(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210215009.9 (22)申请日 2022.03.04 (71)申请人 华中农业大 学 地址 430000 湖北省武汉市洪山区狮子山 街1号 (72)发明人 杨静　汪李平　李慧红　王伟孪　 孔秋生　 (74)专利代理 机构 北京金智普华知识产权代理 有限公司 1 1401 专利代理师 张晓博 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与苦瓜果皮形态关联的分子标记及其应用 (57)摘要 本申请公开了与苦瓜果皮形态关联的分子 标记及应用。 其中， 果皮形态包括连续脊和无连 续脊两种类型； 该分子标记位于苦瓜第4号染色 体21927644bp位置处， 其多态性表现为碱基A是 否缺失， 所述分子标记所在的核苷酸序列如SEQ   ID NO.1所示， 所述分子 标记于如SEQ ID NO.1所 示中的167bp处。 本申请可以在苗期或种子时期 对苦瓜果实果皮形态进行预测， 可以鉴定出目标 性状遗传位点的纯合或杂合状况， 从而可对后代 果皮形态表型(连续脊或非连续脊)进行较准确 的预测。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图4页 CN 114457185 A 2022.05.10 CN 114457185 A 1.一种与苦瓜果皮形态关联的分子标记， 其中， 所述果皮形态包括连续脊和无连续脊 两种类型； 所述分子标记位于苦瓜第4号染色体21927644bp位置处， 其多态性表现为碱基A 是否缺失， 所述分子标记于如SEQ  ID NO.1所示中的167bp处。 2.用于特异性检测如权利要求1所述分子标记的引 物对， 包括如SEQ  ID NO.2～3所示 的核苷酸序列。 3.用于检测或预测苦瓜果皮形态的试剂 盒， 包括如权利要求2所述引物对， 以及用所述 引物对进行PCR扩增的相关试剂。 4.一种预测苦瓜果皮形态的方法， 所述果皮形态包括连续脊和无连续脊两种类型， 所 述方法包括： 提取苦瓜种子或苗期材 料的基因 组DNA； PCR扩增所述基因 组DNA， 获得扩增产物； 电泳检测所述扩增产物， 收集其中目标序列的片段， 所述目标序列的长度为2350bp左 右； 以及 测序获得所述目标序列的核苷酸序列， 并与参考序列比对， 根据比对结果预测苦瓜果 皮形态； 其中， 所述参考序列的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述PCR扩增所用的引 物对包 括如SEQ ID NO.2～3所示的核苷 酸序列； 所述比对 结果包括所述目标序列与所述参考序列 由5’端起始的第167个碱基的信息 差别。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述目标序列的基因型包括正常型和缺失 型， 所述正常型对应的苦瓜果皮表型为无连续脊类型， 所述缺失型对应的苦瓜果皮表型为 具有连续 脊的类型。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述正常型的核苷酸序列与所述参考序列 相同； 所述 缺失型相对于所述 参考序列自5 ’端起始的第167位 点的碱基A缺失。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， PCR的反应体系为： 总体积为20μL， 10μL   PCR mix， 0.5 μL上游引物， 0.5 μL下游引物， 8 μLd dH2O， 1 μLDNA； PCR反应程序设置如下： 95℃预变性4min； 94℃反应25s， 54℃反应25s， 72℃反应2 分钟， 共循环36次； 72℃延伸5mi n； 最后4℃保存10mi n。 8.权利要求1所述的分子标记、 或权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂盒 在苦瓜果皮形态鉴定中的应用。 9.权利要求1所述的分子标记、 或权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂盒 在苦瓜分子标记辅助育种中的应用。 10.权利要求1所述的分子标记、 或权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂 盒 在苦瓜种质资源改良中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457185 A 2与苦瓜果皮形 态关联的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本申请涉及苦瓜果皮形态预测技术领域， 尤其涉及与苦瓜果皮形态关联的分子标 记及其应用。 背景技术 [0002]苦瓜果实的表面结构影响其储运性能， 也决定其外观， 其若具有光滑的果皮表面 不仅不易碰伤， 使其耐于存储， 还有利于清洁以及减少农药残留。 因此， 开展针对性的苦瓜 果实外观性状育种十分重要。 苦瓜果皮形态相关基因的定位及开 发的分子标记可以为育种 者提供快速、 准确的筛选方法， 减少与育种筛选有关的土地、 人力及经济成本， 促进苦瓜育 种进程。 [0003]目前对苦瓜育种材料的苦瓜果实性状的评价是肉眼观察法， 需要在合适的生长季 节栽培， 并等到植株长到结果期、 苦瓜果 实膨大之后才能进 行观察。 为了筛选得到具有目标 性状的个体， 需要种 下大量的群体， 占用较大面积的土地， 种植成本和管理成本较高。 另外 该方法只是对材料当代表型 的鉴定， 无法鉴定出目标性状位点杂合的材料， 从而无法预测 无连续脊(显性性状)材料后代该性状的分离情况， 需要继续种植下一代才能得到稳定的表 型。 现有技 术的缺点： 受栽培季节限制； 需要占用较大的种植土地， 筛 选成本高。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本申请的目的在于能够早期对苦瓜果皮形态进行预测， 以便在苦瓜种 子时期或苗期即可筛选得到具有连续脊或非连续脊果皮的苦瓜， 以实现早期筛选的目的， 实现快速 筛选， 节省筛 选成本。 [0005]第一方面， 本申请实施例公开了一种与苦瓜果皮形态关联的分子标记， 其中， 所述 果皮形态包括连续脊和无连续脊两种类型； 所述分子标记位于苦瓜第4号染色体 21927644bp位置处， 其多态性表现为碱基A是否缺失， 所述分子标记于如SEQ  ID NO.1所示 中的167bp处。 [0006]第二方面， 本申请实施例公开了用于特异性检测第一方面所述分子标记的引物 对， 包括如SEQ  ID NO.2～3所示的核苷酸序列。 [0007]第三方面， 本申请实施例公开了用于检测或预测苦瓜果皮形态的试剂盒， 包括第 二方面所述引物对的试剂盒。 [0008]第四方面， 本申请实施例公开了一种预测苦瓜果皮形态的方法， 所述果皮形态包 括连续脊和无连续脊两种类型， 所述方法包括： [0009]提取苦瓜种子或苗期材 料的基因 组DNA； [0010]PCR扩增所述基因 组DNA， 获得扩增产物； [0011]电泳检测所述DNA片段， 收集其中 目标序列的片段， 所述目标序列的长度为2350bp 左右； 以及 [0012]测序获得所述目标序列的核苷酸序列， 并与参考序列比对， 根据比对结果预测苦说　明　书 1/4 页 3 CN 114457185 A 3