(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210188192.8 (22)申请日 2022.02.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114657247 A (43)申请公布日 2022.06.24 (73)专利权人 北京莱盟君泰国际医疗技 术开发 有限公司 地址 100000 北京市北京经济技 术开发区 经海三路3 5号院4号楼4层 (72)发明人 徐建锋　李典格　张泽跃　李清华　 张素芳　 (74)专利代理 机构 成都顶峰专利事务所(普通 合伙) 51224 专利代理师 钱学宇(51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C40B 50/06(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 WO 2022032429 A1,202 2.02.17 WO 2022032429 A1,202 2.02.17 US 20182740 39 A1,2018.09.27 CN 108064314 A,2018.0 5.22 IN 2019170 39780 A,2019.1 1.01 CN 109825 583 A,2019.0 5.31 审查员 蒋红云 (54)发明名称 用于早期肝癌检测的DNA甲基化生物标记物 或组合及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于早期肝癌检测的DNA 甲基化生物标记物或组合， 包括以下至少一种甲 基化标记物： cg20884887， cg06437004， cg10483825， cg18233405， cg18766755， cg21769702， cg27134730， cg01578265， cg18842353， cg06613738， 本发明公开了十个与 肝癌发生相关的特异性甲基化标记物， 能够显著 提高早期肝癌的检出率。 甲基化标记物进一步与 年龄、 性别信息结合后所训练出的模 型在区分良 性肝病(肝炎、 肝硬化)和早期肝癌 时的预测AUC 值可达0.917， 并鉴于 血浆检测的无创性， 适于 大 规模推广应用。 权利要求书1页 说明书9页 附图7页 CN 114657247 B 2022.12.02 CN 114657247 B 1.一种用于早期肝癌检测的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包含检测DNA甲基化标记 物组合甲基化水平试剂， 所述DNA甲基化标记物组合包括： cg20884887， cg06437004， cg10483825， cg18233405， cg18 766755， cg21769702， cg27134730， cg01578265， cg18842353 和cg06613738。 2.一种用于早期肝癌检测的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包含检测DNA甲基化标记 物组合甲基化水平试剂， 所述DNA甲基化标记物组合包括： cg20884887， cg06437004， cg10483825和cg1823 3405。 3.根据权利要求2所述的用于早期肝癌 检测的试剂盒， 其特征在于， 所述cg20884887的 DNA甲基化标记物为hg19人类基因组中chr7:27208285 ‑27208286之间的CpG位点； 所述 cg06437004的DNA甲基化标记物是指h g19人类基因组中chr12:21810458 ‑21810459之间的 CpG位点； 所述cg10483825的DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组中chr12:21810450 ‑ 21810451之间的CpG位点； 所述cg18233405的DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组中 chr8:98290148‑98290149之间的CpG位 点。 4.一种用于早期肝癌检测的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包含检测DNA甲基化标记 物组合甲基化水平试剂， 所述DNA甲基化标记物组合包括： cg18766755， cg21769702， cg2713473 0， cg0157826 5， cg18842353， cg06613738。 5.根据权利要求4所述的用于早期肝癌 检测的试剂盒， 其特征在于， 所述cg18766755的 DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组 中chr1:153029939 ‑153029940之间的CpG位点； 所述 cg21769702的DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组中chr11:127811589 ‑127811590之间 的CpG位点； 所述c g27134730的DNA甲基化标记物是指h g19人类基因组中chr2:124633001 ‑ 124633002之间的CpG位点； 所述cg01578265的DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组中 chr85:114110567 ‑114110568之间的CpG位点； 所述cg18842353的DNA甲基化标记物是指 hg19人类基因组 中chr13:697794052 ‑97794053之间的CpG位点； 所述cg06613 738的DNA甲基 化标记物是指hg19人类 基因组中chr16:15596423‑15596424之间的CpG位 点。 6.根据权利要求1 ‑5任一项所述的用于早期肝癌检测的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒使用下述检测方法进行检测： PCR扩增法， 甲基化芯片法， 液相芯片法， 重亚硫酸盐测序， 一代测序， 二代测序， 三代测序。 7.根据权利要求6所述的用于早期肝癌检测的试剂盒， 其特征在于， 所述PCR扩增法为 数字PCR或荧 光定量PCR。 8.根据权利要求6所述的用于早期肝癌检测的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒采用二 代测序的检测方法。 9.根据权利要求6所述的用于早期肝癌检测的试剂盒， 其特征在于， 所述早期肝癌为I 期肝癌。 10.一种探针， 所述探针用于检测权利要求1 ‑5任一项所述的DNA甲基化标记 物组合。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114657247 B 2用于早期肝癌检测的DNA甲 基化生物标记物或组合及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术技术领域， 具体涉及一种用于早期 肝癌检测的DNA  甲基化生 物标记物或组合及其应用。 背景技术 [0002]众所周知的是， 癌症的早发现早治疗可以极大的提高患者的成活率。 肝癌  5年相 对生存率仅为12.1％， 但是， 如果早期诊断经过有效治疗， 可达到相对较好的预后， 尤其是5 公分以内的小肝癌， 5年生存率可达到8 0％以上。 目前， 肝癌筛查效果不理想， 检出率和早期 诊断率相对偏低， 如何早期发现癌症， 已经成为医学界的关注重点， 因此开 发出一种新的便 捷的早期癌症筛查方法对于个人， 对于社会都有非常重要的意 义。 [0003]DNA甲基化与肿瘤的发生紧密相关， 在肿瘤细胞中普遍存在着D NA甲基化状态的改 变， 特点是总体甲基化水平降低和局部甲基化水平的升高。 而且对于早期肿瘤的发生， 甲基 化的修饰也起着至 关重要的作用。 同时相对于其他血液肿瘤标记物 来说， 血液cfDNA甲基化 稳定性更好， 可以被稳定检出。 因此， 检测特定位点血液cfDNA甲基化， 可以用于推测肝脏是 否存在癌变， 从而实现对肝癌早筛早诊的目标。 发明内容 [0004]为了解决现有技术存在的上述问题， 本发明的主要目的是提供了与肝癌发生相关 的DNA甲基化标记物及其组合， 该甲基记标记物可用于诊断肝癌的发病情况， 其技术方案如 下所述： [0005]一种用于早期肝癌检测的DNA甲基化生物标记物或组合， 包括以下至少一种甲基 化标记物： cg20884887， cg06437004， cg10483825， cg18233405，  cg18766755， cg21769702， cg2713473 0， cg0157826 5， cg18842353， cg06613738。 [0006]进一步的， 包括cg208 84887， cg06437004， cg10483825， cg1823 3405。 [0007]进一步的， 包括cg18766755， cg21769702， cg27134730， cg01578265，  cg18842353， cg06613738。 [0008]进一步的， 所述cg20884887的DNA甲基化标记物为hg19人类基因组中  chr7: 27208285 ‑27208286之间的CpG位 点； [0009]进一步的， 所述cg06437004的DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组中  chr12: 21810458 ‑21810459之间的CpG位 点； [0010]进一步的， 所述cg10483825的DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组中  chr12: 21810450‑21810451之间的CpG位 点； [0011]进一步的， 所述cg18233405的DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组中  chr8: 98290148‑98290149之间的CpG位 点。 [0012]进一步的， 所述cg18766755的DNA甲基化标记物是指hg19人类基因组中  chr1: 153029939‑153029940之间的CpG位 点；说　明　书 1/9 页 3 CN 11