(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210203799.9 (22)申请日 2022.03.03 (71)申请人 澳门科技大 学 地址 中国澳门氹仔伟龙马路 (72)发明人 姜志宏　马元　任飞　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 专利代理师 唐循文 (51)Int.Cl. A61K 31/713(2006.01) A61P 11/06(2006.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 36/074(2006.01) (54)发明名称 灵芝tRFs在哮喘 治疗中的制药用途 (57)摘要 灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途， 本发明 通过实验证明， 源自灵芝属中药的tRFs对转化生 长因子‑β1诱导的气道平滑肌细胞表型改变 （增 殖、 异常分泌等） 及屋尘螨诱导的哮喘小鼠气道 高反应性、 炎症和重塑具有明显的抑制作用， 这 提示源自灵芝属中药的tRFs及药物组合物可成 为哮喘治疗的全新药物。 所述药物包含所述RNA 分子和药学上可接受的载体、 稀释剂和/或赋形 剂。 本发明将有助于哮喘治疗药物的研究和开 发， 并为其他呼吸系统疾病治疗 药物的研制提供 借鉴。 权利要求书1页 说明书11页 序列表2页 附图7页 CN 114504591 A 2022.05.17 CN 114504591 A 1.灵芝属真菌RNA分子在制备 预防或治疗哮喘药物中的应用。 2.根 据 权 利 要 求 1 所 述 的 应 用 ， 其 特 征 在 于 ， 所述RNA分子分离自或 源自赤芝Gan oderma lucidum (Curtis: Fr.) P. Karst。 3.根 据 权 利 要 求 1 所 述 的 应 用 ， 其 特 征 在 于 ， 所述RNA分子源自灵芝 属中药的转 运RNA分子片段 （tRNA  fragment， tRFs） 。 4.根 据 权 利 要 求 3所 述 的 应 用 ， 其 特 征 在 于 ， 所述灵芝tRFs的序列包 含选自SEQ  ID NO.1‑6中的任一序列或其功能变 体或其同源物。 5.根 据 权 利 要 求 4所 述 的 应 用 ， 其 特 征 在 于 ， 所述tRFs分子是双链 RNA分子， 其包含选自SEQ  ID NO.1‑6中任一所述的反义序列或其功能变体或其同源物， 及 SEQ ID NO. 7‑12中任一所述的互补正 义序列。 6.根 据 权 利 要 求 5所 述 的 应 用 ， 其 特 征 在 于 ， 所述双链RNA分子或其 功能变体或其同源物还 包含3'悬突。 7. 根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述双链RNA分子或其功能变体或其同源 物， 其中所述双链RNA分子或其功能变体或其同源物的反义链和/或正义链的核苷酸序列包 含至少一个经过化学修饰的核苷 酸； 其中， 所述化学修饰选自1 ‑甲基、 2‑甲基、 5‑甲基、 7‑甲 基、 N2‑甲基、 N6‑甲基、 N2,N2 ‑二甲基、 2' ‑O‑甲基、 N6‑异戊烯基、 2 ‑甲硫基‑N6‑异戊烯基、 N6‑苏糖氨甲酰基、 N6 ‑甲基‑N6‑苏糖氨甲酰基、 2 ‑硫基、 4‑硫基、 N4‑乙酰基、 5 ‑甲酰基、 3 ‑ (3‑氨基‑3‑羧丙基)、 5 ‑甲氧基、 5 ‑氧乙酸、 5 ‑氧乙酸甲酯、 5 ‑甲氧基羰基甲基、 5 ‑甲氧基羰 基甲基‑2'‑O‑甲基、 5‑甲氧基羰基甲基 ‑2‑硫基、 5‑氨基甲基 ‑2‑硫基、 5‑甲基氨基甲基、 5 ‑ 甲基氨基甲基 ‑2‑硫基、 5‑氨基甲酰基甲基、 5 ‑氨基甲酰基甲基 ‑2'‑O‑甲基、 5‑羧基甲基氨 基甲基、 5 ‑羧基甲基氨基甲基 ‑ 2'‑O‑甲基、 5‑羧基甲基氨基甲基 ‑2‑甲基、 5‑牛磺酸甲基和 5‑牛磺酸甲基 ‑2‑硫基中的至少一种。 8.