(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221017584 4.4 (22)申请日 2022.02.25 (71)申请人 山西农业大 学 地址 030801 山西省晋中市太 谷县铭贤南 路1号 (72)发明人 侯思宇　孙朝霞　韩渊怀　门艺涵　 (74)专利代理 机构 北京方圆嘉 禾知识产权代理 有限公司 1 1385 代理人 戴嵩玮 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 一种鉴别谷子叶酸性状的SNP位点、 KASP分 子标记引物组及其应用 (57)摘要 本发明属于生物 技术领域， 具体涉及一种鉴 别谷子叶酸性状的SNP位点、 KASP分子标记引物 组及其应用。 本发明提供的SNP位点位于谷子 SiADCL1基因第1号外显子上， 且在SiADCL1基因 第1号外显子164bp位点， 所述位点上存在T/C碱 基突变， 与谷子叶酸具有显著的相关性。 当所述 位点为C碱基时， 所述谷子叶酸性状为高叶酸； 当 所述位点为T碱基时， 所述谷子无高叶酸性状。 利 用本发明所述SNP位点能够筛选高叶酸谷子， 有 利于谷子种质育种。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图1页 CN 114317810 A 2022.04.12 CN 114317810 A 1.一种鉴别谷子叶酸性状的SNP位点， 其特征在于， 所述SNP位点位于谷子SiADCL1基因 第1号外显子上， 且在第1号外 显子的164bp处的多态性 为T/C。 2.根据权利 要求1所述的SNP分子标记， 其特征在于， 所述SNP的多态性位点位于SEQ  ID  No.1所示的核苷酸序列的第164bp处， 且多态性 为T/C。 3.一种鉴别权利要求1所述的SNP位点的KASP分子标记引物组， 其特征在于， 包括序列 为SEQ ID NO.3所示的正向引 物1、 序列为SEQ  ID NO.4所示的正向引 物2和序列为SEQ  ID  NO.5所示的反向引物。 4.一种用于检测权利要求1或2所述的SNP位点的试剂盒， 包括权利 要求3所述的KASP分 子标记引物组； 所述引物组中正向引物1和正向引物2的使用浓度独立为4～10μmol/L； 所述引物组中 的反向引物的浓度为 4～10 μmo l/L。 5.权利要求1或2所述的SNP位点或权利要求3或4所述的KASP分子标记引物 组在谷子育 种中的应用。 6.权利要求1或2所述的SNP位点或权利要求3或4所述的KASP分子标记引物 组在筛选高 叶酸谷子中的应用。 7.一种鉴别谷 子叶酸性状的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 利用权利要求3或4所述的引物组对谷 子基因组DNA进行PCR扩增， 得到扩增产物； 对所述扩增产物进行 KASP基因分型检测， 根据分型检测结果 鉴别谷子叶酸性状； 所述谷子叶酸性状判定的方法为： 当KASP基因分型检测结果为CC型时， 鉴定谷子叶酸 性状为高叶酸； 当KAS P基因分型检测结果 为TT型或CT型时， 鉴定 谷子叶酸性状为非高叶酸。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增使用的反应体系以10μL计包 括： 谷子基因组DNA 2 μL， 引物组0.14 μL， 2x  Probe MixA溶液5 μL和余 量的ddH2O； 所述PCR扩增反应的程序为： 第一阶段95℃预变性10min； 第二阶段95℃变性20s， 61℃ 退火/延伸40s， 共10个循环； 第三阶段95℃变性20s， 55℃退火/延伸40s， 共31个循环； 第四 阶段25℃保持10mi n。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 所述引物 组中， 正向引物1、 正向引物2和反 向引物的体积比为2:2:5 。 10.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 所述谷子基因组DNA的浓度 为50～100n g/ μL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317810 A 2一种鉴别谷 子叶酸性状的SNP位点、 KASP分子标记引物组及其 应用 背景技术 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种鉴别谷子叶酸性状的S NP位点、 KASP分子 标记引物组及其应用。 技术领域 [0002]谷子是我国重要的粮食作物 之一， 种植面广， 受众面广。 随着环境和人们生活需求 的改变， 优良谷子品种的选育工作仍然势在必行。 谷子品种的选育主要包括传统杂交育种 和现代分子标记选育技术， 传统杂交育种依靠天然基因的不同组合， 首先需要选择目的性 状优良的父本和母本， 该 方法对杂交方法和设备要求 不高， 但是耗时长 。 [0003]现代分子标记选育技术是近年来逐渐兴起的育种技术， 利用分子标记能够反映生 物个体或种群间基因组中某种差异的特性， 能够针对谷子不同性状进 行选育， 目的性更强， 效果更佳明显， 且耗时短， 所以是目前谷 子品种选 育的热门技 术。 [0004]叶酸是一种水溶性维生素， 是维持生命活动的重要维生素， 其能够参与遗传物质 和蛋白质的代谢， 促进动物繁殖和 生长和提高免疫力。 目前妊娠妇女或者计划妊娠妇女均 提倡服用叶酸， 用以预防胎儿发育缺陷。 因此培育高叶酸含量的谷子品种， 对于提高人膳食 中叶酸的摄入量具有重要健康价值。 然而， 现有技术并未出现关于谷子叶酸分子标记的研 究。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种鉴别谷子叶酸性状的SNP位点、 KASP分子标记引物组 及其应用， 快速 筛选和鉴定 谷子叶酸性状， 提高 高叶酸谷 子种质的选 育效率。 [0006]本发明提供了一种鉴别谷子叶酸性状的SNP位点， 所述SNP位点位于谷子SiADCL1 基因第1号外 显子上， 且在第1号外 显子的164bp处多态性 为T/C。 [0007]优选的， 所述SNP的多态性位点位于SEQ  ID No.1所示的核苷酸序列的第164bp处， 且多态性 为T/C。 [0008]本发明还提供了一种鉴别上述SNP位点的KASP分子标记引物组， 包括序列为SEQ   ID NO.3所示的正向引物1、 序列为SEQ  ID NO.4所示的正向引物2和序列为SEQ  ID NO.5所 示的反向引物。 [0009]本发明还提供了一种用于检测上述SNP位点 的试剂盒， 包括上述 的KASP分子标记 引物组； [0010]所述引物组中正向引物1和正向引物2的使用浓度独立为4～10μmol/L； 所述引物 组中的反向引物的浓度为 4～10 μmo l/L。 [0011]本发明还提供了上述SNP位 点或KASP分子标记引物组在谷 子育种中的应用。 [0012]本发明还提供了上述SNP位点或KASP分子标记引物组在筛选高叶酸谷子中的应 用。说　明　书 1/9 页 3 CN 114317810 A 3