(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210176437.5 (22)申请日 2022.02.25 (71)申请人 军事科学院军事医学研究院环境医 学与作业医学研究所 地址 300050 天津市和平区大理道1号 (72)发明人 师丹阳　王东帅　金敏　李君文　 杨栋　尹静　李海北　杨忠委　 陈天姣　周书青　王华然　 (74)专利代理 机构 北京丰浩知识产权代理事务 所(普通合伙) 11781 代理人 孙浩思 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测新冠病毒的试剂盒及检测方 法 (57)摘要 本发明涉及生物检测领域， 具体讲， 涉及一 种用于检测新冠病毒的试剂盒及检测方法。 试剂 盒中含有核酸扩增试剂， 核酸扩增试剂中含有如 SEQ ID NO:1～SEQ  ID NO:4所示核苷酸序列的 等温扩增引物； 或含有如SEQ  ID NO:9～SEQ  ID  NO:12所示核苷酸序列的等温扩增引物。 本发明 开发出一种能够快速实时现场检测的新冠病毒 检测试剂， 可提高检测 效率， 为新冠病毒的防控 提供有效的技 术手段。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图3页 CN 114317834 A 2022.04.12 CN 114317834 A 1.一种用于检测新冠病 毒的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒中含有核酸扩增试剂， 所 述核酸扩增试剂中含有如SEQ  ID NO:1～SEQ  ID NO:4所示核苷酸序列的等温扩增引物； 或， 所述核酸扩增试剂中含有如SEQ  ID NO:9～SEQ  ID NO:12所示核苷酸序列的等温 扩增引物。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， SEQ  ID NO:1、 SEQ  ID NO:2的浓度为0.1 μM～0.4 μM， 优选为0.1 μM； SEQ  ID NO:3和SEQ  ID NO:4的浓度为1.0 μM～1.6 μM， 优选为1.2 μ M； SEQ ID NO:9、 SEQ  ID NO:10的浓度为0.1μM～0.4μM， 优选为0.1μM； SEQ  ID NO:11和 SEQ ID NO:12的浓度为1.0 μM～1.6 μM， 优选为1.2 μM 。 3.根据权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒中还含有阴性对照品和阳性 对照品， 所述阳性对照品为 新冠病毒ORF 7假病毒质粒， 所述阴性对照品为去离 子水。 4.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒中还 含有微流控芯片。 5.根据权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 用于所述试剂 盒的样品为待检测鼻拭子 或咽拭子的提取物经 过RNA提取 试剂盒获得的核酸样本 。 6.根据权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述核酸扩增试剂中还含有荧光染料和 包括逆转酶的核酸扩增酶热启动多目的等温扩增酶。 7.根据权利 要求6所述的试剂盒， 其特征在于， 荧光染料的含量为50 μL； 优选的， 包括逆 转酶的核酸扩增酶热启动多目的等温扩增酶的含量 为1.25mL。 8.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒的等温扩增的温度为63℃～ 67℃， 优选 65℃； 所述试剂盒的等温扩增的时间为 40～80分钟， 优选 60分钟。 9.一种采用权利要求1～8任一项所述的试剂盒检测新冠病毒的方法， 其特征在于， 通 过等温扩增进 行检测， 所述等 温扩增的温度为63℃ ～67℃， 优选65℃； 所述等 温扩增的时间 为40～80分钟， 优选 60分钟。