(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210202583.0 (22)申请日 2022.03.02 (71)申请人 浙江新安化工集团股份有限公司 地址 311600 浙江省杭州市 建德市江滨中 路新安大厦1号 (72)发明人 何军光　苗昱婷　李焰　赵振宁　 周骏　楼亿圆　任鑫　陆建明　 张凌燕　李静静　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 温可睿 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 转基因大豆WYN02 9GmA的检测方法 (57)摘要 本发明涉及转基因大豆领域， 具体涉及转基 因大豆WYN029GmA的检测方法。 本发明提供一种 转基因大豆WYN029GmA转化事件外源插入载体位 点及其左侧翼序列和右侧翼序列， 并提供了检测 转基因大豆的方法。 本方案 可以快速、 高效、 特异 性地检测待测样品是否源自上述转基因大豆， 在 转基因大豆的检测以及种质资源的鉴定方面具 有重要意 义和广泛的应用前 景。 权利要求书1页 说明书6页 序列表5页 附图2页 CN 114517239 A 2022.05.20 CN 114517239 A 1.大豆第18号染色体上第20546065位点在转基因大豆检测中的应用； 所述转基因大豆 包括WYN029GmA转基因大豆和/或由WYN02 9GmA为亲本 育种而成的大豆 。 2.转基因大豆WYN029GmA外源基因插入位点的左侧翼核酸， 其特征在于， 所述左侧翼核 酸具有如SEQ  ID NO： 2所示的核苷酸序列。 3.转基因大豆WYN029GmA外源基因插入位点的右侧翼核酸， 其特征在于， 所述右侧翼核 酸具有如SEQ  ID NO： 3所示的核苷酸序列。 4.权利要求2所述的左侧翼核酸和/或权利要求3所述的右侧翼核酸作为标志物， 在制 备转基因大豆检测试剂中的应用； 所述转基因大豆包括WYN029GmA转基因大豆和/或由 WYN029GmA为亲本 育种而成的大豆 。 5.转基因大豆的检测试剂盒， 其特 征在于， 包括： 引物对A和/或引物对B； 所述引物对A中， 上游引物A靶向权利要求2所述的左侧翼核酸； 下游引物A靶向mam79 ‑ pC3301的T‑DNA； 所述引物对B中， 下游引物B靶向权利要求3所述的右侧翼核酸； 上游引物B靶向mam79 ‑ pC3301的T‑DNA。 6.根据权利要求5所述的检测试剂盒， 其特征在于， 所述引物对A包括具有如SEQ  ID  NO:5和SEQ  ID NO:6所示的核苷酸序列的两条引物。 7.根据权利要求5所述的检测试剂盒， 其特征在于， 所述引物对B包括具有如SEQ  ID  NO:11和SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列的两条引物。 8.转基因大豆的检测方法， 其特征在于， 以权利要求5所述的转基因大豆检测试剂 盒对 大豆样品进行检测， 所述转基因大豆包括WYN029GmA转基因大豆和/或 由WYN029GmA为亲本 育种而成的大豆 。 9.根据权利要求8所述的大豆样品， 其特征在于， 所述大豆样品包括取自大豆种子、 大 豆植株的组织或器官和/或大豆制品。 10.根据权利要求8所述的检测方法， 其特 征在于， 所述检测包括PCR后 进行测序， 所述测序结果包括SEQ  ID NO:17和/或SEQ  ID NO:18所 示序列， 则 该样品含有转基因大豆和/或由WYN029GmA为亲本育种而成的大豆成分； 所述测 序为结果不包括SEQ  ID NO:17和/或SEQ  ID NO:18所示序列， 则说明该样品不含有转基因 大豆和/或由WYN02 9GmA为亲本 育种而成的大豆成分； 或者所述检测包括PCR后进行电泳， 所述条带为273bp和/或300bp， 则该样品含有转基 因大豆和/或由WYN029GmA为亲本育种而成的大豆成分； 若无条带， 则 该样品不含有转基因 大豆和/或由WYN02 9GmA为亲本 育种而成的大豆成分。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114517239 A 2转基因大豆WYN 029GmA的检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及转基因大豆领域， 具体涉及转基因大豆WYN02 9GmA的检测方法。 背景技术 [0002]自1996年首例转基因作物批准商业化至今， 全球的转基因作物种植面积已经超过 1.9亿公顷， 较1996年增加了113倍， 共有70多个国家应用。 转基因大豆是产业化最早、 应用 率最高、 种植面积最广、 增 长速度最大的转基因粮食作物， 占全球转基因作物面积的50％。 2018年我国进口大豆8803万吨， 是转基因大豆最大的消费国家， 因此大豆生产变得尤为重 要， 发展潜力巨大。 我国大豆田中， 中等草害的面积 达50％以上， 造成大豆损失约15％， 草甘 膦作为内吸灭生性除草剂， 具有除草广谱、 低毒低残等优点， 是目前使用量最大的除草剂。 抗草甘膦转基因大豆的应用， 成功解决了田间除草问题， 有利于大豆 机械化与规模化 生产。 [0003]AM79‑EPSPS基因是从被草甘膦污染的土壤中直接分离提取土壤宏基因组DNA、 构 建基因组文库、 利用EPSPS功能缺 失突变株功能互补实验获得， 是具有我国自主知识产权的 新基因。 该基因编码蛋白属于EPSPS， 是一种全新的EPSPS蛋白。 AM79 ‑EPSPS蛋白不仅具有较 高的草甘膦耐受性， 而且保持与磷酸烯醇式丙酮酸(phosphoenolpyruv ate,PEP)较强的亲 和性， 能够赋予植物对除草剂草甘膦的耐受性， 本发明所用的mam79 ‑epsps基因是将AM79 ‑ EPSPS基因根据大豆的密码子偏好性进行人工优化改造而成， 是培育抗草甘膦转基因大豆 的极佳选择。 [0004]根据全球转基因作物发展趋势， 未来将有更多的转基因作物推广商业化生产， 需 要根据国家相关法规进行转基因作 物检测， 现有检测转基因大豆的方法主要 是聚合酶链式 反应或是核苷酸序列的探针杂交， 且是对外源启动子、 终止子、 标记基因等， 无法对不同转 化体进行区分， 若是对转基因材料进行全基因组序列， 则需要高昂的测序费用且时间周期 长， 而蛋白层面的酶联免疫法需要的抗体和抗原制备困难， 因此需要建立简单、 方便、 快捷 的检测方法来 鉴定特定的转基因事 件。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明要解决的技术问题在于提供一种转基因大豆WYN029GmA的检测 方法， 该方法可以快速、 高效、 特异性地检测待测样品是否源自上述转基因大豆， 在转基因 大豆的检测以及种质资源的鉴定方面具有重要意 义和广泛的应用前 景。 [0006]本发明提供了大豆第18 号染色体上第20546065位点在转基因大豆检测中的应用； 所述转基因大豆包括 WYN029GmA转基因大豆和/或由WYN02 9GmA为亲本 育种而成的大豆 。 [0007]本发明还提供了转基因大豆WYN029GmA外源基因插入位点的左侧翼核酸， 所述左 侧翼核酸具有如SEQ  ID NO： 2所示的核苷酸序列。 [0008]本发明提供了转基因大豆WYN029GmA外源基因插入位点的右侧翼核酸， 所述右侧 翼核酸具有如SEQ  ID NO： 3所示的核苷酸序列。 [0009]本发明还提供了所述的左侧翼核酸和/或所述的右侧翼核酸作为标志物， 在制 备说　明　书 1/6 页 3 CN 114517239 A 3