(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210206595.0 (22)申请日 2022.03.03 (71)申请人 佛山市南海百容水产良种有限公司 地址 528000 广东省佛山市南海区丹灶镇 下安村“外沙围” 申请人 荆州百容水产良种有限公司 　 海南百容水产良种有限公司 (72)发明人 陈柏湘　陈科洁　尹建雄　张美东　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 朱继超 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 加州鲈性别特异SNP分子标记引物及其应用 (57)摘要 本发明公开了加州鲈性别特异SNP分子标记 引物及其应用。 通过所述SNP分子标记区分样本 属于纯合子(XX)或是杂合子(XY)， 从而 鉴别样本 加州鲈的性别， 其判断准确率为100％。 还包括用 于扩增上述SNP分子标记的引物对、 试剂盒。 另外 还提供了供鉴别加州鲈性别的方法， 包括步骤： (a)提取待测加州鲈的DNA； (b)以提取的DNA为样 本， 使用上述引物对或上述试剂盒进行扩增， 得 到扩增产物； (c)使用高分辨溶解曲线分析 (Lightscanner)系统鉴别扩增产物的基因型， 若 扩增产物 为纯合子即待测加州鲈为雌性， 若扩增 产物为杂合子即待测 加州鲈为 雄性。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图1页 CN 114574594 A 2022.06.03 CN 114574594 A 1.引物对， 其特征在于， 包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的上游引物和核苷酸序列 如SEQ ID NO.2所示的下游引物。 2.权利要求1所述引物对在鉴定或辅助鉴定加州鲈遗传性别、 加州鲈辅助育种、 制备用 于鉴定或辅助鉴定加州鲈遗传性别的产品、 制备用于加州鲈辅助育种的产品中的应用。 3.一种试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的引物对。 4.根据权利要求3所述试剂盒， 其特征在于， 还包括含有镁离子的10 ×buffe、 LC Green 饱和荧光染料、 dNTP、 Taq酶。 5.权利要求3或4所述试剂盒在鉴定或辅助鉴定加州鲈遗传性别、 加州鲈辅助育种、 制 备用于鉴定或辅助鉴定加州鲈遗传性别的产品、 制备用于加州鲈辅助育种的产品中的应 用。 6.一种鉴别加州鲈性别的方法， 其特 征在于， 包括 步骤： 提取待测 加州鲈的DNA； 以提取的DNA为样本， 使用如权利 要求1所述引物对或权利 要求3至4任一项所述试剂盒 进行扩增， 得到扩增产物； 使用高分辨溶解曲线分析系统鉴别扩增产物的基因型， 从而判断加州鲈的性别。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述扩增产物的第79位若为纯合子即待测 加州鲈为雌性， 若为杂合子即待测 加州鲈为 雄性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114574594 A 2加州鲈性别特异SNP分子标记引物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 基因检测技术领域， 特别涉及加州鲈性别特异SNP分子标记引  物及其 应用。 背景技术 [0002]水产养殖和野外调查发现， 许多鱼类的雌雄个体间存在显著差异， 如在鲤鱼   (Cyprinus  carpio)、 虹鳟和半滑舌鳎(Cynoglossus  semilaevis)等鱼类中， 卵巢成熟  比 精巢晚， 性成熟期间大部 分营养物质转化为身体的增长， 因而雌性个体比雄性  大； 相反， 尼 罗罗非鱼(Oreochromis  niloticus)、 黄颡鱼(Pelteobagrus  fulvidraco)  和斑点叉尾鮰 (Ictalurus  punctatus)等鱼类的精巢成熟比卵巢晚， 雄性生长速率比  雌性快， 因而雄性 个体大。 鱼类养殖生产中单性苗养殖具有规格整齐， 降低繁殖  耗能等优势， 是当前养殖新 品种开发的热点。 开发和获得性别特异的分子标记是  培育单性苗的必要前提。 [0003]随着测序费用的不断降低， 通过全基因组测序(WGS)、 简化基因组测序  (RAD‑seq) 等高通量测序技术大大加快了性别连锁标记研究的步伐。 已有多种  鱼类的性别特异分子 标记被开发出来， 如黄颡鱼， 鳜鱼， 江黄颡鱼， 乌鳢等。 [0004]加州鲈(Micropterus  salmoides)养殖过程中存在大吃小的现象， 雌雄个体  存在 一定的生长差异， 同时雌鱼由于繁殖耗能， 生长降低速度降低， 淘汰增加，  影响养殖效益。 培育单性加州鲈苗种将可以很好的解决这些问题， 具有重要的经  济效益。 目前， 国内外还 没有加州鲈性别特异分子标记的报道。 因此开发加州鲈  性别特异的分子标记对于培育单 性加州鲈苗具有重要的生产应用价 值。 发明内容 [0005]本发明目的在于提供加州鲈性别特异SNP分子标记引物及其应用， 以解决  现有技 术中所存在的一个或多个技 术问题， 提供至少一种有益的选择或创造条  件。 [0006]本发明的第一方面在于提供一种用于扩增上述S NP分子标记的引物对。 所  述引物 对包括： [0007]上游引物： 5 ’ ‑GAGAAGTCAGAGACGATCAG ‑3’(SEQ ID NO.1)； [0008]下游引物： 5 ’ ‑TCCTCGAACTCTATG GTGCT‑3’(SEQ ID NO.2)。 [0009]本发明的第二方面在于提供上述引物对的应用。 所述引物对可用于： (1)鉴  定或 辅助鉴定大口黑鲈遗传性别/(2)大口黑鲈辅助育种/(3)制备用于鉴定或  辅助鉴定大口黑 鲈遗传性别的产品/(4)制备用于大口黑鲈辅助育种的产品。 [0010]本发明的第三方面在于提供一种试剂盒， 其包 含上述引物对。 [0011]优选地， 所述试剂盒还包括： 含有镁离子的10 ×buffe、 LC  Green饱和荧  光染料、 dNTP、 Taq酶。 [0012]本发明的第六方面在于提供上述试剂盒的应用。 所述试剂盒可用于： (1)鉴  定或 辅助鉴定大口黑鲈遗传性别/(2)大口黑鲈辅助育种/(3)制备用于鉴定或  辅助鉴定大口黑说　明　书 1/5 页 3 CN 114574594 A 3