(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210189532.9 (22)申请日 2022.02.28 (71)申请人 江苏汇先医药技 术有限公司 地址 215301 江苏省苏州市昆山市玉山 镇 中华园西路1798号12号房4层、 5层 (72)发明人 颜菁　袁青　刘艳　 (74)专利代理 机构 苏州创元专利商标事务所有 限公司 3210 3 专利代理师 李萍 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 新型冠状病毒SARS-CoV-2 的检测试剂盒及 引物组合物、 检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种新型冠状病毒SARS ‑CoV‑ 2的检测试剂盒及引物组合物、 检测方法。 该新型 冠状病毒SARS ‑CoV‑2的检测试剂盒， 包 括针对所 述新型冠状病毒SARS ‑CoV‑2的Orflab基因的第 一引物组及针对所述新型冠状病毒SARS ‑CoV‑2 的N基因的第二引物组； 所述第一引物组包括核 苷酸序列依 次如SEQ ID NO.1～SEQ  ID NO.6所 示的外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物 BIP、 环引物LF及 环引物LB； 所述第二引物组包 括 核苷酸序列依次如SEQ  ID NO.7～SEQ  ID NO.11 所示的外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物 BIP、 及环引 物LB。 本发明的新型冠状病毒SARS ‑ CoV‑2的检测试剂盒及引物组合物、 检测方法， 检 测准确率较高的同时， 灵敏度较好且操作方便、 检测时间较短。 权利要求书2页 说明书9页 序列表9页 附图1页 CN 114561491 A 2022.05.31 CN 114561491 A 1.一种新型冠状病毒SARS ‑CoV‑2的检测试剂盒， 其特征在于， 包括针对所述新型冠状 病毒SARS ‑CoV‑2的Orflab基因的第一引物组及针对所述新型冠状病毒SARS ‑CoV‑2的N基因 的第二引物组； 所述第一引物组包括核苷酸序列依次如SEQ  ID NO.1～SEQ  ID NO.6所示的 外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物BIP、 环引物LF及环引物 LB； 所述第二引物组包括核 苷酸序列依次如SEQ  ID NO.7～SEQ  ID NO.11所示的外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引 物BIP、 及环引物LB。 2.根据权利要求1所述的检测试剂盒， 其特 征在于， 每条 所述引物单独封装。 3.根据权利要求1所述的检测试剂 盒， 其特征在于， 所述第 一引物组的各引物 组成第一 引物混合液； 所述第二引物组的各引物组成第二引物混合液。 4.根据权利要求3所述的检测试剂盒， 其特征在于， 所述第一引物混合液中， 所述第一 引物组的外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物BIP、 环引物LF及环引物LB的摩尔比为1∶ 1 ∶8∶8∶4∶4； 所述第二引物混合液中， 所述第二引物组的外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内 引物BIP、 及环引物LB的摩尔比为1∶ 1∶8 ∶8 ∶ 4。 5.根据权利要求4所述的检测试剂 盒， 其特征在于， 所述检测试剂 盒还包括以下物质中 的一种或多种的组合： dNTPs、 MgCl2、 10×Isothermo  Buffer、 酶、 20 ×EvaGreen Dye、 模板 及ddH2O。 6.根据权利要求1所述的检测试剂盒， 其特征在于， 所述检测试剂盒的判读标准为： 若 针对Orflab基因和N基因的荧光曲线均具有 “S”形曲线， 则判定为阳性； 若针对Orflab基因 和N基因的荧光曲线均无 “S”形曲线， 则判定为阴性； 若针对Orflab基因和N基因的荧光曲线 中一者具有 “S”形曲线而另一者无 “S”形曲线， 则重新检测， 若仍然为一者具有 “S”形曲线而 另一者无“S”形曲线， 则判定为阳性。 7.一种新型冠状病毒SARS ‑CoV‑2的引物组合物， 其特征在于， 包括针对所述新型冠状 病毒SARS ‑CoV‑2的Orflab基因的第一引物组及针对所述新型冠状病毒SARS ‑CoV‑2的N基因 的第二引物组； 所述第一引物组包括核苷酸序列依次如SEQ  ID NO.1～SEQ  ID NO.6所示的 外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物BIP、 环引物LF及环引物 LB； 所述第二引物组包括核 苷酸序列依次如SEQ  ID NO.7～SEQ  ID NO.11所示的外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引 物BIP、 及环引物LB。 8.一种非诊断治疗目的的新型冠状病毒SARS ‑CoV‑2的检测方法， 其特征在于， 使用如 权利要求 1至6任一项 所述的检测试剂盒或如权利要求7所述的引物组合物， 和样本 混合后， 进行环介导 等温扩增反应。 9.根据权利要求8所述的检测方法， 其特征在于， 所述扩增反应的程序为60～65℃反应 10～30min。 10.根据权利要求8所述的检测方法， 其特征在于， 使用第一扩增体系检测样本中的 Orflab基因， 使用第二扩增体系检测样本中的N基因， 其中： 所述第一扩增体系包括所述第 一引物组、 dNTPs、 MgCl2、 10×Isothermo  Buffer、 酶、 20 ×EvaGreen  Dye、 模板及ddH2O； 所述 第二扩增体系包括所述第二引物组、 dNTPs、 MgCl2、 10×Isothermo  Buffer、 酶、 20 × EvaGreen Dye、 模板及d dH2O。 11.根据权利要求10所述的检测方法， 其特征在于， 所述第 一扩增体系或第 二扩增体系 中， 引物组合物的浓度为0.1～2.0 μM， dNTPs的浓度为1.0～2.0mM， MgCl2的浓度为5～10mM；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114561491 A 2和/或， 所述第一引物组的外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物BIP、 环引物LF及环引物 LB的摩尔比为1∶1∶8∶8∶4∶4， 所述第二引物组的外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物 BIP、 及环引物LB的摩尔比为1∶ 1∶8 ∶8 ∶ 4。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114561491 A 3