(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210199284.6 (22)申请日 2022.03.02 (71)申请人 圣湘生物科技股份有限公司 地址 410205 湖南省长 沙市高新 技术产业 开发区麓松路680号 (72)发明人 陈晓亮　任小梅　郭鑫武　刘佳　 戴立忠　 (74)专利代理 机构 北京派特恩知识产权代理有 限公司 1 1270 专利代理师 胡亮　张颖玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 检测流感病毒并分型的组合物、 试剂盒、 方 法及其用途 (57)摘要 本发明属于分子生物学检测领域； 具体地， 涉及流感病毒的检测 并分型。 更具体地， 涉及甲 乙型流感病毒的检测并分型。 本发 明提供了一种 检测流感病毒并分型的组合物， 该组合物的应用 以及包括该组合物的试剂盒， 以及使用其的方 法。 使用本发明的组合物， 无需多对引物扩增甲 乙型流感， 仅需一对引物即能同时检测甲乙型流 感， 成本低， 其扩增更为均一， 整个体系更为准确 和稳定， 同时使得本发明组合物与其余的病毒检 测体系兼容 性更好。 权利要求书1页 说明书7页 附图4页 CN 114807434 A 2022.07.29 CN 114807434 A 1.一种检测流感病毒并分型的组合物， 其同时包括： 甲乙型流感病毒上游引物： 5' ‑CCTGGRATGATGATG GG‑3'(SEQ ID NO:1)； 甲乙型流感病毒下游引物： 5' ‑GATTGSAGYCCATCCCA‑3'(SEQ ID NO:2)； 甲型流感病毒探针： 5' ‑TCGATACTGA ATCTTGGACAAAAGAAAT‑3'(SEQ ID NO:3)； 以及 乙型流感病毒探针； 5' ‑TGGGAGTAGCWGCACTAG GYATC‑3'(SEQ ID NO:4)。 2.根据权利要求1所述的组合物， 其中， 所述组合物还包括： 用于监控的内标上游引物、 内标下游引物和内标探针。 3.根据权利要求2所述的组合物， 其中， 所述组合物还包括： 如SEQ  ID NO:5(5' ‑ ATCCATGACAACTTTGGTATCGT ‑3')所示的人管家基因内标上游引物、 如SEQ  ID NO:6(5' ‑ GGGCCATCCACAGTCTTCT ‑3')所示的人管家基因内标下游引物， 和如SEQ  ID NO:7(5' ‑ AAGGACTCATGAC CACAGTCCATGCC‑3')所示的人 管家基因内标探针。 4.根据权利要求1所述的组合物， 其中， 所述组合物还可以包括检测其余病 毒的引物和 探针。 5.根据权利要求4所述的组合物， 其中， 所述组合物还可以包括检测鼻病 毒的引物和探 针。 6.根据权利要求1～5任一项所述的组合物， 其中， 所述组合物的各成分 以混合的形式 存在于包 装中。 7.根据权利要求1～6任一项所述的组合物在制备检测流感病毒并分型的试剂盒中的 用途。 8.一种检测流感病 毒并分型的试剂 盒， 所述试剂 盒包括根据权利要求1～6任一项所述 的组合物。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其中， 所述试剂盒还包括： 核酸释放体系和核酸扩增 体系。 10.一种用于以非诊断目的检测流感病毒并分型的方法， 所述方法包括以下步骤： 1)提取或释放待测样本的核酸； 2)使用根据权利要求1～6任一项所述的组合物或根据权利要求8或9所述的试剂盒对 步骤1)获得的核酸进行荧 光定量PCR分析； 3)获得并分析 结果。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807434 A 2检测流感病毒并分型的组合物、 试剂盒、 方 法及其用途 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学检测领域； 具体地， 涉及流感病毒的检测并分型。 更具体 地， 涉及甲乙型流感病毒的检测并分型。 背景技术 [0002]急性上呼吸道感染是指鼻腔， 咽或喉部急性炎症的概称。 是呼吸道最常见的一种 传染病。 常见病因为病毒占80％， 少数由细菌引起。 患者不分年龄， 性别， 职业和地区。 不仅 具有较强的传染性， 而且 可引起严重并发症， 应积极防治。 流 感首当其冲， 每年有5％～10％ 的成年人、 20％～30％的儿童罹患流感。 造成流感的是流行性感冒病毒(influenza   virus)， 简称流感病毒， 是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒， 人流感病毒分为 甲(A)、 乙(B)、 丙(C)三型， 是流行性感冒(流感)的病原体， 其中， 更为流行的是甲型流感和 乙型流感。 [0003]流感与新冠感染者临床症状相似， 存在较大鉴别困难， 且临床上也经常与其他病 原体引起的呼吸道感染混淆， 因此在 《流行性感冒诊疗方案》 以及 《新冠防控方案》 中都 明确 提到要重 视两种病毒的病原学鉴别， 指导精准诊疗。 [0004]目前在实验室诊断手段中， 更多仍然采用的是PCR检测法， 但其原理均为针对核衣 壳蛋白NP 基因或者基质蛋白M基因分别设计检测甲型流 感病毒的引物探针和乙型流感病毒 的引物探针， 设计复杂， 试剂的配制繁琐， 不利于大规模生产， 并且， PCR扩增 体系中每增加 一对引物， 形成引物二聚体的几率增加， 不同引物探针之 间的干扰会不同程度的增加， 所有 引物间相互影响就加大， 这就势必影响到扩增的效果， 从而影响整个检测体系的稳定性和 准确性， 引物的增加会导致成本的增加， 与此同时， 扩增 体系引物探针较多， 也有可能发生 一个扩增片段抑制另一个扩增片段的情况， 这就导致了扩增结果并不是均一的， 从而也影 响整个检测体系的稳定性和准确性。 [0005]因此， 本领域需求一种引 物对数少并能对甲乙型流感进行分型的组合物， 并且其 检测稳定性和准确性都较高， 成本低。 发明内容 [0006]有鉴于此， 第一方面， 本发明提供了一种检测流感病毒并分型的组合物， 其同时包 括： [0007]甲乙型流感病毒上游引物： 5' ‑CCTGGRATGATGATG GG‑3'(SEQ ID NO:1)； [0008]甲乙型流感病毒下游引物： 5' ‑GATTGSAGYCCATCCCA‑3'(SEQ ID NO:2)； [0009]甲型流感病毒探针： 5' ‑TCGATACTGA ATCTTGGACAAAAGAAAT‑3'(SEQ ID NO:3)； 以及 [0010]乙型流感病毒探针； 5' ‑TGGGAGTAGCWGCACTAG GYATC‑3'(SEQ ID NO:4)。 [0011]进一步地， 所述组合物还包括： 用于监控的内标上游引物、 内标下游引物和内标探 针。 [0012]使用本发明的组合物， 无需多对引 物分别扩增甲乙型流感， 仅需一对引 物即能同说　明　书 1/7 页 3 CN 114807434 A 3