(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210204628.8 (22)申请日 2022.03.03 (71)申请人 苏州贝康医疗器 械有限公司 地址 215000 江苏省苏州市工业园区星湖 街218号生物纳米园A3楼101单 元 (72)发明人 赵丁丁　夏琴　冒燕　孔令印　 梁波　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 边人洲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C40B 50/06(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种捕获引物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种捕获引物及其应用。 所述 捕获引物自5 ’端起依次包括测序接头、 随机序列 和酶切位点。 本发明中以酶切位点的分析作为核 心要素， 结合PCR引物易于设计改造和灵活多变 的特点， 将酶切识别位点引用到PCR引物 的3’末 端， 从而创造出一种不依赖限制性内切酶的简化 基因组测序技术， 同时， 在引物设计时在其5 ’末 端加入相应的测序接头序列， 通过简单的PCR扩 增步骤即可获得直接能进行二代测序的文库， 整 个实验流 程简单快速易于操作。 权利要求书1页 说明书11页 序列表6页 附图6页 CN 114507728 A 2022.05.17 CN 114507728 A 1.一种捕 获引物， 其特征在于， 所述捕获引物自5 ’端起依次包括测序接头、 随机序列和 酶切位点。 2.根据权利要求1所述的捕获引物， 其特 征在于， 所述测序接 头包括P1接 头或A接头； 优选地， 所述P1接 头的核酸序列包括SEQ  ID NO.1所示的序列； 优选地， 所述A接 头的核酸序列包括SEQ  ID NO.2所示的序列。 3.根据权利要求1所述的捕获引物， 其特 征在于， 所述随机序列包括 4～10个随机 碱基； 优选地， 所述酶切位点包括GTAC、 CATG、 CTA G、 GATC、 TCGA或ACGT中任意一个或至少两个 的组合。 4.根据权利要求1 ‑3任一项所述的捕获引物， 其特征在于， 所述捕 获引物的核酸序列包 括SEQ ID NO.3～SEQ  ID NO.23所示的序列。 5.权利要求1 ‑4任一项所述的捕获引物在制备简化基因 组测序产品中的应用。 6.一种简化基因组测序试剂盒， 其特征在于， 所述简化基因组测序试剂盒包括权利要 求1‑4任一项所述的捕获引物； 优选地， 所述简化基因 组测序试剂盒还 包括核酸 提取试剂和PCR试剂。 7.权利要求1 ‑4任一项所述的 的捕获引物在简化基因 组测序中的应用。 8.一种构建基因文库的方法， 其特 征在于， 所述构建基因文库的方法包括： 使用权利要求1 ‑4任一项所述的捕获引物对样本基因 组进行扩增， 得到基因文库。 9.一种简化基因 组测序方法， 其特 征在于， 所述简化基因 组测序方法包括： 使用权利要求1 ‑4任一项所述的捕 获引物对样本基因组进行扩增， 得到测序文库， 对所 述测序文库进行测序。 10.一种遗传分析方法， 其特征在于， 所述遗传分析方法包括对权利要求8所述的简化 基因组测序方法得到的测序数据进行遗传分析； 优选地， 所述遗传分析包括流产组织遗传学分析、 单基因遗传病检测或染色体结构异 常检测。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114507728 A 2一种捕获引物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于基因检测技 术领域， 涉及一种捕获引物及其应用。 背景技术 [0002]自然流产(spont aneous abortion， SA)是妊娠早期常见的并发症， 发生胚胎停育 及自然流产的原因包括遗传学 因素、 内分泌因素、 免疫因素及环境因素等。 50％早期自然流 产和6％～17％死胎的发生与染色体异常有关， 其中染色三体最常见， 其次是三倍体、 性染 色体单体X、 四倍体和染色体结构异常。 大部 分存在染色体异常的胚胎以自然流产的形式终 止妊娠， 难以存活至出生， 而存活到出生的胚胎， 多在短期内死亡， 或存在多器官系统严重 遗传缺陷， 严重影响患儿的健康和生活质量。 因此， 发生自然流产时， 检测自然流产妊娠产 物(products  of conception， POC)的染色体是否异常， 对诊断妊娠丢失原 因、 评估复发风 险和指导 生育具有重要意 义。 [0003]胚胎植入前遗传学检测(Preimplantat ion Genetic Testing， PGT)是指在体外受 精的胚胎移植前， 取胚胎的遗传物质进行分析， 诊断是否有异常， 筛选健康胚胎移植， 防止 遗传病传递的方法。 目前， PGT 过程中常用的技术手段有荧光原位杂交(FISH)、 SNP全基因组 微阵列芯片(SNP  array)和高通量测序(NGS)等。 基于高通量测序技术的检测方法是在体外 受精后的胚胎发育至3～5天时， 取8细胞期的卵裂球细胞或者囊胚期的滋养层细胞， 进 行单 细胞全基因组扩增得到基因组DNA， 然后 构建测序文库进 行测序， 根据测序结果进 行后续分 析。 [0004]目前常用的简化基因组测序是通过限制性内切酶切开基因组DNA， 对指定部分采 用高通量测序， 并得到大量遗传多态性标签序列， 以将物种全基因组的测序对策充分展现 出来的方法。 如CN110283892A公开了基于简化基因组测序技术的褐菖鲉基因筛选和挖掘方 法， 属于分子标记开发技术领域， 包括基因组DNA提取； 基因组DNA双酶切； 连接反应； PCR扩 增； 回收序列片段和高通量测序； 数据分析筛选和挖掘基因位点。 但该方法可减少基因组的 复杂度， 实施过程简 便， 节约成本， 同时不依靠参考基因组也能得到全基因组中的遗传多态 性标签， 因此广泛应用于 分子标记开 发、 遗传图谱构建、 基因/QTL定位和全基因组关联分析 及群体遗传分析与分子育种领域。 但现有简化基因组测序可捕获的SNP数目少(一般少于20 万个)， 并且其建库流程相对复杂繁琐， 或者需要经历末端修复、 dA尾添加等繁琐建库流程， 或者需要使用Pippin 或胶回收等进行片段分选， 同时要求具有 更高的实验操作水平以及时 间管控能力。 综合上述原因， 导 致简化基因 组测序鲜少在辅助生殖 领域得以应用和推广。 [0005]因此， 如何提供一种简单、 高效且低成本的简化基因组测 序方法， 是基因检测领域 亟需解决的问题之一。 发明内容 [0006]针对现有技术的不足和实际需求， 本发明提供一种捕获引 物及其应用， 使用所述 捕获引物能够通过PCR直接获得可进行上机测序的文库， 省去繁琐的打断、 末端修复、 连接说　明　书 1/11 页 3 CN 114507728 A 3