(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210218413.1 (22)申请日 2022.03.04 (71)申请人 苏州市公安局 地址 215131 江苏省苏州市相城区人民路 3998号 申请人 无锡中德美联生物技 术有限公司 (72)发明人 周如华　王鑫　石云杰　张健　 陈维忠　崔扬　邵泽香　梅兴林　 李娟　史明皓　姜颖晔　范晓芸　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 代理人 余俊杰 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明公开了针对疑难检材的八色系统STR 位点复合扩增试剂盒及应用， 所述试剂盒包括2 6 个STR基因座的特异性扩增引物， 其中STR基因座 为： CSF1PO、 FGA、 TH01、 TPOX、 vWA、 D3S1358、 D5S818、 D7S820、 D8S1179、 D13S317、 D16S539、 D18S51、 D21S11、 Penta  D、 Penta E、 D6S1043、 Amelogenin、 D2S1338、 D12S391、 D19S433、 D1S1656、 D2S441、 D22S1045、 D10S1248， 及两个性 别辅助位点DYS391和Yindel。 以上所有位点最大 扩增增子在300bp内。 本发明所述试剂盒对于现 场案件中的低拷贝、 高度降解和高抑制剂等疑难 检材具有快速、 高效检测的优点； 所有基因座与 已有案件数据库兼容； 更短的扩增时间， 有利于 缩短案件排查时间， 协助公安人员迅速锁定嫌疑 人， 提高案件 破解效率。 权利要求书2页 说明书8页 序列表9页 附图4页 CN 114427004 A 2022.05.03 CN 114427004 A 1.针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括26 个STR基因座的特异性扩增引物， 其中S TR基因座为： CSF 1PO、 FGA、 TH01、 TPOX、 vWA、 D3S1358、 D5S818、 D 7S820、 D8S1179、 D13S317、 D16S539、 D18S51、 D21S11、 Penta  D、 Penta E、 D6S1043、 Amelogenin、 D2S1338、 D12S391、 D19S433、 D1S1656、 D2S441、 D22S1045、 D10S1248， 及两个性 别辅助位 点DYS391和Yi ndel。 2.根据权利要求1所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述26个基因座的特异性扩增引物序列如下： CSF1PO、 SEQ  ID NO.1～2； FGA、 SEQ  ID  NO.3～4； TH01、 SEQ  ID NO.5～6； TPOX、 SEQ  ID NO.7～8； vWA、 SEQ  ID NO.9～10； D3S1358、 SEQ ID NO.11～12； D5S818、 SEQ  ID NO.13～14； D 7S820、 SEQ  ID NO.15～16； D8S1179、 SEQ   ID NO.17～18； D13S317、 SEQ  ID NO.19～20； D16S539、 SEQ  ID NO.21～22； D18S51、 SEQ  ID  NO.23～24； D21S11、 SEQ  ID NO.25～26； Penta  D、 SEQ ID NO.27～28； Penta  E、 SEQ ID  NO.29～30； D6S1043、 SEQ  ID NO.31～32； Amelogenin、 SEQ  ID NO.33～34； D2S1338、 SEQ  ID  NO.35～36； D12S391、 SEQ  ID NO.37～38； D19S433、 SEQ  ID NO.39～40； D1S1656、 SEQ  ID  NO.41～42； D2S441、 SEQ  ID NO.43～44； D22S1045、 SEQ  ID NO.45～46； D10S1248、 SEQ  ID  NO.47～48； DYS391、 SEQ  ID NO.49～50； Yindel、 SEQ ID NO.51～52。 3.根据权利要求1所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述26个基因座的特异性扩增引物的浓度如下： SEQ  ID NO.1～2、 0.15 μM； SEQ  ID NO.3 ～4、 0.17 μM； SEQ  ID NO.5～6、 0.12 μM； SEQ  ID NO.7～8、 0.13 μM； SEQ  ID NO.9～10、 0.12 μ M； SEQ ID NO.11～12、 0.14 μM； SEQ  ID NO.13～14、 0.12 μM； SEQ  ID NO.15～16、 0.13 μM； SEQ   ID NO.17～18、 0.15μM； SEQ  ID NO.19～20、 0.14μM； SEQ  ID NO.21～22、 0.17μM； SEQ  ID  NO.23～24、 0.12 μM； SEQ  ID NO.25～26、 0.12 μM； SEQ  ID NO.27～28、 0.17 μM； SEQ  ID NO.29 ～30、 0.16 μM； SEQ  ID NO.31～32、 0.17 μM； SEQ  ID NO.33～34、 0.12 μM； SEQ  ID NO.35～36、 0.11 μM； SEQ  ID NO.37～38、 0.10 μM； SEQ  ID NO.39～40、 0.08 μM； SEQ  ID NO.41～42、 0.14 μ M； SEQ ID NO.43～44、 0.17 μM； SEQ  ID NO.45～46、 0.15 μM； SEQ  ID NO.47～48、 0.14 μM； SEQ   ID NO.49～50、 0.12 μM； SEQ  ID NO.51～52、 0.14 μM 。 4.根据权利要求1所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述26个基因座的特异性扩增引物分为7组； 具体为： D3S1358、 D1S1656、 D8S1179、 D21S11为一组； D2S441、 D13S317、 D16S539、 CS F1PO、 D10S1248为一组； Amelogenin、 Yindel、 D5S818、 TH01、 D6S1043为一组； D22S1045、 D19S433、 D7S820、 TPOX为一组； DYS391、 vWA、 D2S1338、 D12S391为 一组； FGA、 D18 S51为一组； Penta  D、 Penta E为一组。 5.根据权利要求4所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 采用荧光染料标记7组特异性扩增引物， 且对每对引物中至少一条引物的5 ’端进行标 记； 其中荧光染料为AF475、 FAM、 TET、 AF555、 AF575、 AF01或AF10， 且每组采用的荧光标记不 同。 6.根据权利要求1所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 26个STR基因座的特异性扩增引物的PCR扩增产物长度均小于 300bp。 7.根据权利要求1所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述试剂盒包括： PCR缓冲液Unique  Mix， 2mL； sdH2O， 1.95mL； PCR增强剂； 其中， PCR缓冲 液Unique  Mix成分为： 热启动U ‑Taq酶0.2U/ μL～ 0.4U/ μL， pH8.25～8.3的Tri s‑HCl 50mM～权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114427004 A 2125mM,dNTPs  5.0mM～7.5mM,KCl  50mM～125mM， BSA  2mg/ml～ 5mg/ml； PCR增强剂为聚乙二 醇、 Trito n X‑100、 聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和二硫苏糖醇中的至少一种。 8.根据权利要求1所述的针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒， 其特征在 于， 所述试剂盒包括分子内标， 具体为： 分子内标由14个片段组成， 大小分别为75bp、 100b p、 139bp、 150bp、 160bp、 200bp、 250bp、 300bp、 340bp、 350bp、 400bp、 450bp、 490bp、 500bp； 分子 内标采用橙色荧 光AF633标记。 9.权利要求1 ‑8任一所述针对疑难检材的八色系统STR位点复合扩增试剂盒在检测血 液、 精斑， 及野外环境采集的样本、 擦拭样本、 脱落细胞、 指甲中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒能够对低至30pg  DNA含量的 样本进行完整分型。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114427004 A 3