO.19所示； (4)P3S12： 序列如SEQ  ID NO.20所示； (5)P3S17： 序列如SEQ  ID NO.21所示； (6)P3S28： 序列如SEQ  ID NO.22所示； (7)P3S30： 序列如SEQ  ID NO.23所示； (8)P3S41： 序列如SEQ  ID NO.24所示。 2.一种用于筛选两季开花鸢尾品种的引物组， 其特征在于， 包括以下8对， 其正向引物 和反向引物的核苷酸序列具体如下： (1)P2S19： 正向引物序列如SEQ  ID NO.1所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO.2所示； (2)P2S45： 正向引物序列如SEQ  ID NO.3所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO.4所示； (3)P2S48： 正向引物序列如SEQ  ID NO.5所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO.6所示； (4)P3S12： 正向引物序列如SEQ  ID NO.7所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO.8所示； (5)P3S17： 正向引物序列如SEQ  ID NO.9所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO.10所示； (6)P3S28： 正向引物序列如SEQ  ID NO.11所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO.12所示； (7)P3S30： 正向引物序列如SEQ  ID NO.13所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO.14所示； (8)P3S41： 正向引物序列如SEQ  ID NO.15所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO.16所示。 3.一种用于筛选两季开花鸢尾品种的检测试剂 或试剂盒， 其特征在于， 含有权利要求2 所述引物组。 4.如权利要求2所述的引物组、 或权利要求3所述的检测试剂 或试剂盒在筛选两季开花 鸢尾品种中的应用。 5.一种两季开 花的鸢尾品种的筛 选方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)提取鸢尾 基因组DNA； (2)以步骤(1)提取的基因 组DNA为模板， 利用权利要求2所述的引物组进行PCR扩增； (3)用毛细管电泳对步骤(2)的PCR产物进行检测； (4)分析步骤(3)检测结果， 与作为标准样品的两季及单季开花的鸢尾检测结果一起构 建鸢尾品种聚类树状图； (5)根据步骤(4)构 建的鸢尾品种聚类树状图， 与作 为标准样品的两季开花的鸢尾聚为 一类的， 即为两季开 花的鸢尾品种。 6.如权利 要求5所述的筛选方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述PCR扩增体系为： 20 μL， 其 中上下游引物各1.0μL， 上下游引物的浓度为10mM， 5U/μL  Taq polymerase10μL， 20ng/μL   DNA模板1.0 μL， ddH2O 7.0 μL； 所述PCR扩增程序为： 94℃预变性3min； 93℃变性30s； 58℃退 火30s， 72℃延伸1mi n， 32个循环； 72℃延伸10mi n。 7.如权利要求5所述的筛选方法， 其特征在于， 步骤(3)中毛细管电泳检测步骤为： 将步 骤(2)的PCR产物中加入0.5μL分子量内标和去离子甲酰胺8.5μL进行变性， 变性条件为95 ℃， 5min； 置于冰上冷却10mi n以上， 离心10s后进行毛细管电泳检测仪 。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114438250 A 28.如权利要求5所述的筛选方法， 其特征在于， 步骤(4)中， 分析步骤(3)检测结果具体 步骤为： 根据步骤(3)毛细管电泳检测结果， 按照UPGMA法对鸢尾品种进行遗传聚类 分析： 首 先制作鸢尾品种的(0， 1)矩阵， 具体为： 将毛细管电泳检测出的条带按照从小到大排列并标 号， 每个品种对应每个带型， 有条带的记为1， 无条带的记为0； 再通过NTSYS ‑pc软件制作鸢 尾品种的聚类树状图； 鸢尾品种聚类树状图可聚为不同类群， 与标准样品的两季开花的鸢 尾聚为一类的， 即为两季开 花的鸢尾品种。 9.如权利要求5 ‑8任一项所述的筛 选方法在 在筛选两季开花鸢尾品种中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114438250 A 3