(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210175382.6 (22)申请日 2022.02.25 (71)申请人 上海大学 地址 200444 上海市宝山区上 大路99号 (72)发明人 肖俊杰　王丽君　陈奕文　吴心盈　 杨子江　 (74)专利代理 机构 北京方圆嘉 禾知识产权代理 有限公司 1 1385 专利代理师 戴嵩玮 (51)Int.Cl. C12N 15/864(2006.01) C12N 15/113(2010.01) A61K 31/7105(2006.01) A61P 9/10(2006.01) C12Q 1/6883(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 环状RNA circTTC3 过表达腺相关病毒载体、 腺相关病毒及其应用 (57)摘要 本发明提供了环 状RNAcircTTC3过表 达腺相 关病毒载体、 腺相关病毒及其应用， 属于生物医 药技术领域。 本发明利用AAV9病毒载体递送环状 RNA‑circTTC3能够用于制备预防和/或治疗心肌 缺血再灌注损伤(IRI)的药物。 本发明基于AAV病 毒将能够转录出环状RNA ‑circTTC3 的基因序列 递送至心脏组织中， 并在心 脏组织中稳定的高表 达， 上调circTTC3能产生心脏保护效应， 有效减 少心肌梗死面积， 从而起到保护心肌梗死的作 用。 本发明通过在新生大鼠原代心肌细胞中过表 达circTTC3， 发现cir cTTC3可以显著性地促进新 生大鼠原 代心肌细胞的增殖和生长 。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图3页 CN 114517209 A 2022.05.20 CN 114517209 A 1.环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒载体， 所述环状RNA  circTTC3的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1所示。 2.根据权利 要求1所述的环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒载体， 其特征在于， 所述 环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体包括原始载体和插入在所述原始载体上的 circTTC3的编码基因； 所述circT TC3的编码基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 3.根据权利 要求2所述的环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒载体， 其特征在于， 所述 circTTC3的编码基因的表达调控原件 包括CMV启动子 。 4.一种包装有权利要求1～3任意一项所述环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒载体 的腺相关病毒。 5.根据权利要求4所述的腺相关病毒， 其特征在于， 所述腺相关病毒由pAAV2/9、 pDeltaF6和所述环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒载体包 装而成。 6.权利要求1～3任意一项所述环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒载体或者权利要 求4或5所述的腺相关病毒在制备 预防和/或治疗缺血 再灌注损伤的药物中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述缺血再灌注损伤包括心肌缺血再灌注 损伤。 8.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述药物的剂型包括注射剂。 9.检测环状RNAcircTTC3表达量的试剂在制备诊断心肌缺血再灌注损伤的诊断工具中 的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述检测环状RNA  circTTC3表达量的试 剂包括引物组； 所述引物组包括上游引物和下游引物， 所述上游引物的核苷酸序列如SEQ   ID NO.3所示； 所述下游引物的核苷酸序列SEQ  ID NO.4所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114517209 A 2环状RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体、 腺相关病毒及其 应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及环状 RNA circTTC3过表达腺相关病毒载 体、 腺相关病毒及其应用。 背景技术 [0002]急性心肌梗死是心血管疾病致死和致残的主要原因之一。 对于急性心肌梗死病 人， 临床上常用的心肌缺血后再灌注治疗， 在一定程度上降低了由于心肌梗死造成的急性 期死亡， 但是其本身 所造成的心肌损害和对心室重构的不良促进作用严重影响了心梗患者 的预后， 这种过程与现象被称之为心肌缺血再灌注损伤。 因此有效对抗心肌缺血再灌注损 伤的研究一直受到广泛的关注。 目前， 心肌缺血再灌注损伤的防治常用的是外源性增加心 肌氧和能量供应， 减轻心脏负担和减少能量消耗， 但是其疗效并不显著， 临床上目前并未获 得理想的心肌保护药物。 [0003]环状RNA是最近 发现的一类不具有5 ’ ‑端帽子和3 ’ ‑端尾巴的闭合环状结构RNA， 它 大量存在于 真核细胞胞质内。 环状RNA具有很多重要的调控功能， 在不同物种中具有保守性 和组织特异性， 且环状结构对核糖核酸外切酶不敏感， 较线性RNA更稳定， 这些特性使得环 状RNA极具开 发疾病新型诊断与治疗方法的巨大潜力， 研究意义重大。 现有技术 公开了环状 RNA Hectd1(circHectd1)和UCK2(circUCK2)可以作为脑缺血再灌注损伤的潜在治疗靶点 (PMID:29938598,332 30465)， 环 状RNA cWdr37可以作为视网膜缺血再灌注损伤的潜在治疗 靶点(PMID :33771636)。 [0004]但是， 目前仍缺乏环状RNA对于心肌缺血再灌注损伤的相关诊断、 预防和治疗的报 道。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明的目的在于提供环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒载体、 腺 相关病毒及其应用， 本发明的环状RNA  circTTC3过表达 腺相关病毒 载体能够用于制备诊断 心肌缺血 再灌注损伤的诊断工具以及制备 预防和/或治疗心肌缺血 再灌注损伤的药物。 [0006]本发明提供了环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒载体， 所述环状RNA  circTTC3 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 [0007]优选的， 所述环状 RNA circTTC3过表达腺相关病毒载体包括原始 载体和插入在所 述原始载体上的circTTC3的编码基因； 所述circTTC3的编码基因的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.2所示。 [0008]优选的， 所述circT TC3的编码基因的表达调控原件 包括CMV启动子 。 [0009]本发明还提供了一种包装有上述方案所述环状RNA  circTTC3过表达腺相关病毒 载体的腺相关病毒。 [0010]优选的， 所述腺相关病毒由pAAV2/9、 pDeltaF6和所述环状RNA  circTTC3过表达腺说　明　书 1/9 页 3 CN 114517209 A 3