(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210213125.7 (22)申请日 2022.03.04 (71)申请人 中国医学 科学院北京协和医院 地址 100070 北京市东城区王府井帅府园1 号 (72)发明人 王含必　邓成艳　刘思邈　张婉玉　 孔令印　 (74)专利代理 机构 北京慧尚知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 11743 专利代理师 张艳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G01N 33/68(2006.01) A61K 45/00(2006.01)A61P 15/00(2006.01) (54)发明名称 miR-663a或其靶基因CKDN2A在薄型子宫内 膜中的应用 (57)摘要 本发明涉及生物医药技术领域， 具体涉及 miR‑663a或其靶基因CKDN2A在薄型子宫内膜中 的应用。 本发明公开了检测miR ‑663a或其靶基因 CKDN2A表达水平的试剂在制备检测薄型子宫内 膜的产品中的应用。 进一步， 本发明还公开了一 种缓解或修复缺氧损伤EEC的生物制剂及其应 用。 本发明通过转录组测序技术筛选 出miR‑663， 细胞功能实验和Western  blot实验显示， miR ‑ 663可显著抑制EEC缺氧损伤发生， 并且这种抑制 能够通过靶基因CDKN2A实现， 为 薄型子宫内膜的 治疗提供了新的思路。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图7页 CN 114657241 A 2022.06.24 CN 114657241 A 1.检测miR‑663a或其靶基因CKDN2A表达水平的试剂在制备检测 薄型子宫内膜的产品 中的应用。 2.如权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述miR ‑663a在缺氧损伤EEC中下调； 所述 CKDN2A在缺氧损伤E EC中上调。 3.如权利要求1或2所述的用途， 其特征在于， 所述检测miR ‑663a表达水平的试剂包括 检测miR‑663a的特异性引物； 所述检测CKDN2A表达水平的试剂包括检测CKDN2A的特异性引 物或抗体。 4.如权利 要求3所述的用途， 其特征在于， 所述检测miR ‑663a的特异性引物的核苷酸序 列如SEQ ID NO:1‑3所示； 所述检测CKDN2A的特异性引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:4‑5所 示。 5.一种缓解或修复缺氧损伤EEC的生物制 剂， 其特征在于， 所述生物制 剂中包含过表达 miR‑663a物质和/或下调其靶基因CKDN2 A表达的物质。 6.如权利要求5所述的生物制 剂， 其特征在于， 所述生物制 剂还包括人脐带间充质干细 胞分泌的外泌体。 7.权利要求5或6所述的生物制剂在预防或治疗薄型子宫内膜产品中的应用。 8.如权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述薄型子宫内膜的类型为由缺氧引起的薄 型子宫内膜。 9.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述miR ‑663a抑制CDKN2A的表达 并且能够修 复EEC缺氧损伤。 10.预防和/或治疗缺氧引起的薄型子宫内膜的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组 合物中包 含过表达miR ‑663a物质和/或抑制CDKN2 A的表达的物质。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114657241 A 2miR‑663a或其靶基因CKDN2A在薄型子宫内膜中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 具体涉及miR ‑663a或其靶基因CKDN2A在薄型子宫 内膜中的应用。 背景技术 [0002]薄型子宫 内膜指排卵前子宫内膜厚度≤7mm， 病理特征显示为腺上皮生长缓慢， 子 宫动脉血流阻力高， 血管生 成不良和血管内皮生长因子低表达。 研究显示， 薄型子 宫内膜在 种植窗期(月经第20 ‑24d)容受性下降， 血管内皮细胞生长因子VEGF及 整合素β 3表达严重缺 乏， 影响胚胎植入和着床， 是导致临床不孕不育的高发因素。 临床上 因薄型子宫内膜导致不 孕症的发生率越来越高， 有部分患者因内膜因素无法受孕， 辅助生殖技术给不孕不育患者 带来了希望， 但仍无法解决薄型子 宫内膜的问题， 由于内膜问题导致的低妊娠率尤为突出。 在胚胎质量既定的情况下， 子宫内膜作为胚胎着床和发育的 “土壤”， 在妊娠中起着举足轻 重的作用， 因此改善子 宫内膜容受性是治疗不孕的关键。 子宫内膜损伤病因， 目前研究认 为 是多因素诱 发引起的女性子 宫内膜损伤， 包括感染(结核杆菌感染)、 激素分泌失调、 子 宫内 膜及卵巢血流动力学改变、 刮宫术、 医源性损伤及炎症因子刺激等引起的， 包括薄型子 宫内 膜、 子宫内膜 异位、 子宫内膜粘连、 薄型子宫内膜伴宫腔粘连等病症。 [0003]在导致薄型子宫内膜发生的众多因素中， 内膜内血管缺血或血流减慢导致子宫内 膜细胞缺氧这一治病因素引起科研人员的广泛关注。 但是， 目前对于薄型子宫内膜的分子 机理研究尚浅。 已有研究证实薄型子 宫内膜中VE GF、 LIF和整合素β 3等与细胞生长和血管生 成相关的因子表达显著降低； 使用干细胞外泌体治疗后， VEGF、 LIF和整合素β 3等分子的表 达明显上升， 与正常组织水平相当， 但其内在分子机制尚不清晰。 因此， 需要进一步的深入 探究干细胞外泌体修复薄型子宫内膜的潜在分子 机理。 [0004]而干细胞分泌的外泌体内含有大量miRNA， 对多种疾病具有治疗作用， 因此本 发明 深入探究了 外泌体miRNA对薄型子宫内膜的修复作用及其潜在的分子 机制。 发明内容 [0005]为了寻找与薄型子宫 内膜发生、 发展有 关的miRNA， 本 发明一个目的在 于提供miR ‑ 663a及其靶基因CKDN2 A在制备诊断、 预防和/或治疗薄型子宫内膜产品中的应用。 [0006]为实现上述目的， 本发明具体技 术方案如下： [0007]本发明第一方面提供了检测miR ‑663a或其靶基因CKDN2A表达水平的试剂在制备 检测薄型子宫内膜的产品中的应用。 [0008]所述miR‑663a选自以下组中的至少一种： miR ‑663a初始miRNA、 miR ‑663a前体 miRNA、 成熟miR ‑663a； 所述miR ‑663a初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miR ‑ 663a； 所述miR ‑663a前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成 成熟miR‑663a。 [0009]虽然在某 些具体实施方式中所使用的是成熟miR ‑663a， 但是本领域技术人员可以 预期， 初始miRNA(pi ‑miR‑663a)、 前体miRNA(p re‑miR‑663a)将可以获得与成熟miR ‑663a同说　明　书 1/8 页 3 CN 114657241 A 3