(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210212358.5 (22)申请日 2022.03.04 (71)申请人 广州迪澳医疗科技有限公司 地址 510000 广东省广州市黄埔区科丰路 31号G11栋602房 (72)发明人 陈皇佑　刘教　 (74)专利代理 机构 广州博联知识产权代理有限 公司 44663 专利代理师 宋佳 (51)Int.Cl. C12M 1/34(2006.01) C12M 1/00(2006.01) B01L 3/00(2006.01) C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/32(2006.01) C12R 1/325(2006.01) C12R 1/33(2006.01) (54)发明名称 一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流 控检测系统 (57)摘要 本发明涉及一种用于非结核分枝杆菌菌种 鉴定的微流控检测系统， 该检测系统利用微流控 芯片进行检测， 所述微流控芯片包括芯片本体， 所述芯片本体设有加样孔、 主 流道、 微流道、 反应 孔； 所述反应孔包括阳性质控孔、 阳性对照孔和 至少一个检测孔； 所述加样孔与所述主流道连 通； 每个反应孔分别通过所述微流道与所述主流 道连通； 每个所述检测孔中， 含有一种非结核分 枝杆菌的特异性检测引物组。 通过该微流控监测 系统， 可以在等温条件下对十余种非结核分枝 杆 菌菌种同时进行特异性检测， 具有特异性好、 灵 敏度高、 操作简单、 检测迅速等优点， 具有良好的 临床应用前 景。 权利要求书2页 说明书8页 序列表10页 附图6页 CN 114456914 A 2022.05.10 CN 114456914 A 1.一种微流控芯片， 其特征在于， 包括芯片本体， 所述芯片本体设有加样孔、 主流道、 微 流道、 反应孔； 所述反应孔包括阳性质控孔、 阳性对照孔和至少一个 检测孔； 所述加样孔与所述主流道连通； 每个反应孔分别通过所述微流道与所述主流道连通； 每个所述检测孔中， 含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组。 2.如权利要求1所述的微流控芯片， 其特征在于， 所述反应孔与 所述主流道之间还设有 缓冲孔。 3.如权利要求1所述的微流控芯片， 其特征在于， 所述阳性质控孔和阳性对照孔相对于 所述检测孔设置 于所述加样孔的远端。 4.如权利要求1所述的微流控芯片， 其特征在于， 进一步， 所述非结核分枝杆菌包括胞 内分枝杆菌、 鸟分枝杆菌、 龟分枝杆菌、 苏尔加分枝杆菌、 猿分枝杆菌、 海分枝杆菌、 土地分 枝杆菌、 戈登 分枝杆菌、 堪萨斯分枝杆菌、 偶发分枝杆菌； 优选地， 所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物 组包括正向外引物F3、 反向外引物B3、 正向内引物FIP、 反向内引物BIP、 正向环引物LF、 反向环引物LB。 5.如权利要求4所述的微流控芯片， 其特征在于， 所述非结核分枝杆菌的特异性检测引 物组包括： 胞内分枝杆菌特异性检测引物组： 正向外引 物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 1； 反向外 引物B3， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 2； 正向内引物FIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 3； 反向内引 物BIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 4； 正向环引物LF， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 5； 反向环引物LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 6； 鸟分枝杆菌特异性检测引 物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 7； 反向外引 物B3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 8； 正向内引物FIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 9； 反向内引物 BIP， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 10； 正向环引物LF， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 11； 反向环引物 LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 12； 龟分枝杆菌检测用引物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 13； 反向外引物 B3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 14； 正向内引物FIP， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 15； 反向内引物 BIP， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 16； 正向环引物LF， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 17； 反向环引物 LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 18； 苏尔加分枝杆菌特异性检测引物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 19； 反向 外引物B3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 20； 正向内引物FIP， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 21； 反向 内引物BIP， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 22； 正向环引物LF， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 23； 反向 环引物LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 24； 猿分枝杆菌特异性检测引物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 25； 反向外引 物B3， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 26； 正向内引物FIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 27； 反向内引 物BIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 28； 正向环引物LF， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 29； 反向环引 物LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 30； 海分枝杆菌特异性检测引物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 31； 反向外引 物B3， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 32； 正向内引物FIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 33； 反向内引权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114456914 A 2物BIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 34； 正向环引物LF， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 35； 反向环引 物LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 36； 土地分枝杆菌特异性检测引物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 37； 反向外 引物B3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 38； 正向内引物FIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 39； 反向内 引物BIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 40； 正向环引物LF， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 41； 反向环 引物LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 42； 戈登分枝杆菌特异性检测引物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 43； 反向外 引物B3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 44； 正向内引物FIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 45； 反向内 引物BIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 46； 正向环引物LF， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 47； 反向环 引物LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 48； 堪萨斯分枝杆菌特异性检测引物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 49； 反向 外引物B3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 50； 正向内引物FIP， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 51； 反向 内引物BIP， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 52； 正向环引物LF， 其核 酸序列为SEQ  ID NO： 53； 反向 环引物LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 54； 偶发分枝杆菌特异性检测引物组： 正向外引物F3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 55； 反向外 引物B3， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 56； 正向内引物FIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 57； 反向内 引物BIP， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 58； 正向环引物LF， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 59； 反向环 引物LB， 其核酸序列为SEQ  ID NO： 60。 6.如权利要求4或5所述的微流控芯片， 其特征在于， 每个检测孔含有一种非结核分枝 杆菌的特异性检测引物组， 其中， 正向内引物FIP和反向内引物BIP的浓度为80 μM， 正向外引 物F3和反向外引物B3的浓度为10 μM， 正向环引物LF和反向环引物LB的浓度为 40 μM。 7.一种非结核分枝杆菌的特异性检测方法， 其特征在于， 包括采用权利要求1 ‑6任一项 所述的微 流控芯片进行检测。 8.如权利要求7所述的检测方法， 其特征在于， 包括： 提供所述微流控芯片； 通过所述加 样孔加入待测样本溶 液， 使待测样本溶 液分布于所述反应孔， 进行等温扩增检测。 9.如权利要求8所述的检测方法， 其特 征在于， 所述待测样本溶 液包含待测模板DNA； 优选地， 所述待测样本溶液包括： Tris， KCL， MgSO4， NaH2PO4， Tween， dNTPs， 甜菜碱， Bst 酶， SYTO‑9绿色荧光核酸染色剂， 待测模板DNA， 灭菌水； 优选地， 所述待测 样本溶液中， Tris的浓度为15 ‑25mM， KCL的浓度为7 ‑15mM， MgSO4的浓 度为5‑10mM， NaH2PO4的浓度为5 ‑15mM， Tween的浓度为0.4 ‑1mM， dNTPs的浓度为1 ‑2mM， 甜菜 碱的浓度为0.5 ‑1.5M。