(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210209528.4 (22)申请日 2022.03.03 (71)申请人 山东第一医科 大学 （山东省医学 科 学院） 地址 250117 山东省济南市槐荫区青岛路 6699号 (72)发明人 赵燕　韩金祥　崔亚洲　张严洁　 (74)专利代理 机构 广东科信启帆知识产权代理 事务所(普通 合伙) 44710 专利代理师 李波 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/04(2006.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 埃格特氏菌(Eggert hella lenta)的特异性 引物、 检测方法及试剂盒 (57)摘要 本发明涉及分子生物学领域， 具体而言， 涉 及一种埃格特氏菌(Eggerthellalenta)的特异 性引物、 检测方法及试剂盒。 本发明利用埃格特 氏菌的特异性引物对埃格特氏菌进行检测， 实现 了对疑似类风湿 关节炎患者进行粪便样本检测。 特异性好， 本发明根据16S  RNA基因序列设计引 物， 高特异性与目的基因结合。 本发明对于埃格 特氏菌高表达的RA诊断与临床治疗具有较高的 参考价值， 适于推广应用。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 114517231 A 2022.05.20 CN 114517231 A 1.埃格特氏菌的特异性引物， 其特 征在于， 包括如下引物对： 正向引物： Elen ‑F： (5′ ‑AGAGTTTGATCATG GCTCAG‑3′)； 反向引物： Elen ‑R： (5′ ‑TACGGCTACCTTGTACGACT T‑3′)。 2.一种埃格特氏菌的检测方法， 其特征在于， 所述方法包括使用权利要求1所述的特异 性引物进行PCR扩增的步骤。 3.一种埃格特氏菌检测试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括权利要求1所述的特异性 引物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114517231 A 2埃格特氏菌(Eg gerthella lenta)的特异性引物、 检测方 法及 试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学领域， 具体而言， 涉及一种埃格特氏菌(Eggerthella   lenta)的特异性引物、 检测方法及试剂盒。 背景技术 [0002]迟缓埃格特菌(Eggerthella  lenta)是一种专性厌氧革兰阳性杆菌， 生长 缓慢， 5d 内可形成肉眼可见菌落， 1935年科学家埃格特首次从人类粪便中分离出该菌， 最初归类在 厌氧杆菌属中， 19 99年完成测序后细分为埃格特菌属。 [0003]类风湿关节炎又称类风湿(Rheumatoid  arthritis,RA)， 是发病机制 还没有完全 明确的一种慢性的、 对称性的、 全身性的、 炎症性的自身免疫性疾病， 目前RA已成为危害人 类健康的重要疾病之一， RA病因复杂、 变化多样， 现研究证明RA被认为与细菌感染密切相 关， 前期研究证明RA患者的肠道菌群失衡， 并发现埃格特氏菌、 牙龈卟啉单胞菌、 拟杆菌等 显著表达失衡。 RA与骨关节炎(osteoarthritis,OA)、 银屑病关节炎、 强直性脊柱炎、 反应性 关节炎等疾病症状有相似性， 因此建立一种 更加快速鉴别诊断RA的方法， 对临床上确诊及 治疗有积极指导 意义。 [0004]RA自身抗体 的检查是目前主要诊断检查方法一般包括： 患者关节液培养、 关节滑 膜活检、 类风湿因子检测、 抗CCP抗体检测、 抗核抗体， 这些方法虽有利于RA的诊断和治疗， 但检查操作繁琐、 判断指标复杂， 而利用埃格特氏菌在RA患者肠道的富集开发的埃格特氏 菌检测试剂盒， 便成为了一种快速有效的诊断方法。 [0005]前期本研究通过三代宏基因组学检测类风湿关节炎患者(未给药半年以上， 且为 初次诊断为类风湿关节炎患者的粪便样本)6例， 用二代宏基因组学检测类风湿关节炎患者 (未给药半年以上， 且为初次诊断为类风湿 关节炎患者的粪便样 本)76例均检测出埃格特氏 菌全长DNA序列， 而在健康人的粪便中是没有的。 同时本研究在类风湿关节炎患者的关节腔 的滑膜液中用16SrDNA测序方法也检测到Eggerthella  lenta DNA片段， 申请人认为 Eggerthella  lenta同时存在肠道和关节滑膜液中这正是类风湿 关节炎“菌‑肠‑关节轴”致 病新机制的发现所在， 突破肠壁屏障， 进入血液的通路， 游离到 关节从而加速关节病变的发 生。 我们预测可以针对Eggerthella  lenta的特异性， 采用菌群移植， 口服益生菌等手段， 实 现对类风湿关节炎的早期治疗和预防。 发明内容 [0006]本发明的目的之一是提供一种埃格特氏菌的特异性引物； [0007]本发明的再一目的是提供一种埃格特氏菌的特异性检测方法； [0008]本发明的再一目的是提供用于诊断RA的检测试剂盒。 [0009]本发明解决上述 技术问题的技 术方案如下： [0010]本发明根据埃格特氏菌的线粒体DNA序列， 设计一对特异性引物， 该引物只对埃格说　明　书 1/4 页 3 CN 114517231 A 3