(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210202474.9 (22)申请日 2022.03.03 (71)申请人 江苏省农业科 学院 地址 210014 江苏省南京市玄武区钟灵街 50号 (72)发明人 闫强　袁星星　薛冬　胡亚群　 周琰琰　韦雅雯　陈新　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 贾耀淇 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/82(2006.01) A01H 5/06(2018.01)A01H 6/54(2018.01) A01H 6/82(2018.01) (54)发明名称 一种来源于大豆的根特异性启动子pro- GmPRlike及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种来源于大豆的根特异性 启动子pro‑GmPRlike及其应用， 属于基因工程和 分子生物学领域。 本发明提供一种来源于大豆的 根特异性启动子， 所述根特异性启动子为核苷酸 序列如SEQ  ID NO： 1‑SEQ ID NO： 6所示的A1 ‑A6 序列中的任意一条。 该根特异性启动子能驱动目 的基因只在根中高量表达， 其有效克服了传统基 因工程使用的组合型CaMV35S和玉米Ubiquitin 启动子在转基因植物所有器官 组织、 不同发育时 期均表达的缺陷， 同时也提高了转基因植物的安 全性， 并为通过转基因手段培育大豆抗根部病害 新品种奠定 了良好的技 术基础。 权利要求书1页 说明书6页 序列表7页 附图2页 CN 114507666 A 2022.05.17 CN 114507666 A 1.一种来源于大豆的根特异性启动子， 其特征在于， 所述根特异性启 动子为核苷酸序 列如SEQ ID NO： 1‑SEQ ID NO： 6所示的A1 ‑A6序列中的任意 一条。 2.一种引 物组， 其特征在于， 所述引 物组包括扩增A1序列的SEQ  ID NO： 11所示的上游 引物和SEQ ID NO： 12所示下游引物； 扩增A2序列的SEQ  ID NO： 13所示上游引物和SEQ  ID  NO： 14所示下游引物； 扩增 A3序列的SEQ  ID NO： 15所示上游引物和SEQ  ID NO： 14所示下游 引物； 扩增 A4序列的SEQ  ID NO： 16所示上游引物和SEQ  ID NO： 17所示下游引物； 扩增 A5序 列的SEQ ID NO： 18所示上游引物和SEQ  ID NO： 19所示下游引物； 扩增A 6序列的SEQ  ID NO： 20所示上游引物和SEQ  ID NO： 21所示下游引物。 3.一种重组载体， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的根特异性启动子 。 4.一种重组菌， 其特 征在于， 包括权利要求3所述的重组载体。 5.一种构建权利要求1所述的根特异性启动子的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 以大豆根部提取的DNA为模板， 利用权利 要求2所述的引物组进行PCR扩增， 获得所述的 根特异性启动子 。 6.权利要求1所述的根特异性启动子或权利要求2所述的引物组或权利要求3所述的重 组载体或权利要求 4所述的重组菌在植物中启动目的基因表达中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述目的基因表达是在植物根中表达 。 8.根据权利要求6所述应用， 其特 征在于， 所述 植物包括大豆或本氏烟草。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114507666 A 2一种来源于大豆的根特异性启动子pro ‑GmPRlike及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及基 因工程和分子生物学领域， 特别是涉及一种来源于大豆的根特异性 启动子pro ‑GmPRlike及其应用。 背景技术 [0002]大豆(GLycine  max.Merr.)是重要的油料作物， 同时还是蛋白质源， 在农业生产上 意义重大。 田间病 虫害防控是保障大豆生产安全的重要环节， 其中由土传病原菌引起的大 豆根部病害是严重危害大豆生产的世界性病害。 大豆根部病害往往由多种病原菌混合侵染 导致， 主要致病菌有疫霉菌、 腐霉菌、 立枯丝核菌、 镰刀菌等。 由于根部侵染的特性， 在田间 已经发生肉眼可辨病症的时候往往已经处于发病后期， 此时进行农药防治难以取得预期效 果。 因此越来越多的科学家希望利用植物抗病转基因育种技术来扩大基因资源、 加速育种 进程、 进一 步实现相对 “广谱持久 ”的抗病目的。 [0003]利用生物工程技术手段进行广谱 持久抗病的精确分子设计， 是培育广谱 持久转基 因抗病新品种的关键技术瓶颈。 当前利用转基因技术培育抗病品种的手段多是利用 CaMV35S和玉米Ubiquitin等一些 组成性强启动子， 然而利用这些强启动子驱动目的抗病基 因在受体作物 中过量表达后， 往往会影响植物的正常生长和发育(即适合性代价， Fitness   Cost)， 同时由于目的基因在收获器官的表达也会引起 公众对转基因食品安全性的疑虑， 因 此利用组织特异性启动子来驱动目的基因的表达是植物转基因抗病育种的一个重要环 节。 [0004]根是植物的重要器官， 除了支撑植物地上部分作用之外， 在水分、 养分吸收， 有机 物贮存， 土壤微生物互作方面也有着重要功能。 大豆根部病害 是田间主要病害之一， 克隆根 部特异启动子， 对于保证抗病基因在大豆根中特异、 稳定、 高效表达及提高转基因作物生物 安全性具有重要意 义。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种来源于大豆的根特异性启动子pro ‑GmPRlike及其应用， 以解决上述现有技术存在的问题， 该启动子能够驱动目的基因在植物根中特异表达， 提高 了转基因植物的安全性， 并为培 育大豆抗 根部病害新品种奠定 了良好的技 术基础。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0007]本发明提供一种来源于大豆的根特异性启动子， 所述根特异性启动子为核苷酸序 列如SEQ ID NO： 1‑SEQ ID NO： 6所示的A1 ‑A6序列中的任意 一条。 [0008]本发明还提供一种引物组， 所述引物组包括扩增A1序列的SEQ  ID NO： 11所示的上 游引物和SEQ  ID NO： 12所示下游引物； 扩增A2序列的SEQ  ID NO： 13所示上游引物和SEQ  ID  NO： 14所示下游引物； 扩增 A3序列的SEQ  ID NO： 15所示上游引物和SEQ  ID NO： 14所示下游 引物； 扩增 A4序列的SEQ  ID NO： 16所示上游引物和SEQ  ID NO： 17所示下游引物； 扩增 A5序 列的SEQ ID NO： 18所示上游引物和SEQ  ID NO： 19所示下游引物； 扩增A 6序列的SEQ  ID NO： 20所示上游引物和SEQ  ID NO： 21所示下游引物。说　明　书 1/6 页 3 CN 114507666 A 3