(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210194920.6 (22)申请日 2022.02.28 (71)申请人 江汉大学 地址 430056 湖北省武汉市沌口经济技 术 开发区新江大路8号 (72)发明人 陈利红　彭海　万人静　方治伟　 李论　高利芬　周俊飞　李甜甜　 肖华锋　 (74)专利代理 机构 北京众达德权知识产权代理 有限公司 1 1570 专利代理师 刘杰 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种准确检测玉米转基因成分的引物组、 试 剂盒及方法 (57)摘要 本申请涉及生物 技术领域， 尤其涉及一种准 确检测玉米转基因成分的引物组、 试剂盒及方 法； 所述引物组包括36对检测引物对， 36对检测 引物对的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.1～SEQ   ID NO.72所示； 2对扩增引物对 的核苷酸序列分 别如SEQ ID NO.73～SEQ  ID NO.76所示； 所述试 剂盒包括引物组； 所述方法包括： 分别得到核苷 酸序列； 根据核苷酸序列， 分别设计出引物组； 提 取待检样品的基因组DNA， 得到待测玉米转基因 成分的基因组DNA； 以基因组DNA为模板， 以引物 组为扩增体系进行扩增反应， 得到扩增产物； 将 扩增产物进行高通量测序， 得到高通量测序数 据； 将高通量进行基因分析， 确定待测玉米样品 中是否含有转基因成分； 通过设计出的引物组， 能够实现在同一PCR反应中实现多个靶 标分子的 同时检测。 权利要求书1页 说明书14页 序列表12页 附图2页 CN 114507749 A 2022.05.17 CN 114507749 A 1.一种准确检测玉米转基因成分的引物组， 其特征在于， 所述引物组包括36对检测引 物对和2对扩增引物对， 36对所述检测引物对的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.1～SEQ  ID  NO.72所示； 2对所述扩增引物对的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.73～SEQ  ID NO.76所示。 2.根据权利要求1所述的引物 组， 其特征在于， 所述检测引物对用于检测玉米 中36种转 基因元件， 36种所述转基因元件包括p35S、 t 35S、 pNOS、 tNOS、 tPINII、 pRBCS4、 t E9、 Bar、 PAT、 HPT、 GUS、 CrylAb ‑Ac、 Cry1A.105、 Cry9C、 Vip3Aa、 Cry2Ab、 G10evo ‑EPSPS、 amy797E、 AAD ‑1、 eCry3.1Ab、 tORF25、 Cry34Ab1、 Cry35Ab1、 pRice_actin、 pFMV35S、 cry1F、 CTP2、 tahsp17、 zmhsp、 Adh1、 G OX、 Cry2Ab、 2mepsps、 cry3Bb1、 cry3A和pmi。 3.根据权利要求1所述的引物 组， 其特征在于， 所述扩增引物对用于对玉米内参基因进 行扩增， 所述玉米内参基因包括Zei n。 4.根据权利要求1所述的引物组， 其特征在于， 36对所述检测引物对和2对所述扩增引 物对中各引物的长度都为18bp～3 0bp。 5.一种准确检测玉米转基因成分的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括如权利要求 1‑4任一项所述的引物组。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还 包括多重PCR预混液。 7.一种准确检测玉米转基因成分的试剂 盒的应用， 其特征在于， 所述应用包括： 将如权 利要求5或权利要求6所述的试剂盒用于检测转基因玉米及玉米衍 生产品中。 8.一种准确检测玉米转基因成分的方法， 其特 征在于， 所述方法包括： 分别得到玉米转基因成分和玉米内参基因的核苷酸序列； 根据所述玉米转基因成分和所述玉米 内参基因 的核苷酸序列， 分别设计出如权利要求 1‑4任一项所述的引物组； 提取待测样品的基因 组DNA， 得到待测玉米样品的基因 组DNA； 以所述基因组DNA片段为模板， 以所述引物组为扩增体系进行扩增反应， 得到扩增产 物； 将所述扩增产物进行高通 量测序， 得到高通 量测序数据； 将所述高通 量进行基因分析， 确定待测玉米样品是否含有转基因成分。