(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210170607.9 (22)申请日 2022.02.24 (71)申请人 广东省农业科 学院环境园艺研究所 地址 510000 广东省广州市天河区五山路 广东省农科院内 (72)发明人 杨凤玺　任锐　陆楚桥　金建鹏　 朱根发　高洁　魏永路　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 陈洁娣　刘明星 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种墨兰SSR引物组及应用该引物组构建墨 兰品种指纹图谱的方法 (57)摘要 本发明公开了一种墨兰SSR引物组及应用该 引物组构建墨兰品种指纹图谱的方法。 该墨兰 SSR引物组包括14对SSR引物序列。 本发明利用该 14对SSR引物序列对墨兰基因组DNA进行多重PCR 扩增， 利用毛细管荧光电泳检测PCR产物， 对SSR 标记数据进行分析， 构建70种墨兰SSR指纹图谱， 并能够有效的鉴定出墨兰品种。 本发 明构建墨兰 品种指纹图谱的方法具有高通量、 高精度、 成本 低的优点， 应用前 景良好。 权利要求书2页 说明书16页 附图1页 CN 114736977 A 2022.07.12 CN 114736977 A 1.墨兰SSR引物组， 其特 征在于， 包括以下14对S SR引物序列： 2.权利要求1所述的墨兰S SR引物组在构建墨兰品种指纹图谱中的应用。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114736977 A 23.权利要求1所述的墨兰S SR引物组在鉴定墨兰品种中的应用。 4.一种墨兰品种指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)提取墨兰样品的DNA； (2)以提取的DNA为模板， 以权利 要求1所述SSR引物组为扩增引物， 建立PCR反应体系并 进行PCR扩增； (3)将扩增产物进行毛细管电泳， 根据毛细 管电泳结果对墨兰每个品种的样品DNA的扩 增结果形成扩增片段长度数据化编码， 构建得到墨兰品种指纹图谱。 5.根据权利 要求4所述的墨兰品种指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 步骤(2)中的PCR 反应体系包括： 10 ×PCR Buffer 3 μL、 2.5mM  dNTP 2 μL、 MgCl2 2 μL、 Primer  A 2 μL、 Primer   B 2 μL、 Template  1 μL、 ddH2O 18 μL、 Taq酶0.2 μL； 所述PCR扩增的反应程序为： 95℃5min； 95℃30s， 60℃30s， 72℃30s， 30个循环； 95℃ 30s， 55℃30s， 72℃3 0s， 10个循环； 60℃30min； 4℃保存。 6.根据权利要求4所述的墨兰品种指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 步骤(3)中将扩 增产物进行毛细管电泳， 根据毛细管电泳结果对墨兰每个品种的样品DNA的扩增结果形成 扩增片段长度数据化编码， 具体为： 按照SSR_23012_c0_g1、 SSR_47035_c6_ g1、 SSR_45085_ c2_g1、 SSR_53453_c0_g1、 SSR_55630_c0_g1、 SSR_39257_c3_g1、 SSR_51432_c6_g1、 SSR_ 46859_c0_g2、 SSR_50940_c5_g2、 SSR_445_400、 SSR_44145_c1_g1、 SSR_44775_c0_g1、 SSR_ 48838_c2 _g1、 SSR_46319 _c4_g3的分子标记顺序排列， 通过毛细管电泳结果， 依次记录每个 棉花品种经每对SSR引物扩增出现的片段长度， 依据各个扩增片段长度进 行数据化编码， 即 为该棉花品种的DNA指纹图谱。 7.根据权利要求6所述的墨兰 品种指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 所述依据 各个扩 增片段长度进 行数据化编 码， 具体为： 将各位点扩增片段的等位基因按分子量大小排列， 等 位基因从小到大以阿拉伯数字1 ‑9标注， 9个以上的等位基因， 以大写英文字母A ‑Z标注， 若 该位点在某个品种中无扩增则记为0， 每 个位点占两位。 8.一种墨兰 品种指纹图谱， 其特征在于， 由权利要求4 ‑7任一项所述墨兰 品种指纹图谱 构建方法构建得到 。 9.权利要求8所述的墨兰品种指纹图谱在鉴定墨兰品种中的应用。 10.一种鉴定墨兰品种的试剂盒， 其特 征在于， 含有权利要求1所述的墨兰S SR引物组。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114736977 A 3