(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210189570.4 (22)申请日 2022.03.01 (71)申请人 天津市农业科 学院 地址 300192 天津市南 开区航天道 26号 (72)发明人 郭晓飞　张效生　张金龙　李义海　 冯婧　姚大为　李玉鹏　 (74)专利代理 机构 天津市杰盈专利代理有限公 司 12207 专利代理师 朱红星 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与绵羊奶体细胞数相关的SNP分子标记 及应用 (57)摘要 本发明提供一种与绵羊奶体细胞数相关的 SNP分子标记及应用， 它位于第11号染色体第 42139093处； 其SNP分子标记的多态性为A/G； 所 述SNP位点信息基于的绵羊基因组序列信息版本 号为ARS‑UI_Ramb_v2.0， 2020年11月。 本发明所 提供的SNP分子标记， 不受绵羊年龄和性别的限 制， 可用于绵羊奶体细胞数性状的早期选育。 针 对刚出生的小母羊收集血液样 本后， 经基因分型 后即可预测其成年后奶样中体细胞数的高低； 针 对刚出生的小公羊收集血液样 本后， 经基因分型 后即可知 道其是否携带奶体细胞数低 （低乳房炎 患病率） 的遗传特性， 以指导其配种并预测其后 代母羊的奶样体细胞数的情况。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图2页 CN 114525346 A 2022.05.24 CN 114525346 A 1.一种与绵羊奶体细胞数性状相关的SNP分子标记， 其特征在于它位于第11号染色体 第42139093处； 其SNP分子标记的多态性 为A/G。 2.一种如权利 要求1所述的SNP分子标记的特异性引物， 其特征在于， 上游引物序列SEQ   ID NO: 1所示， 下游引物序列如SEQ  ID NO: 2所示； SEQ No.1： AAGTCCCTGCTCAAGAACGA SEQ No.2： GAGC CTGTCAGTGTG GATCA。 3.一种如权利要求1所述的SNP分子标记在预测绵羊奶体细胞 数中的应用。 4.一种如权利要求1所述的SNP分子标记在预测绵羊奶体细胞数中的方法， 其特征在于 按如下的步骤进行： （1） 颈静脉抽取目标绵羊的抗凝血， 并用于DNA提取； （2） 以提取的DNA为模板， 利用SNP分子标记的特异性引物进行PCR扩增， PCR扩增的退火 温度为60℃， 并获得目标PCR产物； （3） 对步骤 （2） 中的PCR产物进行sanger测序， 分析其基因型 （A A、 AG、 GG） ； （4） 结果判断： 根据基因型不同判断绵羊的奶样体细胞 数， 以预测其患乳房炎的风险。 5.权利要求 4中所述的方法， 其中绵羊的DNA从其颈静脉抗凝血中提取。 6.一种如权利要求1中所述的SNP分子标记在选育低体细胞数、 低乳房炎患病率的绵羊 中的应用。 7.一种利用如权利要求1中所述的SNP分子标记选育低体细胞数 （低乳房炎患病率） 绵 羊的方法， 其特征在于： 不断选择保留羊群中第11号染色体第42139093处SNP分子标记为G 的基因后代， 不断淘汰羊群中第1 1号染色体第42139093处SNP分子标记为A的基因后代。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114525346 A 2一种与绵羊奶 体细胞数相关的SNP分子标记及应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种与绵羊奶体细胞数相关的S NP分子标记及其应用， 属于绵羊S NP分 子标记技 术领域。 背景技术 [0002]奶样中的体细胞由白细胞和少量上皮细胞所组成， 体细胞主要来源于机体免疫系 统， 其在奶中发挥着吞噬异物、 排除感染和修复组织等功能作用。 乳房中体细胞是始终存在 的， 数量变化范围也较大。 当绵羊乳房受到病菌等感染时， 奶样 中的体细胞会大大增加； 而 炎症减轻后， 其体细胞数也将逐渐减少。 因此， 绵羊奶中的体细胞数是反映绵羊乳房健康状 况和判断其乳房炎轻重的重要手段， 同时也和绵羊奶的质量有关。 在奶牛中， 研究者们通常 认为体细胞 数超过500k/ml时， 则判断个 体可能感染了 乳房炎。 [0003]影响奶样中体细胞数变化的因素有很多， 包括年龄、 泌乳期、 体型、 挤奶时间、 季 节、 营养水平和遗传因素等。 在奶牛中， 已报道了信号通路及一些关键基因的多态性与其体 细胞数性状存在密切的关联， 如细胞内JAK ‑STAT信号转到通路参与了细胞增殖、 分化、 凋亡 和免疫调节等许多重要生物学过程， 介导着乳房中的免疫反应； 其中STAT5b和JAK2等基因 的多态性 （SNP变异） 与牛奶中的体细胞 数存在显著相关 关系。 [0004]目前， 尚没有发现与绵羊奶体细胞 数性状紧密相关的SNP位 点。 发明内容 [0005]本发明公开了一种与绵羊奶体细胞数相关的SNP分子标记及其应用， 通过本发明 公开的特异性引物， 所检测的SNP位点突变信息可以用于绵羊低体细胞数 （低乳房炎患病 率） 性状的分子标记辅助选 育工作。 [0006]为实现绵羊奶体细胞数的分子鉴定和未来的分子标记辅助 选择低体细胞数 （低乳 房炎患病率） 绵羊品种， 本发明采用如下技 术方案。 [0007]一种与绵羊产奶量相关的SNP分子标记， 其特征在于它位于第11号染色体第 42139093处； 其SNP分子标记的多态 性为A/G； 所述SNP位点信息基于的绵羊基因组序列信息 版本号为ARS ‑UI_Ramb_v2.0， 2020年11月。 其中所述的SNP分子标记的特异性引物， 其特征 在于， 上游引物序列如SEQ  ID NO: 1所示， 下游引物序列如SEQ  ID NO: 2所示； SEQ ID NO: 1AAGTCCCTGCTCAAGAACGA SEQ ID NO: 2 GAGCCTGTCAGTGTG GATCA。 [0008]本发明进一步公开了所述的SNP分子标记在预测绵羊奶体细胞数中的应用。 其应 用可用于绵羊奶体细胞数性状的早期 选育。 实验结果显示绵羊第11号 染色体第42139093处 SNP分子标记存在A/G突变， 且与绵羊奶体细胞数性状显著相关。 同时本发明也公开了预测 绵羊奶体细胞 数中的方法， 其特 征在于按如下的步骤进行： （1） 颈静脉抽取目标绵羊的抗凝血 （绵羊的D NA从其颈静脉抗凝血中提取） ， 并用于 DNA提取；说　明　书 1/3 页 3 CN 114525346 A 3