(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210207652.7 (22)申请日 2022.03.03 (71)申请人 佛山科学技术学院 地址 528200 广东省佛山市南海区狮山 镇 仙溪水库西路佛山科 学技术学院 (72)发明人 宋雨欣　裴杨莉　杨映　 (74)专利代理 机构 广州新诺专利商标事务所有 限公司 4 4100 专利代理师 许英伟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于筛选抗蓝耳病猪的生物标志物及 其应用 (57)摘要 本发明涉及一种用于筛选抗蓝耳病猪的生 物标志物及其应用， 涉及基因抗病领域。 该生物 标志物由以下PRRSV受体基因组成： CD163、 CD151 和CD169。 通过提取猪生物样本中的核 酸， 定量检 测上述生物标志物， 能够选出PRRSV特异性受体 基因表达量低的猪， 并进行扩繁 育种。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图1页 CN 114480674 A 2022.05.13 CN 114480674 A 1.一种用于筛选抗蓝耳病猪的生物标志物， 其特征在于， 该生物标志物由以下PRRSV受 体基因组成： CD16 3、 CD151和CD169。 2.一种生物标志物在筛选抗蓝耳病猪中的应用， 其特征在于， 所述生物标志物由以下 PRRSV受体基因组成： CD16 3、 CD151和CD169。 3.一种用于筛选抗蓝耳病猪的试剂盒， 其特征在于， 该试剂盒包括定量检测生物样本 中权利要求1所述的生物标志 物的试剂。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述 生物样本为血 液。 5.根据权利要求3 ‑4中任一项所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒采用实时荧光定 量PCR法检测。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述实时荧光定量PCR法中， 所述CD151 的实时荧 光定量PCR引物对为： F： CCTACCTGGCCACAGCCTAC(SEQ ID NO:1)； R： ACAGGCGCAGCAG GTTCCGA(SEQ ID NO:2)。 7.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述实时荧光定量PCR法中， 所述CD163 的实时荧 光定量PCR引物对为： F： ATTCATCATC CTCGGACCCAT(SEQ ID NO:3)； R： CCCAGCACAACGACCACCT(SEQ ID NO:4)。 8.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述实时荧光定量PCR法中， 所述CD169 的实时荧 光定量PCR引物对为： F： AGCAGC CGAACGCAGGAT(SEQ ID NO:5)； R： TTCTGGTCTTTGAGCTTCGTCC(SEQ ID NO:6)。 9.根据权利要求5所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包括以下内参所述生物标 志物的实时荧 光定量PCR引物对为： F： CTCACTGTCTG GCCTGGATG(SEQ  ID NO:7)； R： GGCGGATGGAACCCAGATAC(SEQ  ID NO:8)。 10.一种抗蓝耳病猪的筛选方法， 其特征在于， 该筛选方法包括以下步骤： 获取猪的生 物样本， 提取所述生物样本中的核酸作为待测样本， 将所述待测样本进行反转录， 得到 cDNA， 采用权利要求3 ‑9中任一项所述的试剂盒进行定量检测， 当待测样 本中的所述生物标 志物表达量低时， 则判断为PR RSV抗性强， 留用猪。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480674 A 2一种用于筛选抗蓝耳病猪的生物标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及基 因抗病领域， 特别是涉及一种用于筛选抗蓝耳病猪的生物标志物及 其应用。 背景技术 [0002]猪繁殖与呼吸综合征(Porcine  Reproductive  and Respiratory  Syndrome, PRRS)对生猪产业危害很大， 目前的防控措施不 能彻底解决P RRSV(Porcine  Reproductive   and Respiratory  Syndrome  Virus,PRRSV)带来的损失， 仍需改进。 现有技术中的CD163基 因敲除猪可以完全抵抗PRRSV， 但是基因敲除猪还不普及， 并且不明确基因敲除后对猪是否 有深远的影响； 疫苗防控存在各种缺陷， 例如弱毒疫苗可能会降低仔猪免疫力， 灭活疫苗防 控力度小等问题。 所以需要更多抗PR RSV的措施与手段。 [0003]猪繁殖与呼吸综合征(Porcine  Reproductive  and Respiratory  Syndrome， PRRS)是PRRS病毒(Porcine  Reproductive  and Respiratory  Syndrome  Virus， PRRSV)与 猪细胞上特异性受体结合侵袭宿主， 严重影响猪生殖系统和呼吸系统的疾病。 PRRSV只感染 猪， 不同年龄、 品种、 性别的猪均能感染， 其中1月龄以内的仔猪和妊娠母猪最易感。 该病以 妊娠母猪出现流产、 死胎、 木乃伊胎等生殖功能衰竭的症状以及仔猪呼吸困难、 败血症、 高 死亡率等为主要特征。 1996年， 哈尔滨兽医研究所的郭宝清等首次在中国分离出PRRSV。 2006年5月在华东、 华南大面积爆发了高致病 性猪蓝耳病， 致死率高达20％， 使我国生猪产 业蒙受了巨大的经济损失。 至今， PR RS仍然是我国养猪业重要的经济性疾病。 [0004]PRRSV是有囊膜的单股正链RNA病毒， 属于动脉炎病毒科， 动脉炎病毒属， 其基因组 为不分节的单股正链RNA， 全长约15kb具有 ’帽状结构和poly(A)尾。 含9开放阅读框， 多数相 邻的ORF之间存在部 分重叠区。 ORFl占全长的80％， 编码病毒的RNA聚合 酶等非结构蛋白， 其 余编码结构蛋白。 PRRSV的病毒粒子里球形或卵圆形， 直径约为45 ‑65nm， 呈二十面体对称， 囊膜表面有较小纤突， 在氧化钝梯度中浮密度为 1.19g/cm。 PRRSV对外界环 境的抵抗力相对 较弱， 对脂溶剂、 热、 低于或高于pH值敏感。 PRRSV分两种基因型， 分别为欧洲型和美洲型， 前 者主要流行于欧洲， 后者主要流行于美洲和亚太地区， 但近来在欧洲也分离到美洲型毒株， 在北美分离到类欧洲型的美洲型毒株。 我国目前的流行毒株仍属于美洲型。 不同的PRRSV毒 株对猪的致病力差异很大， 而且PRRSV还 可引起免疫抑制和持续性 感染。 1987年该病首发于 美国， 随后迅速在北美和欧洲广泛流行， 以后蔓延至亚太地区， 造成世界范围的大流行， 给 世界养猪业造成巨大的经济损失， 成为危害当今养猪业的主要疫病之一。 我国于1996年首 次从PRRS血清阳性猪群中分离出PRRSV， 证实我国也有该病流行。 由于没有有效的防治手 段， PRRS在国内愈演愈烈， 直接和间接造成了2006年流行我国大部 分省份的所谓 “猪无名高 热”， 又称“猪高热综合症 ”。 据粗略估计在20 06年该病导 致1000‑3000万头生猪死 亡。 [0005]PRRSV侵染细胞的过程包括吸附、 侵入、 脱壳、 病毒成分合成、 病毒粒子装配和释 放 等步骤。 吸 附是决定感染成功与否的关键环节， 需要病毒表面特异性的吸 附蛋白与细胞表 面受体相互作用。 2016年， Whitwort h等人报道， CD163基因敲除(KO)猪不感染PRRSV ‑2。 随后说　明　书 1/5 页 3 CN 114480674 A 3