(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210208334.2 (22)申请日 2022.03.03 (71)申请人 北京起源聚禾 生物科技有限公司 地址 100176 北京市大兴区中关村科技园 区大兴生物医药产业基地华佗路50号 院6号楼4层401室 (72)发明人 刘沛　王林海　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 孙艳敏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 DNA甲基化标志物组合及应用、 卵巢癌早期 检测引物探 针及试剂盒 (57)摘要 本发明公开了DNA甲基化标志物组合及应 用、 卵巢癌早期检测引物探针及试剂盒， 其中， DNA甲基化标志物组合包括PCDHB18P、 CDO1、 HOXA9和LYPD5四种基因每种任意至少一段甲基 化片段， 针对 该目标基因甲基化区域获得的检测 引物及试剂盒， 能够显著提升对卵巢癌检出的灵 敏度， 同时保持对正常及卵巢良性肿瘤的高特异 性。 该检测引物和探针通过分子表观遗传手段， 利用甲基化检测技术对妇科恶性肿瘤可能的患 者提早检出， 结果准确性非常高， 能够给临床医 生提供辅助诊断参 考， 提早进行预防治疗。 权利要求书2页 说明书12页 序列表9页 附图2页 CN 114480655 A 2022.05.13 CN 114480655 A 1.DNA甲基化标志物组合， 其特征在于， 包括以下PCDHB18P、 CDO1、 HOXA9和LYPD5四种基 因每种任意至少一段甲基化片段： PCDHB18P基因： chr5:14123 5136‑141235232： SEQ ID NO:1， chr5:14123 5796‑141235918： SEQ ID NO:2， chr5:14123 5982‑141236064： SEQ ID NO:3； CDO1基因： Chr5:115816656‑115816755： SEQ ID NO:4， Chr5:115816502‑115816579： SEQ ID NO:5， Chr5:115816382‑115816460： SEQ ID NO:6； HOXA9基因： chr7:2716 6431‑27166523： SEQ ID NO:7， chr7:2716 6020‑27166126： SEQ ID NO:8， chr7:2716 5835‑27165919： SEQ ID NO:9； LYPD5基因： chr19:43820817 ‑43820923、 SEQ ID NO:10， chr19:43820 625‑43820694、 SEQ ID NO:11， chr19:43820271 ‑43820377： SEQ ID NO:12。 2.根据权利要求1所述的标志 物组合， 其特 征在于， 由以下甲基化片段组成： PCDHB18P基因： chr5:14123 5796‑141235918： SEQ ID NO:2； CDO1基因： C hr5:115816656‑115816755： SEQ ID NO:4； HOXA9基因： chr7:2716 5835‑27165919： SEQ ID NO:9； LYPD5基因： c hr19:43820 625‑43820694： SEQ ID NO:11。 3.权利要求1或2所述的标志 物组合在制备卵巢癌早期筛查诊断试剂中的应用。 4.卵巢癌早期筛查诊断用检测引物组， 其特征在于， 包括对应检测权利要求1或2所述 的组合中甲基化片段的甲基化状态的目标基因检测引物， 所述目标基因检测引物的核苷酸 序列5’端带有5‑10bp长度且与3 ’端互补配对但不与3 ’端的末端的C G碱基进行配对的序列； 所述目标基因检测引物的核苷酸序列的Tm值高于PCR反应 体系退火温度2 ～4℃。 5.根据权利要求4所述的检测引物组， 其特征在于， 所述目标基因检测引物的核苷酸序 列带有锁核酸 修饰碱基。 6.根据权利要求4所述的检测引物组， 其特征在于， 所述目标基因检测引物的核苷酸序 列如下所示： PCDHB18P目标基因： chr5:14123 5136‑141235232检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:13～14， chr5:14123 5796‑141235918检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:16～17， chr5:14123 5982‑141236064检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:19～20； CDO1目标基因： Chr5:115816656‑115816755检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:22～23， Chr5:115816502‑115816579检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:25～26，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480655 A 2Chr5:115816382‑115816460检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:28～29； HOXA9目标基因： chr7:2716 6431‑27166523检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:31～32， chr7:2716 6020‑27166126检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:34～3 5， chr7:2716 5835‑27165919检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:37～38； LYPD5目标基因： chr19:43820817 ‑43820923检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:40～41， chr19:43820 625‑43820694检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:43～4 4， chr19:43820271 ‑43820377检测引物的核苷酸序列： SEQ  ID NO:46～47。 7.卵巢癌早期筛查诊断用检测试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求4 ‑6任一所述引物 组。 8.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括对应检测权利要求1或2所述的组 合中甲基化片段的甲基化状态的目标基因检测探针， 所述目标基因检测探针的核苷酸序列 如下所示： PCDHB18P基因： chr5:14123 5136‑141235232检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:15， chr5:14123 5796‑141235918检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:18， chr5:14123 5982‑141236064检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:21； CDO1基因： Chr5:115816656‑115816755检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:24， Chr5:115816502‑115816579检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:27， Chr5:115816382‑115816460检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:30； HOXA9基因： chr7:2716 6431‑27166523检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:33， chr7:2716 6020‑27166126检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:36， chr7:2716 5835‑27165919检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:39； LYPD5基因： chr19:43820817 ‑43820923检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:42， chr19:43820 625‑43820694检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:45， chr19:43820271 ‑43820377检测探针的核苷酸序列： SEQ  ID NO:48。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括针对内参基因GAPDH的内参基因 检测引物和内参基因检测探针， 所述内参基因检测引物的核苷 酸序列如S EQ ID NO:49～50 所示， 内参基因检测探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO:51所示。 10.根据权利要求9所述的试剂盒， 其特征在于， 所述目标基因检测探针和内参基因检 测探针的核苷酸序列5 ’端均标记荧光基团， 3 ’端均标记淬灭基团， 同一检测 体系中各目标 基因检测探针之间以及和内参基因检测探针之间标记的荧 光基团不同。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480655 A 3