(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210200086.7 (22)申请日 2022.03.01 (71)申请人 中国科学院昆明动物研究所 地址 650223 云南省昆明市五华区教场东 路32号 (72)发明人 杨翠萍　陈勇彬　申秋硕　熊秋霞　 (74)专利代理 机构 昆明同聚专利代理有限公司 53214 专利代理师 苏芸芸 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 33/243(2019.01) A61K 31/444(2006.01) A61K 38/17(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 人MRGPRF基因在肿瘤临床诊 疗中的应用 (57)摘要 本发明公开了人MRGPRF的新用途， 即人 MRGPRF基因表达量检测试剂在制备黑色素瘤临 床诊断试剂中的应用； 实验结果显示人MRGPRF基 因在黑色素瘤细胞系中较人永生化表皮细胞表 达低； MRGPRF基因过表达后， 黑色素瘤细胞系的 增殖受到显著抑制， 细胞周期阻滞在G0/G1期； 此 外， 内皮细胞增殖抑制剂AMG  706可作为MRGPRF 的潜在激动剂， 在体内外阻碍肿瘤生长， MrgprF 蛋白的274 ‑343肽段竞争结合p110 ‑γ、 p101蛋 白， 降低PI3K/AKT信号通路活性作用， 从而抑制 黑色素瘤发生发展； 本发明揭示了人MRGPRF基因 是黑色素瘤的肿瘤抑制因子， 并筛选到了靶向 MRGPRF的潜在抗癌化合物或多肽， 为未来的黑 色 素瘤治疗提供治 疗药物。 权利要求书1页 说明书15页 序列表3页 附图22页 CN 114480653 A 2022.05.13 CN 114480653 A 1.人MRGPRF基因表达量检测试剂在制备黑色素瘤临床诊断试剂中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 人MRGPRF基因表达量检测试剂是检测人 MRGPRF基因低表达量的试剂。 3.根据权利 要求2所述的应用， 其特征在于： 检测人MRGPRF基因表达量是利用人MRGPRF 基因序列设计人MRGPRF的RNA引物序列， 并通过 实时定量PCR法检测人MRGPRF的RNA的水平； 所述RNA的引物序列为： SEQ ID NO:1： CGTCACTGAC CTGTGCATCT； SEQ ID NO:2： CTC CATGGTGACTGTGT TGG。 4.以激活或过表达人MRGPRF基因为筛 选目的在筛 选黑色素瘤治疗药物中的应用。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征在于： 药物为AMG  706。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于： AMG  706药物与顺铂联用在制备治疗黑色 素瘤药物中。 7.基于人MRGPRF基因对PI3K/AKT信号通路的抑制作用， 以抑制PI3K/AKT信号通路为筛 选目的在筛 选黑色素瘤治疗药物中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于： 药物为小肽MrgprF274‑343， 小肽的氨基酸序 列如SEQ ID NO:3所示。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于： 小肽MrgprF274‑343能与人p110 ‑γ蛋白相互 作用， 阻断或降低p 110‑γ与p101的相互结合， 进而降低PI3K/AKT信 号通路活性作用， 实现 抑制黑色素瘤发生发展。 10.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于： 小肽MrgprF274‑343作为强化化疗药物在协 同顺铂化疗治疗黑色素瘤中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480653 A 2人MRGPRF基因在肿瘤临床诊疗中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种基因的新用途， 尤其是人MRGPRF基因在肿瘤临床诊疗中的新用 途， 具体涉及人MRGPRF基因在黑色素瘤临床诊疗中的应用。 背景技术 [0002]皮肤黑色素瘤(cutaneous  melanoma： CM)是皮肤癌死亡的主要原因， 与其他类型 的人类癌症相比， 近年来在世界范围内迅速增加。 根据美国流行病学数据， 高龄和高加索种 族是黑色素瘤的2个关键危险因素， 另外， 室内晒黑(尤其是年轻女性)也被明确为危险因 素。 S100钙结合蛋 白‑p， MLANA(T细胞1识别的黑色素瘤抗原)和MITF(小眼畸形相关转录因 子)经常被用作显示低特异性的模糊病例的标志物。 BRAF(B ‑Raf原癌基因)、 CDKN2a(细胞周 期蛋白依赖性激酶抑制剂2A)和NRAS(神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物)中基因突变的 鉴定可以提高诊断的准确 性。 前期的研究表明， 有利于肿瘤侵袭和浸润的信号通路的激活 证明黑色素瘤 进展是由基因突变和肿瘤微环境改变引起的。 例如， 黑色素瘤中包括MMP ‑2和 MMP‑9在内的基质金属蛋白酶(M MPs)已被 证明是由NF ‑κ B的信号 通路诱导产生。 [0003]除肿瘤微环境改变外， BRAF、 CDKN2a、 N RAS、 NF1、 TP 53、 PTEN和TERT的体细胞突变主 要导致丝裂原活化蛋 白激酶(MAPK)途径和磷酸肌醇 ‑3‑激酶信号(PI3K/Akt)通路的激活。 参与生长因子和激素转导的MAPK途径， 已被证明在不同类型的癌症 中被激活。 PI3K/Akt途 径通常被受体酪氨酸激酶(RTKs)和G蛋 白偶联受体(GPCRs)激活， 导致磷脂酰肌醇 ‑(3， 4)‑ P2(PIP2)向磷脂酰肌醇 ‑(3， 4， 5)‑P3(PIP3)的转化增加， 以及Akt蛋白上的高水平磷酸化。 然而， 由于缺乏可靠的诊断生物标志物， 要改进致死的黑色素瘤的早期诊断， 仍有很多工作 要做。 [0004]大多数黑色素瘤患者应每年接受皮肤科检查， 手术切除仍然是大多数治愈性病例 的首选， 然而处于更晚期的患者可能无法切除或已经转移。 近年来， 随着靶向和/或免疫疗 法的应用， 包括BRAF和MEK(MAP ‑ERK激酶)抑制剂以及免疫检查点抑制剂(抗细胞毒性T淋巴 细胞相关抗原4(CTLA ‑4)抗体和抗程序化细胞死亡蛋白1(PD ‑1)抗体)， 黑色素瘤治疗发生 了革命性变化。 [0005]我们最近的研究确定了多种人类癌症中表达失去管控的泛癌生物标志物， 通过使 用综合生物信息学分析， 结合其他网络来源可用的黑色素瘤相关数据集， 我们确定MRGPRF (一种与MAS相关的GPR家族成员)在多种类型的人类癌症(包括黑色素瘤)中减少。 Mas相关 基因(Mrgs)属于GPCR基因家族， 主要在背根神经节(DRGs)和三叉神经节(TG)的感觉神经元 亚群中表达， 之前的研究主要集中在瘙痒和疼痛感上。 然而， Mrgs在神经系统外的表达失调 尚未得到深入研究， 只有少数报道。 例如， MrgprD被证明在非小细胞肺癌和小鼠肠道癌中上 调表达。 MRGX2已被证明在被抗菌肽基因家族杀菌素LL ‑37激活后参与癌症进展。 这些发现 表明， Mrgs在其他正常 的人类发育过程和病理状况(如人类癌症)中起着关键作用。 MRGPRF 在黑色素瘤中的功能作用和分子 机制尚不可知。说　明　书 1/15 页 3 CN 114480653 A 3