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 所述将所述扩增产物进行高通量测序， 得 到高通量文库， 具体包括： 将所述扩增产物进行高通 量测序文库的构建， 得到高通 量测序文库； 得到所述高通 量测序文库的实际浓度； 根据高通量测序文库的所述实际浓度和高通量测序文库说明书上标准浓度的大小， 判 断所述高通 量测序文库是否合格； 若所述实际浓度＞所述标准浓度的最低浓度， 则将所述高通 量测序文库进行测序。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述高通量文库的所述标准浓度≥2ng/ uL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114507749 A 2一种准确检测玉米转基因成分的引物组、 试剂盒及方 法 技术领域 [0001]本申请涉及生物技术领域， 尤其涉及一种准确检测玉米转基因成分的引 物组、 试 剂盒及方法。 背景技术 [0002]玉米是当今世界重要的粮食作物之一， 是我国三大粮食作物之首。 玉米产业健康 发展对保障国家 粮食安全和农产品有效供给具有重要意义。 玉米同时又是饲料工业和畜牧 业的重要原料之一， 其作为饲料在粮食总需求量中所占的比重逐渐增加。 从播种到收获， 玉 米多会受到多种虫害的影响， 严重影响其产量和品质。 通过基因工程途径改良作物重要性 状可以有效解决这些问题， 但是转基因玉米被直接或间接地制成食品以及国际社会对转基 因产品安全性问题的日益关注， 农产品中的转基因成分检测已纳 入国内外检验检疫部门的 检测项目并逐渐得到加强。 因此， 开发高效、 便捷的转基因食品检测技 术显得至关重要。 [0003]目前应用较广 泛是的普通多重PC R， 但是由于普通多重PC R的限制， 若超过8重检测 引物， 将会导致扩增引物之 间的交叉影响， 从而影响检测的准确性， 并且也将 影响检测的特 异性， 增加检测工作的难度。 [0004]因此如何基于普通多重PCR进行多种玉米转基因成分的准确检测， 是目前亟需解 决的技术问题。 发明内容 [0005]本申请提供了一种准确检测玉米转基因成分的引 物组、 试剂盒及方法， 以解决现 有技术中普通多重PCR检测方法在检测多种玉米转基因成分时， 检测通 量低的技 术问题。 [0006]第一方面， 本申请提供了一种准确检测玉米转基因成分的引 物组， 所述引 物组包 括36对检测引物对和2对扩增引物对， 36对所述检测引物对的核苷酸序列分别如SEQ  ID  NO.1～SEQ  ID NO.72所示； [0007]2对所述扩增引物对的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.73～SEQ  ID NO.76所示。 [0008]可选的， 所述检测引物对用于检测玉米中常见的36种转基因元件， 36种所述转基 因元件包括p35S、 t35S、 pNOS、 tNOS、 tPINII、 pRBCS4、 tE9、 Bar、 PAT、 HPT、 GUS、 Cry1Ab ‑Ac、 Cry1A.105、 Cry9C、 Vip3Aa、 Cry2Ab、 G10evo ‑EPSPS、 amy797E、 AAD ‑1、 eCry3.1Ab、 tORF25、 Cry34Ab1、 Cry35Ab1、 pRice_actin、 pFMV35S、 crylF、 CTP2、 tahsp17、 zmhsp、 Adh1、 GOX、 Cry2Ab、 2mepsps、 cry3Bb1、 cry3A和pmi。 [0009]可选的， 所述扩增引 物对用于对玉米内参基因进行扩增， 所述玉米内参基因包括 Zein。 [0010]可选的， 36对所述检测引物对和2对所述扩增引物对中各引物的长度都为18bp～ 30bp。 [0011]第二方面， 本申请提供了一种准确检测玉米转基因成分的试剂盒， 所述试剂盒包 括第一方面所述的引物组。说　明　书 1/14 页 3 CN 114507749 A 3