(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210178482.4 (22)申请日 2022.02.25 (71)申请人 杭州诺辉健康科技有限公司 地址 310000 浙江省杭州市滨江区长河街 道江二路40 0号2幢13层1313室 (72)发明人 张建勋　张茜　马刘敏　黄龙妹　 吕宁　陈一友　 (74)专利代理 机构 北京坤瑞律师事务所 1 1494 代理人 封新琴 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 基于miRNA特 征标记的肝癌早期检测 (57)摘要 一种用于肝癌早筛的miRNA特征标记检测方 法以及相应的用于肝癌检测的试剂盒。 其检测的 miRNA包括选自hsa ‑miR‑33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑ 3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑ miR‑4516‑3p， 和hsa ‑miR‑6803‑3p的一种或多种 miRNA， 检测的样本包括组织样本和血浆样本 。 权利要求书3页 说明书15页 附图1页 CN 114410795 A 2022.04.29 CN 114410795 A 1.一种用于肝癌检测的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含用于检测选自hsa ‑miR‑ 33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和hsa ‑ miR‑6803‑3p的一个或多个miRNA的检测试剂。 2.根据权利 要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含用于检测选自hsa ‑miR‑ 33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和hsa ‑ miR‑6803‑3p的至少两个miRNA的检测试剂。 3.根据权利 要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含用于检测选自hsa ‑miR‑ 33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和hsa ‑ miR‑6803‑3p的至少三个miRNA的检测试剂。 4.根据权利 要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含用于检测选自hsa ‑miR‑ 33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和hsa ‑ miR‑6803‑3p的至少四个miRNA的检测试剂。 5.根据权利 要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含用于检测选自hsa ‑miR‑ 33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和hsa ‑ miR‑6803‑3p的至少五个miRNA的检测试剂。 6.根据权利 要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含用于检测hsa ‑miR‑33B‑ 3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和hsa ‑miR‑ 6803‑3p的检测试剂。 7.根据权利要求1 ‑6任一项所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包含至少一个逆转 录引物， 至少一个扩增引物， 和/或至少一个探针。 8.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含选自含SEQ  ID NO:7, 11,15,19,23和27至少一个的逆转录引物。 9.根据权利要求7或8所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含选自含SEQ  ID NO: 8‑9,12‑13,16‑17,20‑21,24‑25和28‑29至少一个的扩增引物。 10.根据权利要求7 ‑9任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含选自含SEQ   ID NO:10,14,18,2 2,26和30至少一个的探针。 11.根据权利要求1 ‑10任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述检测hsa ‑miR‑33B‑3p的 检测试剂包含SEQ  ID NO:7所示的逆转录引物、 SEQ  ID NO:8和SEQ  ID NO:9所示的扩增引 物， 和/或SEQ  ID NO:10所示的探针。 12.根据权利要求1 ‑11任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述检测hsa ‑miR‑92B‑3p的 检测试剂 包含SEQ ID NO:11所示的逆 转录引物、 SEQ  ID NO:12和SEQ  ID NO:13所示的扩增 引物， 和/或SEQ  ID NO:14所示的探针。 13.根据权利要求1 ‑12任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述检测hsa ‑miR‑205‑5p的 检测试剂 包含SEQ ID NO:15所示的逆 转录引物、 SEQ  ID NO:16和SEQ  ID NO:17所示的扩增 引物， 和/或SEQ  ID NO:18所示的探针。 14.根据权利要求1 ‑13任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述检测hsa ‑miR‑374C‑5p 的检测试剂 包含SEQ ID NO:19所示的逆转录引物、 SEQ  ID NO:20和SEQ ID NO:21所示的扩 增引物， 和/或SEQ  ID NO:22所示的探针。 15.根据权利要求1 ‑14任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述检测hsa ‑miR‑4516‑3p权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114410795 A 2的检测试剂 包含SEQ ID NO:23所示的逆转录引物、 SEQ  ID NO:24和SEQ  ID NO:25所示的扩 增引物， 和/或SEQ  ID NO:26所示的探针。 16.根据权利要求1 ‑15任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述检测hsa ‑miR‑6803‑3p 的检测试剂 包含SEQ ID NO:27所示的逆转录引物、 SEQ  ID NO:28和SEQ  ID NO:29所示的扩 增引物， 和/或SEQ  ID NO:30所示的探针。 17.根据权利要求1 ‑16任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 还包含检测内参miRNA的检 测试剂， 所述内参miRNA是hsa ‑miR‑16‑5p； 优选地， 所述检测内参miRNA的检测试剂 包含SEQ  ID NO:31所示的逆转录引物、 SEQ  ID NO:32和SEQ  ID NO:33所示的扩增引物， 和/或SEQ  ID  NO:34所示的探针。 18.根据权利要求1 ‑17任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 还包含检测外参miRNA的检 测试剂， 所述外参miRNA是Cel ‑miR‑39‑5p； 优选地， 所述检测外参miRNA的检测试剂是SEQ   ID NO:35所示的逆转录引物、 SEQ  ID NO:36和SEQ ID NO:37所示的扩增引物， SEQ  ID NO: 38所示的探针。 19.根据权利要求1 ‑18任一项所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包括针对血浆 或血清样本的miRNA提取 试剂。 20.根据权利要求1 ‑19任一项所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述 肝癌为早期肝癌。 21.一种检测肝癌的方法， 其特征在于， 所述方法包含检测 样本中的选自hsa ‑miR‑33B‑ 3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和hsa ‑miR‑ 6803‑3p的一个或多个miRNA的浓度。 22.根据权利要求21所述的方法， 其特征在于， 所述方法包含检测样本中的选自hsa ‑ miR‑33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和 hsa‑miR‑6803‑3p的至少两个miRNA的浓度。 23.根据权利要求21所述的方法， 其特征在于， 所述方法包含检测样本中的选自hsa ‑ miR‑33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和 hsa‑miR‑6803‑3p的至少三个miRNA的浓度。 24.根据权利要求21所述的方法， 其特征在于， 所述方法包含检测样本中的选自hsa ‑ miR‑33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和 hsa‑miR‑6803‑3p的至少四个miRNA的浓度。 25.根据权利要求21所述的方法， 其特征在于， 所述方法包含检测样本中的选自hsa ‑ miR‑33B‑3p， hsa‑miR‑92B‑3p， hsa‑miR‑205‑5p， hsa‑miR‑374C‑5p， hsa‑miR‑4516‑3p， 和 hsa‑miR‑6803‑3p的至少五个miRNA的浓度。 26.根据权利要求21所述的方法，