(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210211104.1 (22)申请日 2022.03.03 (71)申请人 重庆医科 大学附属儿童医院 地址 400014 重庆市渝中区中山 二路136号 (72)发明人 王建辉　艾青　 (74)专利代理 机构 北京海虹嘉诚知识产权代理 有限公司 1 1129 专利代理师 吕小琴 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于预测新生儿严重高未结合胆红素血症 风险的SNaPshot引物组及试剂盒 (57)摘要 本发明“用于预测新生儿严重高未结合胆红 素血症风险的SNaPshot引物组及试剂盒 ”属于分 子生物学领域和遗传病领域。 所述用于预测新生 儿严重高未结合胆红素血症风险的SNaPshot引 物组包括如下扩增引物： rs114982090_ rs34993780F、 rs114982090_rs34993780R、 rs1564370F、 rs1564370R、 rs2071747F、 rs2071747R、 rs2117032F、 rs2117032R、 rs2417940F、 rs2417940R、 rs34946978F、 rs34946978R、 rs3771341F、 rs3771341R、 rs4148323_rs35350960F、 rs4148323_ rs35350960R、 rs4149056F、 rs4149056R、 rs699512F、 rs69 9512R。 权利要求书2页 说明书20页 序列表7页 CN 114921539 A 2022.08.19 CN 114921539 A 1.用于预测新生儿严重高未结合胆红素血症风 险的SNaPshot引物组， 其特征在于， 包 括如下扩增引物： rs114982090_rs349 93780F： TGT TCCAGGCATAACGAAACTGTC rs114982090_rs349 93780R： C CCTTTTTTCCCCAAGCATTTC rs1564370F： G GGGTGAGTAAAGTGGCAGTGG rs1564370R： GT TCTGCTGCAGCTAC CCAACA rs2071747 F： AGTCAACGCCTGCCTCCTCTC rs2071747R： AC CGTTCCTCCCTCCAACTACC rs2117032F： AGACT TTTGTGTACCTGTCACCTAAGAA rs2117032R： AAAGGAGGCATTACAACTGATGCA rs2417940F： TCA AGGGCAGGAAATTAGGGTATG rs2417940R： GC CGGTGCCAAAATTCTGTATG rs34946978F： CA AATTTCTGCAAGGGCATGTG rs34946978R： CAG GGTCACTCCAGCTCCCTTA rs3771341F： CATC CTGCTGAT TGCTGAGTG G rs3771341R： AGGGTCTGCAC CACATCTCTC C rs4148323_rs3 5350960F： AGCAC CTGACGCCTCGTTGTA rs4148323_rs3 5350960R： GCCAGACAGATGCAGAGCTCA A rs4149056F： AAAGGAATCTGGGTCATACATGTG G rs4149056R： AGTCTC CCCTATTCCACGAAGCA rs699512F： GGGAATGTTTGCCTGGAGTTTG rs699512R： GGGCCTAGTTCTTCCTGCATCA。 2.根据权利要求1所述的SNaPshot引物组， 其特 征在于， 还 包括如下测序引物： rs114982090SR： TCAG GTCCAGCGGCTCCACC rs4148323SR： TCGTCT TCAAGGTGTAAAATGCTC rs2417940SR： T TTTTTTTCTGGGGAGCACATGAGT TTT rs34946978 SF： TTTTTTTTTCCTATTTTGCATCTCAG GTCACC rs2117032SR： TTTTTTTTTTTTGAGGCATTACAACTGATGCA ACT rs699512SR： T TTTTTTTTTTTTGGTCTTTGTAAAGAACTCACCTCTG rs4149056SR： TTTTTTTTTTTTTTTTTTCACGAAGCATATTACCCATGAAC rs2071747SF： T TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATGGAGCGTCCGCAACCC rs35350960SR： TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGAGGCAAGGGTTGCATAC rs1564370SR： T TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGTTCTCTTGTAGGTAGGATCCCA rs3771341SR： T TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGAAACCCACTCTTACACTGA AGCT rs34993780SR： T TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCAATCACGTC CAAGGAATGGT。 3.用于预测新生儿严重高未结合胆红素血症风 险的SNaPshot试剂盒， 其特征在于， 包 括权利要求1或2所述的引物组。 4.根据权利要求3所述的SNaPshot试剂盒， 其特 征在于， 还 包括用于PCR的常规试剂。 5.根据权利要求4所述的SNaPshot试剂盒， 其特征在于， 所述用于PCR的常规试剂选自权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114921539 A 2由下述试剂组成的组： HotStarTaq  buffer， Mg2+， dNTP， HotStarTaq  polymerase， SNaPshot   Multiplex  Kit， 超纯 水。 6.根据权利要求3 ‑5任一所述的SN aPshot试剂盒， 其特征在于， 还包括， 用于PCR产物纯 化的试剂。 7.根据权利要求6所述的SNaPshot试剂盒， 其特征在于， 所述用于PCR产物纯化的试剂 选自： SAP酶， Exo nuclease I酶。 8.根据权利要求4 ‑7任一所述的SNaPshot试剂盒， 其特征在于， 所述PCR反应程序为： 95 ℃2min； 以94℃2 0s,65℃‑0.5℃/cycle  40s， 72℃1min  30s为1个循环， 共11个循环； 以94℃ 20s,59℃3 0s,72℃1mi n30s为1个循环， 共24个 循环； 72℃2mi n； 4℃for ever； 和/或， 所述PCR反应体系包括： 0.1μl/μl  1x HotStarTaq  buffer， 0.15mM/μl  Mg2+, 0.015mM/ μl  dNTP,0.05U/ μl  HotStarTaq  polymerase， 0.05 μl/ μl样本DNA， 0.05 μl/ μl多重 PCR引物， 其 余为水。 9.根据权利要求6或7所述的SN aPshot试剂盒， 其特征在于， 所述PCR产物纯化指， 在10 μ l PCR产物中加入1U  SAP酶和1U  Exonuclease I酶， 37℃温浴1小时， 然后75℃灭活15分钟。 10.根据权利要求3所述的SNaPshot试剂盒， 其特征在于， 所述引物组中的延伸引物的 延伸反应程序为： 96℃1min； 以96℃10s,52℃5s,60℃30s为1个循环， 共28个循环； 4℃for   ever； 和/或， 所述延伸反应体系为： 0.5 μl/ μl  SNaPshot  Multiplex  Kit， 0.2 μl/ μl纯化后的 多重PCR产物， 0.1 μl/ μl延伸引物， 0.2 μl/ μl超纯 水。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114921539 A 3