(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221019869 2.X (22)申请日 2022.03.02 (71)申请人 贵州大学 地址 550025 贵州省贵阳市花溪区甲秀 南 路 (72)发明人 鲁敏　饶添枝　安华明　蒋兰兰　 南红　郑珊瑚　马文涛　覃家雪　 (74)专利代理 机构 北京鑫瑞森知识产权代理有 限公司 1 1961 代理人 王立普 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) (54)发明名称 一种刺梨无刺1号无刺品系的特异分子标记 及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种刺梨无刺1号无刺品系的 特异分子标记及其应用， 属于农作物分子育种技 术领域。 本发明通过一次双重PCR同时检测双标 记位点， 利用2个InDe1标记即可简单、 快速地鉴 定出刺梨材料中的无刺 1号无刺品系， 而且双标 记位点同时检测， 相互印证， 相互检验， 也能确保 检测结果的准确性、 有效性及可靠性， 因此在刺 梨品种的区分和种间杂交种的鉴定等方面具有 重大应用价值， 也能为创新大果无刺鲜食刺梨品 种提供技术支撑。 此外， 利用本发明在育种材料 的幼苗期提取其叶片基因组DNA进行双重PCR扩 增， 通过观察电泳条带即可鉴定其是否为无刺 1 号无刺品系， 因而也可缩短无刺刺梨的育种周 期， 加快育种进程。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图2页 CN 114317534 A 2022.04.12 CN 114317534 A 1.一种分子标记， 其特征在于， 由分子标记153.61和 分子标记341.112组成； 所述分子 标记153.61的上游引物序列如SEQ  ID No.1所示， 下游引物序列如SEQ  ID No.2所示； 所述 分子标记341.1 12的上游引物序列如SEQ  ID No.3所示， 下游引物序列如SEQ  ID No.4所示。 2.一种特异性引物组合， 其特征在于， 含有核苷酸序列如SEQ  ID No.1～SEQ  ID No.4 所示的引物。 3.一种含有如权利要求2所述的引物组合的试剂盒。 4.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物组合或权利要求3所述的试剂 盒 在无刺刺梨育种中的应用。 5.一种分子标记的方法， 其特征在于， 将 分子标记 153.61和分子标记341.112的引物混 合后扩增刺梨育种材料， 如果能够同时扩增出500bp和100bp的扩增片段， 则 标志着所标记 的育种材料为刺梨无刺1号无刺品系； 所述分子标记153.61的上游引物序列如SEQ  ID No.1 所示， 下游引物序列如SEQ  ID No.2所示； 所述分子标记341.112的上游引物序列如SEQ  ID  No.3所示， 下游引物序列如SEQ  ID No.4所示。 6.一种检测刺梨无刺1号无刺品系的方法， 其特征在于， 用具体序列如SEQ  ID No.1～ SEQ ID No.4所示的引物对提取的刺梨基因组DNA进行PCR扩增； 然后观察扩增结果， 得出结 论。 7.如权利要求6所述方法， 其特征在于， 所述扩增为双重PCR扩增， 所述扩增反应的总体 积为17.5～22.5μL， 其中包括0.9～1.1μL  DNA、 153.61标记上下游引物各0.4～0.6μL、 341.112标记上 下游引物各0.4～0.6 μL、 6～8 μL  ddH2O、 9～11 μLTaq DNA聚合酶。 8.如权利 要求7所述的方法， 其特征在于， 所述扩增反应的过程为： 93～95℃预变性3～ 5min， 93～95℃变性25～35s， 45～55℃退火25～35s， 70～74℃延伸35～45s， 25～35个循 环， 最后总延伸5～8mi n， 3～5℃保温。 9.如权利要求6所述方法， 其特征在于， 所述得出结论的方法为： 如果能够同时扩增出 特异的2条不同大小的500bp和100b p扩增片段， 则标志着所检测的育种材料为刺梨无刺1号 无刺品系。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317534 A 2一种刺梨无刺1号 无刺品系 的特异分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于农作物分子育种技术领域， 尤其涉及一种刺梨无刺1号无刺品系的特 异分子标记及其应用。 背景技术 [0002]刺梨(Rosa  roxburghii  Tratt.)属蔷薇科蔷薇属植物， 是 我国特有的、 并正在大 力开发的新兴果树， 在贵州、 四川、 河南、 广西等省区均有商业化种植和产品加工。 其中贵州 省栽培面积已达230余万亩， 成为全省重点发展的特色产业。 刺梨具有极高的营养、 保健和 医药价值， 但由于刺梨果实密被皮刺导致鲜食消费人群限制， 刺梨鲜果绝大部分(90％以 上)用于加工， 用于鲜食的不足10％； 同时刺梨果刺也给栽培管理、 鲜果采收、 运输、 加工等 带来诸多 不便。 为此， 无刺刺梨(R.roxburghii  Tratt.f.esetesa  Ku)种质资源的搜集与研 究成为提升刺梨鲜 食品质的关键 。 [0003]由于长时间的实生繁殖、 自然变异和种间杂交， 刺梨性状参差不齐、 品种鱼龙混 杂， 出现多种变异类型； 同时无刺刺梨变型与普通刺梨在外观形态上仅有一个性状的差异， 即果实无刺， 在枝叶形态特征上并无差异， 所以利用形态学的方法难以将其区分。 而且目前 在刺梨特异分子标记的研究中也未 涉及利用i nDel标记鉴定无刺性状的方法。 发明内容 [0004]为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种刺梨无刺1号无刺品系的特异分子标 记及其应用。 本发明通过一次双重PCR 同时检测双标记位点， 利用2个InDe1标记即可简单、 快速、 准确、 有效地鉴定出刺梨材料中的无刺1号无刺品系， 在刺梨品种的区分和种间杂交 种的鉴定等方面具有重大应用价值， 同时也能为创新大果无刺鲜食刺梨品种提供技术支 撑， 而且也可缩短无刺 刺梨的育种周期， 加快育种进程。 [0005]为了实现上述目的， 本发明采用了以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种分子标记， 由分子标记153.61和分子标记341.112组成； 所述分 子标记153.61的上游引物序列如SEQ  ID No.1所示， 下游引物序列如SEQ  ID No.2所示； 所 述分子标记341.112的上游引物序列如SEQ  ID No.3所示， 下游引物序列如SEQ  ID No.4所 示。 [0007]本发明还提供了一种特异性引物组合， 含有核苷酸序列如SEQ  ID No.1～SEQ  ID  No.4所示的引物。 [0008]本发明也 提供了一种含有所述引物组合的试剂盒。 [0009]本发明还提供了一种所述分子标记或所述引物组合或所述试剂盒在无刺刺梨育 种中的应用。 [0010]本发明还提供了一种分子标记的方法， 将分子标记153.61和分子标记341.112的 引物混合后扩增刺梨育种材料， 如果能够同时扩增出500bp和100bp的扩增片段， 则 标志着 所标记的育种材料为刺梨无刺 1号无刺品系； 所述分子标记153.61的上游引物序列如SEQ  说　明　书 1/7 页 3 CN 114317534 A 3