一种预防或治疗哮喘的药物， 其特征在于， 有效成分含有权利要求2 ‑7任一所述的源 自灵芝属中药的转运RNA分子中的至少一种或其功能变体或其同源物， 以及任选的药学上 可接受的载体、 稀释剂和/或赋 形剂。 9.根据权利要求7 所述的药物组合物， 其中所述药物组合物还 包含核酸稳定剂。 10.一种预防和治疗哮喘的递送载体， 其包含权利要求2 ‑6任一项所述的双链RNA分子 或其功能变 体或其同源物， 以及任选的药 学上可接受的载体、 稀释剂和/或赋 形剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114504591 A 2灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途 技术领域 [0001]本发明属于哮喘治疗领域， 具体涉及灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途。 背景技术 [0002]支气管哮喘(简称哮喘)是一种严重危害人类健康的常见病、 多发病。 依据王辰院 士的调查， 我国面临极为严 峻的哮喘疾病负担。 国内20岁以上人群哮喘患病 率为4.2％， 20 岁以上总患病人数约有4579万， 高达71.2％的哮喘患者此前未得到过明确诊断， 更有95％ 未规范治疗。 [0003]气道重塑是哮喘的重要特征， 在发病早期已经存在， 导致不可逆性气流 受限， 是引 起药物治疗反应欠佳的重要原因。 气道平滑肌细胞(airway  smooth muscle cells， ASMC) 表型失衡在哮喘气道重塑中扮演重要角色。 正常人群ASMC主要表现为 “收缩型”， 可以正常 收缩和有效舒张， 以维持正常的气道阻力。 感染、 过敏原和环境因素等损 害， 诱导ASMC从正 常的“收缩型”向异常的“增殖/合成型 ”转换， 表现为ASMC的过度增殖、 肥大及异常收缩、 分 泌等， 导致持续性气道高反应性(airway  hyperresponsiveness， AHR)和不可逆性气流受 限， 加剧气道炎症， 形成 “恶性循环 ”。 因此， 通过靶向 “增殖/合成型 ”ASMC表型， 有望逆转气 道重塑， 为 提升哮喘总体临床疗效、 实现根本治愈提供新的依据。 [0004]目前， 一些研究表明， 非编码RNA(non  coding RNA)如微小RNA通过在几乎所有真 核生物中靶向RNA转录或转录后过程的不同方面而具有不同的调节作用。 Lin  Zhang等人 (Cell research  2012,22,107 ‑126)提出， 食物中的外源植物微小RNA可被哺乳动物的消化 道吸收并通过血流输送到各个器官， 从而调节哺乳动物基因的表达。 灵芝(Ganoderma   lucidum)为多孔菌科真菌， 入肺经， 补益肺气， 温肺化痰， 止咳平喘。 灵芝毒性较小， 但灵芝 注射液可能会引起过敏反应。 灵芝多糖、 三萜、 甾体等化合物已分别提取， 并应用于抗菌、 抗 炎、 抗癌、 抗衰老、 免疫调节等药物研发， 但仍未广泛应用于临床。 因此， 当前对各种无人体 毒副作用的药物和治疗方法存在需求。 发明内容 [0005]解决的技术问题： 本发明提出灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途， 申请人通过前 期ASMC细胞活力实验筛选出灵芝tRFs， 并得到活性最好的灵芝tRF_31， 分别在哮喘小鼠模 型和TGF‑β 1诱导的ASMC细胞模 型中进行验证。 结果显示灵芝tRF_31可抑制哮喘小鼠气道重 塑， 逆转TGF ‑β 1诱导的 “增殖/合成型”ASMC。 这可为灵芝tRF_31用于哮喘的治疗提供理论依 据。 [0006]技术方案： 灵芝属真菌RNA分子在制备 预防或治疗哮喘药物中的应用。 [0007]上述RNA分子分离自或源自赤芝Gan oderma lucidum(Cur tis:Fr.)P.Karst。 [0008]上述RNA分子源自灵芝属中药的转 运RNA分子片段(tRNA  fragment， tRFs)。 [0009]上述灵芝tRFs的序列包含选自SEQ  ID NO.1‑6中的任一序列或其功能变体 或其同 源物。说　明　书 1/11 页 3 CN 114504591 A 3