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特 征在于， 所述 等温扩增的反应 体系为： 包括逆转酶的核酸扩增酶热启动多目的等温扩增酶12.5 μL； 模板2 μL； 荧光染料0.5 μL； 浓度为0.1 μM的SEQ  ID NO:1和SEQ  ID NO:2各0.0 1 μL或浓度为0.1 μM的SEQ  ID NO:9和 SEQ ID NO:10各0.01μL； 浓度为1.2μM的SEQ  ID NO:3和SEQ  ID NO:4各0.12μL或浓度为 0.12 μM的SEQ  ID NO:11和SEQ ID NO:12各0.01 μL； 去离子水补至20 μL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317834 A 2一种用于 检测新冠病毒 的试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及生物检测领域， 具体讲， 涉及一种用于检测新冠病毒的试剂盒及检测 方法。 背景技术 [0002]新型冠状病毒(Severe  Acute Respiratory  Syndrome  Coronavirus  2， SARS‑ CoV‑2)造成了全球范围内的疫情大传播， 其 强传染性和高致死率给全球疫情防控工作提出 了巨大挑战， 为有效控制疫情发展， 开发准确高效的检测方法尤为重要。 目前的检测方法包 括病原学检测、 分子生物学检测 和免疫学检测。 [0003]病原学检测是指利用病毒分离培养方法或电镜观察等技术， 直接对病原体本身进 行的检测， 能够在疾病爆发早期为确定病原体提供直接证据， 是诊断病毒感染的传统方法 之一。 但与其他检测方法相比， 病原学检测技术需要的实验环境 苛刻、 操作繁琐、 耗时较长， 无法满足疫情大规模暴发下的病毒检测需求。 [0004]免疫学检测 法是针对血液中的病毒特异性抗原或抗体进行的检测， 《新型冠状病 毒肺炎诊疗方案(试行第八版)》 将新冠病毒特异性抗体检测与核酸检测、 病毒基因测序共 同作为确诊证据。 相较于核酸检测， 免疫学检测不仅样本采集容易、 检测操作简单、 容易实 现高通量， 还能检测 患者体内特异 性抗体的变化情况， 发现产生免疫力的人群， 对疾病防治 以及疫苗研发具有重要意义。 目前免疫学检测方法主要包括侧 流免疫层析技术、 酶联免疫 检测法(ELISA)、 化学发光免疫分析法等。 侧流免疫层析技术结合了 色谱分析和免疫反应原 理， 以胶体金、 碳纳米颗粒等作为免疫标记的探针， 对样 本中的新冠病毒抗原蛋白进 行快速 检测。 ELISA是抗原 抗体反应与酶科学相互结合的一种常见的免疫分析方法， 利用抗原与抗 体特异性结合进 行免疫反应的定性和定量检测。 化学发光免疫分析是一种新型的免疫分析 技术， 兼具免疫反应的特异 性及化学发光分析的灵敏性。 免疫 学检测方法检测耗时短、 准确 性高、 操作简便， 但由于人体的免疫反应只有在肌体感染1周后才产生可被检测的抗体， 因 此免疫学检测存在检测窗口期， 主 要作为辅助诊断的手段。 [0005]分子生物学检测是针对新冠病毒感染机体后所复制产生的病毒RNA进行检测， 不 同于免疫系统产生的IgM、 IgG抗体， 复制产生的病毒RNA能更早被检测出来， 因此当前新冠 病毒最主要的诊断方法是病毒核酸检测， 主要包括全基因组测序、 实时荧光定量PCR(RT ‑ PCR)、 CRISPR、 逆转录环介导等温扩增技术(RT ‑LAMP)等， 其中实时荧光定量PCR方法(RT ‑ PCR)仍是检测新型冠状病毒的金标准。 全基因组测序技术能够全面反映病原体的遗传信 息， 具有高度的准确性和敏感性， 但该技术仪器设备昂贵、 测序数据解读门槛高， 难以应用 于大规模临床检测。 RT ‑PCR诊断耗时短、 检测样 本多、 结果判定简便、 检测成本低， 是目前新 冠病毒检测最常用的手段， 但是该方法需要专业的实验室和操作人员， 实验室条件不足或 操作不当都可能会因气溶胶污染而造成假阳性。 RT ‑LAMP能够在等温条件下特异、 高效、 快 速的扩增核酸模板， 虽然 该方法的引物设计较为复杂， 但其检测结果灵敏度高， 可视化能够 实现检测结果的直观判断， 具有十分广阔的发展潜力。说　明　书 1/7 页 3 CN 114317834 A 3