(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210204938.X (22)申请日 2022.03.02 (71)申请人 华中科技大 学 地址 430074 湖北省武汉市洪山区珞喻路 1037号 (72)发明人 黄代新　韩雪丽　肖超　易少华　 (74)专利代理 机构 北京金智普华知识产权代理 有限公司 1 1401 专利代理师 张晓博 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G06N 5/04(2006.01) G16B 25/20(2019.01)G06K 9/62(2022.01) G06F 17/18(2006.01) (54)发明名称 用于推断中国汉族人群个体年龄的组合标 志物及其应用 (57)摘要 本申请公开了用于推断中国汉族人群个体 年龄的组合标志物及其应用。 所述组合标志物包 括8个CpG位点： chr6:11044628、 cg06639320、 cg14361627、 chr1:207823723、 cg19283806、 cg17740900、 cg07553761和cg26947034。 本申请 公开的8个CpG位点均具有强年龄相关性， 以此8 个CpGs组合构建的年龄推断模型对于中国汉族 人群个体年龄推断具有高准确率和灵敏度。 在实 际案件应用中， 以该年龄推断模 型构建的年龄推 断方法能够准确推断未知样本年龄， 年龄推断误 差为0.27岁。 权利要求书2页 说明书11页 序列表5页 附图4页 CN 114774557 A 2022.07.22 CN 114774557 A 1.用于推断中国汉族人群个体年龄的组合标志物， 其特征在于， 所述组合标志物包括8 个CpG位点： chr6:11044628、 cg06639320、 cg14361627、 chr1:207823723、 cg19283806、 cg17740900、 cg07553761和cg269470 34。 2.一种引物组合物， 其特征在于， 所述引物组合物包括如SEQ  ID NO.1～16所示的核苷 酸序列的第一引物组合和如SEQ  ID NO.17～32所示的第二引物组合； 所述第一引物 组合用于在同一反应体系中对8个CpG位点进行复合扩增， 所述8个CpG位 点包括chr6:11044628、 cg06639320、 cg14361627、 chr1:207823723、 cg19283806、 cg17740900、 cg07553761和cg269470 34； 所述第二引物组合用于对所述复合扩增产物进行 单碱基延伸反应。 3.一种试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包含用于检测权利要求1所述的组合标志物的 试剂； 任选地， 所述试剂盒进一 步包括权利要求2所述的引物组合物。 4.权利要求1所述的组合标志物或权利要求2所述的引物组合物在推断中国汉族人群 个体年龄中的应用。 5.一种推断中国汉族人群 个体年龄的方法， 其特 征在于， 包括： 获得中国汉族健康个 体血液样本中8个CpG位 点的甲基化数据， 并以此构成训练集； 根据所述训练集构建年龄推断模型， 所述年龄推断模型为通过对所述训练集的8个Cp G 位点的甲基化数据与所述中国汉族健康个体的实际年龄之间进行回归分析和训练得到的 回归模型； 将待测中国汉族个体的8个CpG位点的甲基化率输入至所述年龄推断模型， 以得到该个 体的推断年龄； 其中， 所述8个CpG位点chr6:11044628、 cg06639320、 cg14361627、 chr1:207823723、 cg19283806、 cg17740900、 cg07553761和cg269470 34。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述获得中国汉族健康个体血液样本的8 个CpG位点的甲基化率的步骤 包括： 获得转化的中国汉族人群 个体的DNA样本； 对所述DNA样本进行8个CpG位点的复合PCR扩增， 所述8个CpG位点为chr6:11044628、 cg06639320、 cg14361627、 chr1:207823723、 cg19283806、 cg17740900、 cg07553761和 cg269470 34； 将所述复合PCR扩增产物作为模板进行 单碱基延伸反应； 对所述单碱基延伸反应得到的单碱基延伸产物进行 纯化和变性， 得到变性产物； 对所述变性产物进行ABI测序， 根据所述变性产物对应的毛细管电泳图中各个峰的颜 色和位置， 依次确定对应的CpG位 点； 根据毛细管电泳图中各个峰的颜色和位置， 计算所述确定的CpG位 点的甲基化率。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述复合PCR扩增的引物包括如SEQ  ID  NO.1～16的核苷酸序列， 所述单碱基延伸反应的引物包括如SEQ  ID NO.17～32的核苷酸序 列。 8.根据权利 要求5所述的方法， 其特征在于， 所述模型为多元线性回归(MLR)模型， 所述 MLR模型的回归方程为： 个体年龄＝22.333+39.068 ×chr6:11044628+13.626 ×权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114774557 A 2cg06639320 –12.096×chr1:207823723 –12.417×cg19283806+145.103 ×cg14361627 – 0.131×cg17740900+25.946 ×cg07553761–34.205×cg269470 34。 9.用于推断中国汉族人群 个体年龄的系统， 其特 征在于， 包括： 数据获得装置， 用于获得中国汉族健康个体血液样本的8个CpG位点的甲基化数据， 并 以此构成训练集； 模型装置， 所述模型装置与所述数据获得装置相连， 所述模型装置用于根据所述训练 集构建年龄推断模型； 年龄推断装置， 与所述模型装置相连， 用于将待测中国汉族个体的8个CpG位点的甲基 化率输入至所述 年龄推断模型并得到该个 体的推断年龄 。 10.根据权利要求9所述的系统， 其特 征在于， 所述数据获得装置包括： 甲基化处理体系， 用于对所述中国汉族人群个体的血液DNA进行转化处理， 使得未发生 甲基化的胞嘧啶转 化为尿嘧啶， 获得转 化处理的DNA样本； PCR扩增体系， 用于对所述转化的DNA样本进行复合PCR扩增和单碱基延伸反应以得到 变性产物； 测序装置， 所述测序装置与转化处理装置相连， 所述测序装置所述变性产物进行ABI测 序， 以确定所述变性产 物对应的毛细管电泳图中各个峰 的颜色和位置， 依次确定对应的CpG 位点； 计算装置， 与所述测序装置相连， 用于根据毛细管电泳图中各个峰的颜色和位置， 计算 所述确定的CpG位点的甲基化率， 并以此构建训练集， 所述训练集包括用于训练的中 国汉族 人群的训练组样本的DNA甲基化数据， 所述中国汉族人群包括中国汉族成年男性和中国汉 族成年女性， 真实年龄分布在2 ～82岁。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114774557 A 3