(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210200973.4 (22)申请日 2022.03.02 (71)申请人 深圳市南 山区疾病预防控制中心 地址 518054 广东省深圳市南 山区粤海街 道南山区南商路95号 (72)发明人 李勇　鲁晶晶　 (74)专利代理 机构 广州瑞之凡知识产权代理事 务所(普通 合伙) 44514 专利代理师 黄爱君 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测人类肥胖易感基因多态性的探针及试 剂盒 (57)摘要 本发明公开了检测人类肥胖易感基因多态 性的探针， 包括针对FTO基因rs1421085位点的第 一探针AATCAATGTCATGCCTTAGGA、 针对APOA5基因 r s 6 6 2 7 9 9 位 点 的 第 二 探 针 GGCAAATCTCACTTTCGCTCCAG、 针对FABP2基因 r s 1 7 9 9 8 8 3 位 点 的 第 三 探 针 GAATCAAGCGCTTTTCGAAAC、 针对ADRB3基因rs4994 位点的第四探针GGCCATCGCCTGGACTCCGA。 本发明 属于生物 技术领域， 本发明提供一种检测人类肥 胖易感基因多态性的探针， 并进而提供含该探针 的试剂盒， 实现了人类肥胖易 感基因多态性的多 重、 高效检测。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图3页 CN 114517230 A 2022.05.20 CN 114517230 A 1.检测人类肥胖易感基因多态性的探针， 其特征在于： 包括针对FTO基因rs1421085位 点的第一探针AATCAATGTCATGCCTTAGGA， 即SEQ  ID NO:1； 针对APOA 5基因rs662799位点的第 二探针GGCAAATCTCACTTTCGCTCCAG， 即SEQ  ID NO:2； 针对FABP2基因rs1799883位点的第三 探针GAATCAAGCGCTTTTCGAAAC， 即SEQ  ID NO:3； 针对ADRB3基因rs4994位点的第四探针 GGCCATCGCCTGGACTCCGA， 即SEQ  ID NO:4。 2.根据权利要求1所述的检测人类肥胖易感基因多态性的探针， 其特征在于： 所述第 一 探针的5’端用FAM荧 光激发基团修饰， 3 ’端用BHQ1荧 光淬灭基团修饰。 3.根据权利要求1或2所述的检测人类肥胖易感基因多态性的探针， 其特征在于： 所述 第二探针的5 ’端用HEX荧光激发基团修饰， 3 ’端用BHQ1荧 光淬灭基团修饰。 4.根据权利要求1或2所述的检测人类肥胖易感基因多态性的探针， 其特征在于： 所述 第三探针的5 ’端用Texas  Red荧光激发基团修饰， 3 ’端用BHQ2荧 光淬灭基团修饰。 5.根据权利要求1或2所述的检测人类肥胖易感基因多态性的探针， 其特征在于： 所述 第四探针的5 ’端用Cy5荧 光激发基团修饰， 3 ’端用BHQ2荧 光淬灭基团修饰。 6.检测人类肥胖易感基因多态性的试剂盒， 其特征在于： 包括PCR  MIX混合液管， 该混 合液管包括权利要求1至 5中任一项所述的探针。 7.根据权利要求6检测人类肥胖易感基因多态性的试剂盒， 其特征在于： 还包括盒体、 海绵隔板、 FAT ‑GENE标准品对照品管和FAT ‑GENE阴性对照品管； 所述海绵隔板嵌入在所述 盒体内， 所述盒体含盒盖， 所述PCR  MIX混合液管、 所述FAT ‑GENE标准品对照品管、 所述FAT ‑ GENE阴性对照品管分别插 入所述海绵隔板的管孔内。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114517230 A 2检测人类肥胖易感 基因多态性的探针及 试剂盒 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 尤其涉及检测人类肥胖易感基 因多态性的探针及试剂 盒。 背景技术 [0002]肥胖是当今世界上最大的健康 问题之一， 全世界超重和肥胖人口超过20亿， 我国 成人中超重或肥胖的比例也已经超过50％。 饮食习惯及遗传背 景都与人群的肥胖情况密切 相关。 多个欧美人群中的全基因关联研究表明FTO(fat  mass and obesity associated   gene， 脂肪量与肥胖相关基因)、 ADRB3等基因与肥胖的发生密切相关。 但针对中国人群的肥 胖易感基因的研究较少， 原因之一是没有很合 适的方便、 精准、 低成本的检测方法。 [0003]目前市场上并没有用于大规模人群肥胖基因风险位点筛查的试剂盒， 传统的PC R‑ 测序法则存在步骤繁琐、 检测成本高等缺点， 不适用于大规模 人群筛查， 使用基因芯片或基 因测序法进行人群筛查则成本过高。 其中， 基因芯片法 的优点是通量大， 但是有成本比PCR 法高， 且操作复杂耗时长， 有非特异性信号， 灵敏度和重复性较差的缺点。 此外， 还有各种 PCR法， 如PCR ‑Sanger测序法的优点是检测准确性高， 设计简单但是通量较低， 操作复杂， 需 要扩增， 电泳， 测序等多个步骤。 [0004]探针熔解曲线通过单链探针与 扩增产物特异杂交的方式来提供熔解曲线。 取代双 链DNA自身在从低 温到高温中的熔解过程， 利用荧光探针与不同的单链靶序列杂交后形成 的双链DNA熔解特征的差异 来区分不同的靶序列。 此技术无需染料， 但要求探针在从低温到 高温过程中， 伴随着它与单链靶序列的结合与分离状态具有明显的荧光信号的变化， 目前 已常用于基因突变分析。 对要检测的突变位点设计特异性探针， 基于探针与 互补碱基和非 互补碱基形成之间的解离温度不同而将纯合野生型、 杂合 性和纯合 突变型区分开 来。 [0005]探针熔解曲线通过单链探针与 扩增产物特异杂交的方式来提供熔解曲线。 取代双 链DNA自身在从低 温到高温中的熔解过程， 利用荧光探针与不同的单链靶序列杂交后形成 的双链DNA熔解特征的差异 来区分不同的靶序列。 对要检测的突变位点设计特异 性探针， 基 于探针与互补碱基和非互补碱基形成之 间的解离温度不同而将纯合野生型、 杂合性和纯合 突变型区分开来。 与基因芯片法相比操作简单耗时短， 成本低， 灵敏度高且重复性好； 与 PCR‑Sanger测序法相比， 操作更加简单， 通量更高。 相较下探针熔解曲线法的缺点是探针 设 计难， 有些SNP由于附近的GC含量及自身发夹结构的问题， 导 致设计困难。 [0006]中国专利申请CN  105296619  A公开了中国人群肥胖易感基因SNP分型用试剂盒及 其使用方法， 该专利申请 选择有密切相关性的12个SNP位点作为筛查目标， 在一定程度上 弥 补目前现有SNP分型筛查方法的不 足， 但仍无法实现有关人类肥胖易感基因位点的多重、 高 效检测。 发明内容 [0007]为解决现有技术中存在的问题， 本发明选择人类4个常见的肥胖易感基因位点说　明　书 1/6 页 3 CN 114517230 A 3